鲍内脏多糖的抗氧化活性

为研究鲍内脏多糖的抗氧化活性,采用体外抗氧化实验,评价不同化学组成的鲍内脏多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和·OH的清除作用,并以人体肝细胞LO2建立过氧化氢损伤模型,探讨鲍内脏多糖在细胞水平的抗氧化能力。结果表明:鲍内脏多糖CAVP、AVP1、AVP2具有良好的清除体外自由基能力。多糖CAVP、AVP1、AVP2清除DPPH自由基的半抑制率浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为1.46、1.74、1.55 mg/m L。其清除·OH的IC50分别为7.14、15.27、8.11 mg/m L。另外,细胞模型法评价结果显示,鲍内脏多糖CAVP、AVP1、AVP2在质量浓度0.5~4.0 mg/m L条件下对肝细胞LO2的H2O2氧化损伤有保护作用,3种多糖样品均能显著提高LO2细胞存活率;CAVP(4.0 mg/m L)、AVP1(0.5 mg/m L)和AVP2(0.5 mg/m L)能极显著降低氧化损伤时乳酸脱氢酶的释放;CAVP能极显著提高LO2细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)(4.0 mg/m L)、过氧化氢酶(catalase,CAT)(0.5 mg/m L)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)(0.5 mg/m L)活力;AVP1质量浓度为4.0 mg/m L时,能极显著提高LO2细胞内GSH-Px、SOD活力,显著提高CAT活力;AVP2分别在质量浓度0.5、4.0 mg/m L时极显著提高LO2细胞内CAT活力;在质量浓度为4.0 mg/m L时,3种多糖样品对降低细胞氧化损伤产生的丙二醛(malondialdehyde,MDA)均有显著作用。因此,鲍内脏多糖是一类潜在的抗氧化物,可用于此类功能食品的开发。

鲍内脏酶解工艺条件的优化

目的建立鲍内脏酶解工艺条件,为鲍内脏多糖、多肽的工业化生产提供参考。方法以多糖提取率和蛋白质水解度为指标,研究p H值、提取温度、料液比、加酶量和酶解时间等因素对鲍内脏酶解效果的影响,运用响应面设计优化酶解工艺参数。结果选用木瓜蛋白酶与胰蛋白酶对鲍内脏进行复合酶解,适宜的酶解条件为p H 8.0、酶解温度40℃、料液比1:40,加酶量3000 U/g,在此条件下,比较不同酶解时间对酶解产物的影响,发现多糖提取率在酶解6 h时达到最大,为16.58%,而酶解液的水溶性蛋白含量、蛋白质水解度和对DPPH清除率均随酶解时间的延长而增加。结论木瓜蛋白酶与胰蛋白酶复合酶解鲍内脏效果良好,能够获得较高的多糖提取率,酶解液具有良好的清除DPPH活性。

鲍内脏肽粉的抗氧化活性研究

建立了酒精诱导的氧化应激小鼠模型,通过检测模型组、对照组和各给药组的小鼠血清和肝脏组织中的丙二醛(MDA)、蛋白质羰基含量(PCO)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的变化来评价鲍内脏肽粉(AVPP)的抗氧化活性.结果表明,长期低浓度的酒精摄入可显著提高小鼠的MDA和PCO含量,降低T-SOD和T-AOC活力(P<0.05),对小鼠具有一定的氧化损伤作用,建模方式可行.AVPP可显著降低模型小鼠的MDA和PCO含量,提高T-SOD、T-AOC、GSH和GSH-PX活力,对小鼠的氧化损伤可起到保护作用,具有较好的抗氧化活性.

鲍内脏蛋白肽抗氧化和免疫调节活性

以鲍内脏为原料,通过碱性蛋白酶酶解,结合超滤方法,制备了鲍内脏蛋白肽样品。经高效液相色谱检测,分子质量主要分布在192~938 Da,占比76.3%。鲍内脏蛋白肽具有一定的体外自由基清除能力,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的最大清除率为32.7%,对羟自由基清除率的半抑制浓度为2.1 mg/mL,对自由基的清除效果远低于VC。鲍内脏蛋白肽具有较好的体内抗氧化活性,能极显著增强受伤小鼠体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和提高还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)含量,明显降低丙二醛(malonaldehyde,MDA)和蛋白质羰基含量,鲍内脏蛋白肽中剂量组SOD活力和GSH含量分别提高了33.2%和1.3倍,MDA和蛋白质羰基含量分别降低43.9%和40.7%,其效果已接近或超过了阳性对照的水平,且呈现一定的剂量效应关系。免疫活性实验结果表明,与空白对照组相比,鲍内脏蛋白肽中剂量组小鼠足跖增厚提高了77.1%,抗体水平提高了28.0%,脾脏指数提高24.9%,胸腺指数提高了1.2倍,鲍内脏蛋白肽可以从细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫、免疫器官4个方面增强小鼠免疫功能,且效果优于阳性对照。

