北方地区鲤浮肿病防控技术

鲤浮肿病是一种严重危害鲤和锦鲤的病毒性疾病,为二类水生动物疫病。文章介绍了鲤浮肿病的病原、流行特点、临床症状及危害程度,详细阐述了该病的防控技术措施,主要包括鱼池准备、鱼种检疫、水质调控、科学投喂及养殖环境卫生健康管理。对鲤浮肿病防控具有一定的指导意义。

鲤浮肿病的危害及防控

近年来我国河南、河北、辽宁、天津等地养殖鲤、锦鲤多次爆发一种“鲤急性烂鳃病”,发病鱼出现烂鰓、眼凹陷等症状,具有发病急、死亡率高等特点,造成严重经济损失。有关专家经实验室检测确定此病为鲤浮肿病,这是一种境外传入我国的新发疫病。鲤浮肿病是由鲤浮肿病毒(Carpedemavirus,CEV)感染引发的疫病,或称为锦鲤昏睡病(koisleepydisease,KSD)。发病鱼有昏睡、烂鳃、凹眼等临床症状,可引起较高的死亡率。上世纪七十年代,日本首次报道发现一种感染鲤科鱼类的病毒——CEV,引发鲤浮肿病。1996年,美国也确认该病发生。2009年~2011年,英国从引进的锦鲤中检测出CEV,引起欧洲各国的关注。

日本鱼病学者福田颖穗关于锦鲤疱疹病毒病和鲤病毒性浮肿病的症状描述与防控措施

关于这种鱼病国外的情况是，1998年以色列和美国发生了这种疾病。日本2003年5月在冈山县的河川里发生了这种疾病，造成鲤的大量死亡，这是最先确认的这种疾病病例。

养殖锦鲤鲤鱼浮肿病的检测与鉴定

北京房山某锦鲤养殖场锦鲤发生大量死亡,患病锦鲤呈烂鳃、肾脏糜烂、身体浮肿;症状类似锦鲤疱疹病毒(koi herpes virus,KHV)感染,但经PCR检测排除了KHV感染。为进一步确定病原,对发病鱼进行了临床症状观察、病毒分离、细菌分离培养、病鱼组织超薄切片电镜观察和PCR扩增等检测。通过病鱼组织超薄切片电镜观察,在肾脏内可见200nm×400nm的痘病毒样颗粒。抽提病毒核酸后,用已知的鲤鱼浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的保守序列设计2对引物进行PCR扩增,扩增出548和180bp片段,测序结果和GenBank公布的CEV H504株序列完全一致。根据发病鱼临床症状和实验室检测结果,最终确定该病为CEV引起的鲤鱼浮肿病。这是在中国首次发现的鲤鱼浮肿病。

鲤浮肿病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

本研究针对鲤浮肿病病毒(carp edema virus,CEV)基因组核蛋白编码基因P4a的序列,设计2对特异性引物,以克隆构建的重组质粒为标准模板,通过优化反应体系中引物浓度组合、Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度和扩增时间等参数,建立了CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。结果表明,CEV-LAMP方法的最佳反应温度为62℃,引物浓度组合为引物F3/B3 0.2μmol/L,引物FIP/BIP 1.2μmol/L,Betaine 0.7 mol/L,Mg2+8.0 mmol/L,dNTPs 1.2 mmol/L,反应时间60 min。反应产物经凝胶电泳呈现梯型条带,添加SYBR Green I荧光染料后,呈现明显的绿色阳性反应。CEV-LAMP法灵敏度高,最低检测限为10 copies/μL,较常规PCR法灵敏度高100倍;CEV-LAMP法特异性强,与锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)无交叉反应。CEV-LAMP应用于患病鲤样本检测结果准确,简便快速,可为鲤浮肿病的现场诊断与防控提供技术支撑。

四川地区养殖锦鲤浮肿病毒检测与系统进化分析

2017年10月,四川省某锦鲤养殖场暴发一种以嗜睡、腹部肿大、鳃肿胀和眼睛凹陷为临床特征的传染病,累计死亡率高达50%。为研究锦鲤发病病因和疾病流行规律,对病鱼解剖,进行病理组织观察、电镜观察、PCR检测和系统进化分析。结果显示,患病锦鲤眼球浑浊,腹部肿大,鳃肿胀严重;组织病理学观察发现病鱼的鳃、肝脏、肾脏和脑组织细胞变性、坏死,出现大量炎性细胞浸润;透射电镜观察,在肾脏组织中发现病毒粒子。巢氏PCR方法检测鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV),出现特异性扩增产物;基于CEV P4a基因进行系统发育分析,此病毒与英国株R083同源性为99%。本研究为鲤浮肿病毒的起源进化、分类、疾病诊断和防控提供重要依据。

