大黄鱼血清IgM纯化及其兔抗血清的制备

分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测。结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右。用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶40 960的兔抗鱼IgM血清。本实验所建立的蛋白A亲和层析法提取大黄鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。本研究所制备的兔抗大黄鱼IgM血清可为今后的相关研究工作打下基础。

草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备

采用盐析法、重组蛋白A(HiTrapr Protein A Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清。结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78kD和28kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProtein A亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78kD)和轻链(28kD)。Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78kD及28kD条带发生发应。rProtein A亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法。将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87mg和4.5mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%。本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础。

乐果、对硫磷与鱼血清白蛋白相互作用

首次依据有机磷的极性应用荧光光谱、紫外吸收光谱、同步荧光研究了在生理条件下(pH=7.4)乐果和对硫磷与鱼血清白蛋白(Fish Serum Albumin,FSA)的相互作用。推断FSA-乐果体系的作用力以氢键和范德华力为主、FSA-对硫磷体系的作用力以疏水作用力为主,FSA与乐果、对硫磷之间存在着非辐射能量转移。

“鱼血清”抗菌活性的研究

测定了“鱼血清”对 5种致病菌在营养肉汤中的最低抑菌浓度 (MIC )。结果表明 :“鱼血清”对多数菌的MIC在 0 .1 2 2～ 0 .2 4 4 μg/mL之间 ,说明该药对常见淡水鱼类病原菌有较强的抑制作用。对淡水鱼类细菌性败血症 2株致病菌的体内抗菌活性表明 :采用药浴用量为 3μg/mL ,先给药后感染 ,保护率为 1 0 0 0 %;先感染后给药 ,保护率分别为 60 0 %、83 3%。

鱼虾混养养殖模式对罗非鱼血清免疫指标的影响

罗非鱼是原产于非洲Tilapia属鱼类的统称,因其具有适应力强、生长速度快、抗逆性强、食性广等优势,早已成为世界性的养殖鱼类。中国罗非鱼的主产区在广东、海南、广西等省区,养殖范围广,2016年出口创汇达12.23亿美元,具有良好的经济效益。近年来,罗非鱼养殖业面临着病害频发、价格低迷、养殖成本升高、抗生素残留等诸多问题,导致其出口受限,严重制约着我国罗非鱼产业的发展。

鱼血清蛋白质的微型双相电泳分析

本文采用改进的微型双相电泳系统，对兴国红鲤、草鱼及其杂交鱼血清蛋白质进行了分析，获得较清晰而稳定的结果，分析得出杂交鱼的血清蛋白质的组成更接近于父本草鱼。实验表明微型双相电泳是进行鱼类血清蛋白质分析的灵敏而有效的方法。

美洲黑石斑鱼血清IgM纯化及其兔抗血清部分特性

采用蛋白A亲和层析法对健康美洲黑石斑鱼血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化。实验结果表明,蛋白A亲和层析法一步纯化即可得到电泳纯IgM,其重链和轻链的分子量约74.1 ku和26.0 ku。用纯化的黑石斑鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶128 000的兔抗黑石斑鱼IgM血清。Western-blot和间接ELISA检测证明,本工作制备的兔抗美洲黑石斑鱼IgM血清具有较高的特异性,为后续的黑石斑鱼免疫学研究奠定了基础。

