响应面法优化鲟鱼精蛋白肽的酶解提取

对鲟鱼-甲骨板加工副产物精巢组织进行酶法提取,建立最佳提取工艺,从而得到功能活性鱼精蛋白肽。实验发现木瓜蛋白酶对鱼精蛋白的酶解度显著高于胃蛋白酶和胰蛋白酶。在以木瓜蛋白酶添加量、液料比、pH值、酶解时间和酶解温度值等条件为对象的单因素实验基础上进一步通过响应面法利用Box-Behnken试验设计原理构建鱼精蛋白肽的酶解提取模型,并得到最佳提取工艺条件:液料比为39.72,木瓜蛋白酶添加量3%,酶解pH 7.0,温度55℃,时间8.22 h。该条件下鱼精蛋白水解度达5.44%,且该鱼精蛋白肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制显著。

鱼精蛋白对寡核苷酸复合物的缩合作用及其对转染效果的影响

目的观察鱼精蛋白对寡核甘酸复合物的缩合效果。方法用不同浓度鱼精蛋白对寡核甘酸进行缩合,凝胶电泳和扫描电镜观测其缩合结果。将设计的双功能肽与鱼精蛋白和寡核甘酸缩合物进行不同浓度配比后转染脐静脉内皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察寡核甘酸入胞效果。结果在鱼精蛋白与寡核甘酸质量比达到1.6∶1以上时能够明显促使寡核甘酸缩合,扫描电镜下观察发现优于脂质体LipofetamineTM2000对该寡核甘酸的缩合。当功能肽与鱼精蛋白和寡核甘酸缩合物以质量比1∶5-1∶10配比复合时能够促使寡核甘酸进入脐静脉内皮细胞且转染率较高。结论优化的双功能肽-鱼精蛋白-寡核苷酸复合法,能够有效地缩合寡核苷酸,并促进寡核甘酸向脐静脉内皮细胞胞内转移。