鲍氏层孔菌发酵产物抑菌活性的研究

为研究鲍氏层孔菌发酵产物对植物病原菌的抑菌活性,采用菌丝生长速率法以鲍氏层孔菌发酵产物的不同溶剂萃取物为研究对象,测定其对7种植物病原菌的抑制作用。将鲍氏层孔菌的发酵产物进行不同的处理,分级纯化抑菌活性多糖,比较其抑菌活性。结果表明:鲍氏层孔菌发酵产物对7种病原菌均有抑制作用;鲍氏层孔菌发酵时间为20 d时,发酵产物对杨树烂皮病菌的抑制率最高;鲍氏层孔菌发酵产物的主要抑菌活性物质存在于发酵上清液醇提物中;醇沉体积分数为50%醇提物中的多糖对病原菌的抑制率为供试醇沉级别中最高。鲍氏层孔菌含有抑制病原菌的有效成分,具有成为新型生物农药的潜力。

鲍氏层孔菌（桑黄）的化学成分与药理活性研究进展

鲍氏层孔菌（Phellinusbaumii）是一种著名的民间药用真菌，多糖大分子和黄酮等小分子是其重要的活性成分。本文就近年来鲍氏层孔菌化学成分和药理活性的研究进展进行综述，旨在为鲍氏层孔菌进一步研究提供参考。

随机扩增多态性DNA技术在鲍氏层孔菌菌株鉴别中的应用

用20个随机引物对7个不同来源的鲍氏层孔菌菌株进行了RAPD分析.结果表明:20个随机引物中,有17个引物的扩增产物DNA条带表现出明显的多态性,不同引物对供试菌株扩增出现的DNA条带数目少则10条,多达33条.DNA片段从250bp到2000bp;采用17个引物对7个鲍氏层孔菌菌株共扩增出DNA片段带377条,不同引物扩增出的DNA片段谱带存在较大差异.采用UPGMA系统聚类法,将7个菌株聚类为两大类,能直观准确地揭示菌株间的差异并加以鉴别.

鲍氏层孔菌以固体培养基为基质的人工培养技术研究

试验目的在于探索出鲍氏层孔菌子实体人工培养的发酵培养基的最佳配方。配方设计采用3因素3水平的正交试验设计,找出适于鲍氏层孔菌生长的最佳氮源、碳源及木屑种类,以及3者的最佳组合配方。

鲍氏层孔菌摇瓶发酵条件初步研究

鲍氏层孔菌是一种珍贵的药用真菌,本文首次以发酵培养物的免疫增强活性为指标,同时结合发酵生物量、胞外多糖含量等指标,研究发酵时间、初始pH值、碳源、氮源、无机盐、装液量、温度等因素对鲍氏层孔菌发酵的影响.结果表明在培养基初始pH6.0,碳源为蔗糖,氮源为豆粉,无机盐为MgSO4,装液量为40mL/150mL三角瓶,26℃培养7d时,培养物的免疫增强活性、生物量及胞外多糖含量达到最佳.

鲍氏层孔菌瓶栽生产技术

Phellinus baumii is a higher-fungus with strong anticancinogenesis.The effect of its anticancinogenesis is better than that of any fungus anticarcinogen in use such as Ganoderma spp.,Grifola umbellata,and so on.Phellinus baumii belonged to Hymenomycetes、Hymenochaetaceae、Phellinus,is distributed in very low volume in the forest of Changbai Mountains.The fungus parasites mainly on Chinese lilac.There is no report on the culture of Phellinus baumii sporocarp in China yet.From 2001 to 2004,under the co-operation between Chinese Academy of Sciences and Institute of Forestry of Tieling City,tests on the culture technique of Phellinus baumii sporocarp were carried out,and a series of bottle culture technique for large-scale production were developed from the tests.