鲤鱼肝原代细胞的分离与培养方法

本研究在酶消化法的基础上,通过比较不同的肝组织分离和培养条件,获得鲤鱼肝原代细胞培养的最佳培养方法和条件。首先,结合细胞数量和台盼蓝染色所得的细胞存活率,比较了胰蛋白酶消化鲤鱼肝组织的不同反应温度和时间,结果表明:肝组织用0.25%(m/V)胰蛋白酶在25℃消化40 min时细胞分离效果最好。其次,经酶消化得到的肝原代细胞粗制液,设置4种不同的细胞纯化和培养条件:1)将细胞直接重悬于含10%胚牛血清(FBS)的L-15/DMEM培养基中培养;2)以10%鲤鱼血清取代培养基中的胚牛血清重悬细胞并培养;3)将细胞经Percoll液密度梯度离心纯化后,重悬于含10%胚牛血清的L-15/DMEM培养基中培养;4)细胞经Percoll纯化后,重悬于含10%鲤鱼血清的L-15/DMEM培养基中培养。利用光学显微镜观察肝细胞的形态,进而通过HE染色法检测,结果表明经Percoll纯化后,肝细胞纯度显著提高;采用MTS/PMS法检测肝细胞的增殖情况,结果表明鲤鱼血清代替胚牛血清培养细胞,肝细胞活力显著提高。本研究将为建立稳定的毒理学肝原代细胞实验模型奠定基础。

用鱼脑胆碱酯酶和血清转氨酶监测水库的污染

鱼体生理生化指标的变化可以用来监测天然水体被综合污染的情况。 为了调查G水库水体污染情况,我们于1974年9—10月和1975年9月先后两次去G水库,对其中白鲢、鲤鱼和鲫鱼的的脑胆碱酯酶和血清中两种转氨酶——谷草转氨酶(SGOT)和谷雨转氨酶(SGPT)的活性进行定量测定,将其数据和未受污染的M水库中同种鱼进行比较,以此说明G水库的污染程度。 鱼脑胆碱酯酶的活性可用于检查天然水体被有机磷农药。

壳聚糖-激素药条埋植技术初探

采用壳聚糖-激素共沉淀方法,制备了新型的壳聚糖-甲基睾酮(chitosan-MT)激素埋植药条.药条埋植于实验鱼8天和15天后分别取血样检测GtH含量和解剖实验鱼观察药条的缓释情况,采用放射免疫检法检测血清GtH含量,结果表明,chitosan-MT埋植8天和15天后雄鱼的血清GtH平均含量分别提高到原来的4.36倍和4.53倍;而雌鱼的GtH含量分别是实验前的2.76倍和2.74倍;但同时期取样的雌、雄对照组鲤鱼血清GtH平均含量没有明显差异.由此可见,制备的chitosan-MT药条能在鲤鱼机体内稳定而缓慢释放,并能通过正反馈途径促进GnRH的释放,从而使血清GtH含量增加.

酵母代谢物对杂交鲟主要免疫指标及其抗病力影响的研究

夏季高温鲟鱼易发生细菌性疾病,研究发现高水温可使杂交鲟非特异性免疫降低,分析这个原因可能是导致其抗病力降低的主要原因。因此,2015年本团队研究了三种温度下投喂添加8‰酵母培代谢物的饲料对杂交鲟主要免疫指标及其抗病力影响的研究。测定了红细胞、白细胞数量、吞噬细胞免疫学指标的变化及血清中溶菌酶。

草鱼夏花当年养成商品鱼试验

利用省水产科学研究所研制的防治草鱼“三病”的中草药——“鱼血清”,1999年-2000年在4.7亩池塘进行草鱼夏花当年养成商品鱼试验,1999年投放夏花草鱼20000尾,年产草鱼9129.5kg,成活率86％,商品率72.7％,投入产出比1:1.28;2000年投放夏花草鱼12000尾,年产草鱼8020kg,成活率95％,商品率85％,投入产出比1:1.49。

草鱼种防病高产试验

草鱼出血病、肠炎病和烂鳃病是由病毒和细菌引起的危害极其严重的疾病。这几种疾病在我国各养殖地区都有不同程度的流行,每年的4—10月份为流行季节。发病极为迅猛,且蔓延快,可造成池养草鱼大批死亡,尤其对鱼种更为严重。所以,草鱼病的预防是养殖生产中重要的一环。对于草鱼病的防治,多年来相继研究出了人工注射疫苗和其它一些化学药物的防治方法,均取得了不同程度的效果。但是,