鲍内脏功能成分及其活性研究进展

随着鲍养殖产量的逐年增加和鲍加工业的快速发展,占鲍体重将近三分之一的鲍内脏的合理利用就成了鲍加工企业亟待解决的一大问题。鲍内脏富含多糖、蛋白质、多肽、氨基酸、脂肪酸等生理活性成分,被直接丢弃不仅浪费资源,还污染环境。因此,以鲍内脏为原料进行高值化开发利用,对增加水产加工企业的综合经济效益具有重要的意义。本文对鲍内脏中活性成分的提取、分离纯化、结构鉴定及功效等方面的研究现状进行了归纳与总结,重点对鲍内脏化学成分的抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力、抗疲劳和降血脂等功效活性进行了详述,为鲍内脏活性物质在食品、保健品、医药等领域的进一步研究开发提供了理论基础。

利用Illumina Miseq测序技术研究鲍内脏多肽对小鼠肠道微生物的影响

[目的]研究鲍内脏活性物质对小鼠肠道微生物的影响。[方法]从鲍内脏中制备多肽并灌胃小鼠,利用Illumina Miseq测序技术分析小鼠肠道微生物的群落结构及动态变化。[结果]门水平上,小鼠肠道微生物最优势菌群为拟杆菌门(Bacteroidetes),占总序列的69.10%;其次为厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),分别占总序列的23.50%和5.00%,变形菌门又以δ-变形菌纲居多。属水平上,最优势类群为拟杆菌目(Bacteroidales)的一个未知分类属,占30.33%;其次为拟普雷沃菌属(Alloprevotella)和拟杆菌属(Bacteroides),分别占12.47%和9.80%。灌胃鲍内脏多肽后,小鼠肠道中丰度前30位的菌属中有4个属的丰度上调,其中副拟杆菌属(Parabacteroides)的丰度显著上调。丰度下调的属有7个,其中毛螺菌科(Lachnospiraceae)一个未分类属和厌氧支原体属(Anaeroplasma)丰度显著下调。[结论]灌胃鲍内脏多肽后小鼠肠道微生物多样性呈增加的趋势,且在小鼠肠道中检测到一些与宿主健康相关的差异细菌类群。

鲍内脏多糖体内抗氧化及增强小鼠免疫活性

为研究鲍内脏多糖(abalone visceral polysaccharides,AVP)体内抗氧化及增强小鼠免疫活性作用,采用乙醇氧化损伤模型动物实验设计和正常小鼠增强小鼠免疫力实验设计,通过测定实验小鼠肝脏超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力,谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和蛋白质羰基含量综合评价AVP的体内抗氧化能力;通过测定正常实验小鼠免疫器官指数、足跖增厚、溶血素抗体水平、吞噬指数α,从免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫以及非特异性免疫方面综合评价AVP增强小鼠免疫活性能力。结果表明:AVP显著提高氧化损伤模型小鼠肝脏SOD活力和GSH含量(P<0.05),显著降低小鼠肝脏MDA含量和蛋白质羰基含量(P<0.05),表现出良好的体内抗氧化能力;AVP能极显著提高正常小鼠脾脏指数和胸腺指数、足跖增厚和血清溶血素水平(P<0.01),显著提升小鼠吞噬指数(P<0.05),在免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫以及非特异性免疫4个方面均表现出较好的增强小鼠免疫活性效果;另外,数据表明AVP体内抗氧化及增强小鼠免疫活性作用与其剂量呈正相关性。鲍内脏多糖是一种具有良好的抗氧化和增强免疫活性的物质,为鲍内脏的精深加工与产业化开发提供了理论依据。