鲍氏层孔菌的生物学特性及栽培技术

鲍氏层孔菌(Phellinus baumii),又名桑臣、桑耳、桑黄菇,药用名称为桑黄,属担子菌亚门、层菌纲、多孔菌目、多孔菌科、针层孔菌属[1]。鲍氏层孔菌是一种具有强抗癌作用的高等真菌,其效果高于灵芝、猪苓等已应用的真菌抗癌制剂,为我国23种最有发展前景的药用真菌之一。

鲍氏层孔菌菌丝体多糖初步理化特性及其清除自由基活性

为充分开发鲍氏层孔菌多糖资源,采用物理的、化学的方法对鲍氏层孔菌多糖的初步理化特性和体外清除自由基能力进行研究。结果表明,鲍氏层孔菌粗多糖的总糖、蛋白质以及糖醛酸的含量分别为(61.82±1.39)%、(1.15±0.14)%、(1.70±0.09)%;其相对分子质量分布于2.95×103ku和16.29ku;并发现鲍氏层孔多糖在0～3200μg/mL的剂量范围内,对超氧自由基、羟基自由基、脂质过氧化自由基均有一定的清除作用,是一种潜在的具有较高开发利用价值的食品和药物资源。

鲍氏层孔菌菌丝体多糖对小鼠肝脏氧化应激损伤的保护作用

为了进一步开发和利用鲍氏层孔菌多糖资源,采用D-半乳糖所致的动物亚急性衰老损伤模型方法对鲍氏层孔菌多糖的护肝活性进行研究。结果表明,鲍氏层孔菌多糖显著提高小鼠肝脏中SOD活性、CAT活性、GSH-Px活性以及TAOC水平,显著降低肝脏中MDA含量,且呈现明显的剂量依赖关系,对小鼠肝氧化应激损伤具有保护作用,可作为保护氧化应激肝损伤的食品或药物的潜在资源。

鲍氏针层孔菌生产菌丝体及胞外多糖的液体发酵培养

目的:考察营养因子和环境因子对鲍氏针层孔菌液体发酵生产菌丝体和胞外多糖产量的影响。方法:通过摇瓶实验,对不同的碳源、氮源、接种量、起始pH和温度进行筛选。结果:鲍氏针层孔菌液体发酵生产菌丝体和胞外多糖时,所需的最优碳源和氮源分别是葡萄糖和大豆蛋白胨;适宜的接种量、起始pH、温度分别为6%,6.0,28℃。结论:通过摇瓶实验获得的数据将为鲍氏针层孔菌工业化液体深层发酵培养提供参考。

鲍氏针层孔菌原生质体融合育种的研究

目的:鲍氏针层孔菌优良菌株的选育。方法:通过5.8SrDNA-ITS序列,生长速度、液体发酵生产菌丝体和胞外多糖产量等方面,对不同来源的菌株进行分析比较,筛选出优良的亲本菌株。在此基础上,采用双灭活标记,原生质体PEG诱导融合的方法。结果:筛选出亲本菌株SA02和SA04,以及编号为R002、R003、R005等三个融合菌株与两亲本菌株都具有拮抗反应,且菌落性状表现出不同于亲本的性状。结论:R002、R003和R005初步确定为双亲株的融合子。

营养及环境因素对鲍氏针层孔菌菌丝生长的影响

目的:研究营养及环境因素对鲍氏针层孔菌菌丝生长的影响。方法:观测不同碳源、氮源、碳氮比、温度、pH、光照、培养基含水量等7个方面对鲍氏针层孔菌菌丝生长的影响。结果:鲍氏针层孔菌菌丝生长的最适碳源和氮源分别是葡萄糖和蛋白胨;碳氮比在15/1～20/1有益菌丝的生长;菌丝适宜生长的温度、pH值和培养基含水量分别为28～32℃、5.0～6.0和65%;一定的光照使菌丝颜色加深,但不会抑制菌丝的生长。结论:为鲍氏针层孔菌的高产优质低耗栽培提供依据。

鲍氏针层孔菌菌丝体多糖脱蛋白方法研究

目的:对多糖提取液中的蛋白质去除方法和条件进行了优化,比较不同方法对蛋白质去除的影响。方法:采用Sevag法与三氯乙酸(TCA)法去除鲍氏针层孔菌多糖中的游离蛋白质。结果:TCA去除蛋白质的效果优于Sevag法,TCA最佳脱蛋白条件为:5%三氯乙酸用量,处理3次,反应时间30min;在此条件下,蛋白质去除率为82%,多糖损失率为10.8%。结论:TCA法为最佳的鲍氏针层孔菌脱蛋白方法。

