基于LPS炎症模型探究鲍姆纤孔菌(Sanghuangporus baumi)菌丝多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

鲍姆纤孔菌(Sanghuangporus baumi)是一种药用真菌,具有很高的活性,本文研究在脂多糖(LPS)诱导下鲍姆纤孔菌菌丝多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。以鲍姆纤孔菌菌丝多糖(SJ)为研究对象,利用脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7建立炎症模型,实验分为空白对照组,LPS模型组,SJ处理组(SJ+LPS),采用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测SJ对巨噬细胞RAW264.7的增殖作用;利用酶联免疫(ELISA)法测定SJ对巨噬细胞RAW264.7一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞因子分泌量的影响。此外,采用免疫印迹(Western-Blot)技术,研究SJ对RAW 264.7细胞生成IL-6、TNF-α、IL-1β和iNOS蛋白能力的影响。结果表明,不同浓度的SJ处理后巨噬细胞的活力与对照组相比分别增加了20.5%~50%;ELISA法结果表明:200μg/mL组的SJ极显著(P<0.001)抑制在炎症模型下巨噬细胞RAW264.7产NO的能力,比LPS模型组巨噬细胞NO、TNF-α、IL-6和IL-β分泌量分别降低了21.62%、29.99%、35.5%和50.03%。SJ呈剂量依赖的方式极显著(P<0.001)抑制由LPS诱导的促炎介质IL-6、TNF-α、IL-1β和iNOS表达,可减轻LPS引发的炎症反应,且与ELISA法检测到的细胞因子的分泌量变化结果相一致。综上,鲍姆纤孔菌多糖具有良好的免疫调节活性。

鲍姆纤孔菌菌丝三萜对小鼠巨噬细胞免疫调节活性的影响

用从鲍姆纤孔菌桑黄(Sanghuangporus baumii)液体发酵菌丝体中获得的菌丝三萜(SGC),研究其对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的影响。利用体外建立巨噬细胞RAW264.7炎症模型,用不同浓度的菌丝三萜处理细胞,采用Cell Counting Kit 8(CCK-8)和酶联免疫方法测定细胞增殖、细胞活力和细胞因子的分泌变化。结果显示:菌丝三萜对巨噬细胞RAW264.7的生长没有毒性,细胞活力试验显示菌丝三萜可提高溶菌酶、谷胱甘肽和糖原的含量;使得ATP酶含量降低;高浓度的菌丝三萜可以促进巨噬细胞分泌一氧化氮(NO);能够抑制脂多糖(LPS)诱导下小鼠巨噬细胞分泌白细胞介素IL-1α、IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α和INF-r的含量。说明在巨噬细胞受到外界刺激后,SGC对其具有一定的保护作用。

鲍姆纤孔菌总三萜的提取及其体外抗乳腺癌细胞MCF-7活性

目的研究提取鲍姆纤孔菌中总三萜的最佳工艺条件,比较鲍姆纤孔菌子实体总三萜和菌丝体总三萜的体外抗乳腺癌细胞(MCF-7)活性。方法在单因素的基础上运用Box-Behnken中心组合设计,以超声温度、超声时间、乙醇浓度3个因素3水平的实验模型,建立提取回归方程。以响应曲面法(RSM)对实验结果进行分析,对鲍姆纤孔菌总三萜提取工艺进行优化;用CASY细胞分析仪检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,分析鲍姆纤孔菌子实体总三萜和菌丝体总三萜抑制乳腺癌细胞增殖和促进乳腺癌细胞凋亡活性。结果修正最优条件为超声时间40 min,乙醇体积分数为70%,超声温度为60℃,此条件下总三萜的最高提取率为9.83 mg/g。验证实验结果平均提取率为9.81 mg/g,与模型预测值较为接近;鲍姆纤孔菌子实体总三萜在0.2 mg/m L时,菌丝体总三萜在0.4 mg/m L时,对MCF-7细胞的增殖有显著的抑制,抑制效果呈浓度相关性。鲍姆纤孔菌子实体总三萜在0.2 mg/m L时,菌丝体总三萜在0.4 mg/m L时,能显著增强MCF-7细胞的凋亡,增强效果呈浓度相关性。结论曲面响应法可以对鲍姆纤孔菌总三萜的提取工艺进行优化;鲍姆纤孔菌三萜对乳腺癌细胞(MCF-7)有明显的抑增殖活性和凋亡诱导作用,呈浓度相关性,且子实体总三萜比菌丝体总三萜体外抗乳腺癌细胞(MCF-7)活性更强。

北京灵山野生桑黄的分离鉴定与生物学特性

北京灵山小龙门国家森林公园存在着丰富的野生食(药)用菌资源,极具研究与开发前景。以采集自小龙门国家森林公园野生桑黄子实体为材料,利用组织分离获得菌株纯培养,分子鉴定采用内转录间隔区ITS序列和核糖体大亚基LSU-rDNA序列,使用单因子试验确定菌丝最适培养条件,并测定发酵液多糖产量。菌株(F1637)经纯培养后,结合形态和分子鉴定确定其为鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii),其菌丝体生长最适碳源为山梨醇,最适氮源为酵母浸粉,最适碳氮比为60:1,最适生长因子为维生素B6,最适生长温度为32℃,最适pH为6。F1637菌株以PD培养基发酵培养20 d,发酵液胞外多糖产量高达13.01 g·L-1。