投喂鲍内脏多糖对罗非鱼肠道菌群结构的影响

利用PCR-DGGE和Illumina测序技术研究了罗非鱼(Oreochromisniloticus)肠道菌群结构及饲喂鲍内脏多糖后罗非鱼肠道菌群的动态变化。在罗非鱼肠道中检测到13个门的细菌,其中梭杆菌门(Fusobacteria,77.84%)为优势菌门,拟杆菌门(Bacteroidetes, 8.59%)、衣原体门(Chlamydiae, 6.18%)、变形菌门(Proteobacteria, 5.84%)和放线菌门(Actinobacteria, 1.20%)为次优势菌门,还检测到Saccharibacteria等8个菌门和一些未知类群。在属的水平上,优势菌属为鲸杆菌属(Cetobacterium)、Neochlamydia、邻单胞菌属(Plesiomonas)和不动杆菌属(Acinetobacter),分别占77.84%、5.796%、2.64%和1.13%,还有一个紫单胞菌科(Porphyromonadaceae)的未知属,占8.29%。此外还有分枝杆菌属(Mycobacterium)等6个菌属和一些未知属。投喂添加鲍多糖的饲料对罗非鱼肠道微生物的构成造成了明显影响,饲喂鲍多糖的处理组和饲喂普通饲料的对照组样品分别聚为两大类。投喂添加鲍多糖饲料后,放线菌门、Saccharibacteria、疣微菌门和TM6_Dependentiae的丰度显著下调;在属的水平上,邻单胞菌属、鲸杆菌属的丰度上调;Neochlamydia、不动杆菌属、分枝杆菌属、Alsobacter、Aquicella、假单胞菌属、气单胞菌属、Alpinimonas等属的丰度下调。其中分枝杆菌属、Alsobacter、Aquicella和邻单胞菌属的丰度与对照差异显著(P<0.05)。在种水平上,一些潜在致病菌,如鲍曼不动杆菌(Acinetobabacterbaumannii)、龟分枝杆菌(Mycobacteriumabscessus)、Aeromonas sharmana、耐酪酸冢村菌(Tsukamurella tyrosinosolvens)、铜绿色假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等的丰度下调,其中龟分枝杆菌和耐酪酸冢村菌与对照差异显著(P<0.05),而鲸杆菌属等有益菌的丰度上调。本研究从肠道微生物的角度来研究鲍内脏多糖对宿主的影响,为海洋生物活性物质的功效评价提供了新思路,也为鲍内脏活性物质的开发利用、益生元的研制等奠定理论基础。

非对称场流分离检测鲍内脏多糖

[目的]建立非对称场流分离检测鲍内脏多糖的方法。[方法]采用非对称场流分离系统与静态光散射、光电二极管阵列和示差折光检测器联用技术分离表征鲍内脏多糖。以0.05 mol/L Na NO3[含0.02%(W/V) Na N3]为流动相,研究横向流速和样品浓度对非对称场流分离多糖的影响,并利用动静态光散射测量鲍内脏多糖的分子特性(分子量、均方根旋转半径、分子构象、流体力学半径)。[结果]不同横向流速对多糖的分离表征有显著影响;一定范围内,不同多糖浓度对分离效果及分子特性结果无显著差异。鲍内脏多糖分子量为(25.40±1.78) k D,均方根旋转半径为(16.70±0.30) nm,流体力学半径为(143.23±15.49) nm,分子为无规则线团构象。[结论]非对称场流技术适用于鲍内脏多糖的分离检测。

基于体外化学与细胞模型评价鲍内脏肽粉的抗氧化活性

本文考察了鲍内脏肽粉对二苯基苦基苯肼自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2-·)的清除能力,结果发现,鲍内脏肽粉对DPPH·、·OH和O_2-·自由基具有一定的清除能力,其IC50值分别为0.87 mg/m L、7.53 mg/m L和19.41 mg/m L。采用H_2O_2建立体外培养人肝癌细胞(HepG2)氧化应激损伤模型,将细胞分为正常对照组,模型组、H_2O_2加低(1.6 mg/m L)、中(3.2mg/m L)、高(6.4 mg/m L)剂量组,检测各组细胞存活率、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量。结果发现,1.6 mg/m L、3.2 mg/m L和6.4 mg/m L 3个剂量水平的鲍内脏肽粉能显著提高HepG2细胞的存活率、T-AOC和SOD活力,显著抑制细胞的MDA含量,且剂量-效应关系明显,对H_2O_2氧化损伤HepG2细胞均具有一定的修复作用。结果表明,鲍内脏肽粉具有较好的抗氧化活性。

鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺研究

为建立鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺,在单因素试验基础上,利用响应面法优化酶解工艺条件,建立了酶解时间、酶添加量、酶解温度与DPPH自由基清除率之间的数学模型;经超滤分离获得了不同分子质量的酶解产物,采用DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除能力评价其抗氧化性,经MALDI-TOF/TOF分析其分子质量分布。结果表明:酶法提取鲍内脏抗氧化肽的最佳工艺为料液比1∶1、酶解时间4.8h、酶添加量3 000U·g^(-1)、酶解温度54℃;获得的分子质量为2~6ku的组分具有较强的自由基清除能力,DPPH自由基和O-2·清除能力分别为94.76%和60.24%。