鲍氏针层孔菌菌丝体多糖提取工艺研究

目的:对超声波复合酶法中影响鲍氏针层孔菌菌丝体多糖提取效果的主要因素进行研究。方法:利用单因素试验、响应面分析和正交回归分析对提取工艺参数进行分析。结果:超声波提取胞内多糖优化工艺条件为:提取时间21 min,功率315W,料液比1∶25,在此条件下多糖得率为3.441%。在超声波优化结果基础上,进一步进行复合酶法处理,酶解最佳条件是:酶解时间120 min、pH5.5、酶解温度50℃、蛋白酶2%、纤维素酶3%、果胶酶1.5%,多糖得率为6.513%。结论:超声波和复合酶法双重处理提取桑黄胞内多糖是一种有效的提取方法,适合大规模生产运用。

鲍氏针层孔菌菌丝体及胞内多糖发酵工艺研究

以菌丝生物量、胞内多糖含量及胞内多糖产量为评价指标,对鲍氏针层孔菌液体深层发酵培养的培养基配方及发酵条件进行了优化。通过单因素实验和正交实验筛选液体发酵培养基,结果表明,最适培养基为:玉米粉4%,麸皮2%,KH2PO40.4%,MgSO4·7H2O0.05%。进一步对培养条件进行优化,得到最适生长的液体发酵条件为:培养温度28℃、pH6.5、接种量12%、装液量150mL/500mL、转速140r/min、发酵时间168h。在此优化工艺条件下,菌丝生物量、胞内多糖含量及产量由优化前的12.837g/L,15.930mg/g,204.493mg/L分别提高到19.410g/L,20.935mg/g,406.348mg/L。

鲍氏针层孔菌的形态学观察

目的对鲍氏针层孔菌的形态结构特征深入了解。方法对鲍氏针层孔菌的菌落、菌球、营养菌丝和子实体进行观察。结果菌落菌丝初期为白色,后逐渐变为淡黄色、黄色至黄褐色;营养菌丝多分枝,可见菌丝横隔,无锁状联合;菌球呈规则的圆球状,表面具柔软的毛刺;子实体呈半圆形、马蹄形或覆瓦状;担孢子卵圆形,平滑,(3.51～4.06)×(2.18～3.01)μm。结论鲍氏针层孔菌的形态学研究,有助于该菌和其他相似物种进行区别。

鲍氏针层孔菌液体发酵过程中菌体形态及其相关生理代谢指标

通过摇瓶培养,对不同培养时期的鲍氏针层孔菌(Phellinus baumii)菌体形态进行观察、计数,以及测定相应培养时期发酵液的胞外多糖含量、残糖含量、pH值及菌体生物量等生理代谢指标。结果表明,鲍氏针层孔菌菌体主要有5种形态且在培养的不同时期,各形态菌体的数量不同;生物量、胞外多糖、还原糖、pH值随着菌丝体的生长也不断变化。

桑黄菌丝的最适培养条件研究

研究了3个桑黄菌株一级种和二级种的最适培养条件。最终确定了桑黄菌一级种最佳培养基配方：马铃薯200 g,琼脂20 g,磷酸二氢钾2 g．硫酸镁1 g,葡萄糖20g,维生素B1 10 mg,维生索E 10mg(用以代替豆汤的抗衰老能力),水1 000 mL。二级种最佳培养配方：棉子壳78％,麸皮20％,石膏1．5％,MgSO_40．2％,KH_2PO_4 0．3％。料水比1：1．5。

10株桑黄菌基于rDNA ITS序列的分子鉴定

建立桑黄菌的分类学基本框架,可为桑黄菌的开发利用奠定基础。利用rDNAITS序列分析技术,在分子水平上对采自秦巴山区的9株野生桑黄菌和1株实用桑黄菌进行分类鉴定。以真菌rDNAITS序列分析中的通用引物ITS1和ITS4,分别对10个菌株的基因组DNA模板PCR扩增出目的片段,将扩增产物割胶纯化、克隆并测序,获得10个菌株的rDNAITS序列,并结合GenBank中已登录桑黄菌的rDNAITS同源序列,应用MEGA4.1软件和Neighbor-Joining法,分别计算遗传距离及构建系统发育进化树分析亲缘关系。结果表明10株桑黄菌均为针层孔菌属(Phellinus),其中:S1、S4、S6、Rh、Sc菌株初步鉴定为鲍氏针层孔菌(Phellinus baumii);S2、S3、S5、S7、Gy菌株初步鉴定为裂蹄木层孔菌(Phellinus linteus)。