猪伪狂犬病病毒鲁A株的分离鉴定

从山东省某些猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒 ,对其中一代表毒株进行了全面鉴定。该分离毒株在兔肾原代细胞 ( RK)上和鸡胚成纤维细胞 ( CEF)上连传 5代 ,均出现典型细胞病变 ,再接种于 RK- 13细胞、BHK- 2 1细胞、Vero细胞、PK15细胞和 14 3TK- 细胞 ,均出现典型细胞病变 ;在 RK- 13细胞上的 TCID50 为10 - 6 .52 / 0 .1m L ;在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子 ;对氯仿、乙醚敏感 ,5 6℃ 30 m in灭活 ;能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和 ;病毒接种于家兔和小鼠 ,均出现典型伪狂犬病症状与病变 ;提取所分离病毒的 DNA作为模板 ,应用特异性引物 ,以 PCR方法可扩增出伪狂犬病病毒 g D基因中 2 72～ 5 34nt之间 2 6 2 bp长的特异性片段。上述结果证明 ,所分离病毒为猪伪狂犬病病毒 ,并将其命名为猪伪狂犬病病毒鲁

猪伪狂犬病毒鲁A株TK基因的序列测定及其结构功能与进化分析

对猪伪狂犬病毒鲁A株 (PRVLA株 )TK基因进行了克隆和序列测定 ,并分析比较了该序列与PRVNIA - 3株、Ea株、SH以及HSV - 1和VZV的同源性 ,结果表明 :在全长 10 4 8bp的DNA序列中 ,包括着一个 96 3bp的开放阅读框 (ORF) ,可编码 32 0个氯基酸组成的多肽 ;在整个TK基因的ORF内 ,PRVLA株与PRVNIA - 3株、PRVEa株、PRVSH株、HSV - 1、VZV的TK基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98 9%、99 5 %、99 3%、36 4 %、39 1% ,氨基酸的同源性分别为 98 4 %、99 7%、98 7%、36 6 %、37 2 %。PRVLA株TK具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。将PRV -LATK、人类和小鼠的胸苷酸激酶、人类脱氧胞苷激酶、人类腺苷酸激酶的对应于这两个亚结构域的氨基酸用DNAStar分析的进化树表明 ,疱疹病毒的TK与人类和小鼠的胸苷酸激酶的亲缘关系比与人类脱氧胞嘧啶激酶的亲缘关系更近 。