河南沿黄滩区鲤浮肿病和锦鲤疱疹病毒病初步调查研究

鲤浮肿病（CEVD）是一种高致病性病毒病,能导致养殖鲤和锦鲤大量死亡。由于它和锦鲤疱疹病毒病（KHVD）在临床症状上非常相似,都是以烂鳃和眼凹为特征,在几年前人们都把它们误认为是KHVD而没有注意到CEVD的存在。近一年被确认后,人们开始进行回顾性调查,才发现以前在北京、天津和河北等地发生的所谓KHV流行而送样到实验室检查又是KHV阴性的一些“奇怪”病例,其实是由鲤浮肿病毒（CEV）感染引起的。

鲤鱼浮肿病流行情况的初步研究

为了明确北京顺义某锦鲤养殖场患病锦鲤的发病死亡原因,根据鲤鱼浮肿病毒基因的保守序列设计引物进行套式PCR扩增,产物经电泳后可见548 bp片段和180 bp片段的DNA条带,空白对照无扩增条带;套式PCR的产物进行测序,测序结果和Genbank公布的鲤鱼浮肿病毒H504株序列完全一致。结果显示这是由鲤鱼浮肿病毒引起的鲤鱼浮肿病,并通过进一步分析,提示鲤鱼浮肿病在北京地区已经有所扩散,应引起养殖者以及鱼病工作者的关注。

养殖鲤和锦鲤中的鲤浮肿病毒检测与分析

鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)是一种严重危害养殖鲤和锦鲤的病毒。2014年在北京地区确诊的首例鲤浮肿病意味着该病已进入中国。为调查CEV在养殖鲤、锦鲤中的流行现状,同时筛选适宜的CEV普查方法,探索其发病条件,试验于2016年5月至2016年9月共采集13个样品,采用日本学者建立的Nest-PCR法及英国学者研究的Nest-PCR法、Real-time PCR法进行CEV检测。结果发现,13个样品中共检测到5个CEV阳性,3个为锦鲤样品,2个为普通鲤或杂交鲤样品。Real-time PCR法检出所有阳性,日本的Nest-PCR法检出3个锦鲤阳性和1个普通鲤阳性,英国的Nest-PCR法仅检出3个锦鲤阳性。在阳性样品中,3号和10号样品的养殖鱼并未发病死亡,且3号样品鱼体内的病毒拷贝数高于有临床症状并出现死亡的7号、8号和13号样品。说明目前养殖鲤、锦鲤的CEV阳性率较高,亟需加强该病毒的监测、防控。英国学者建立的Real-time PCR法不会漏检,更适合用于中国CEV的监测普查。没有外界环境条件刺激,养殖鱼即使感染CEV或CEV在其体内增殖,也不一定发生鲤浮肿病。结合鲤浮肿病发病温度范围较宽,提示环境条件刺激才是导致该病发生的关键因素,避免环境刺激是降低该病发生的一个有效措施。

鲤浮肿病研究进展

鲤浮肿病(Carp edema virus disease,CEVD),也称锦鲤昏睡病(koi sleepy disease,KSD),是一种严重危害鲤和锦鲤养殖的病毒病。本文对鲤浮肿病的病原生物学特征、临床症状、易感品种、发病条件、传播方式、分布范围、分子流行病学、病毒检测方法、防控措施等,进行了阐述和介绍,旨在为该病的预防与控制提供参考。

天津地区养殖鲤鱼(Cyprinus carpio)鲤浮肿病毒(CEV)PCR检测与人工感染试验

对2015—2016年天津地区鲤鱼养殖场采集的发生鲤浮肿病毒(CEV)/锦鲤睡眠病(KSD)的鲤鱼样品,进行套式PCR检测和人工浸泡感染试验,并测定养成期鲤鱼感染率。实验观察研究发现,所采集样品均表现为体色发黑,头部上方颅骨软组织周围皱缩,眼球凹陷,鳃粘脏,黏液较多,常滞游于浅水区水面。套式PCR检测结果显示全部10个样品均出现特异性目的条带,为CEV阳性。目的产物测序后经NCBI BLAST,与已报道的CEV相关序列相似性介于85%—99%;系统发育树分析显示样品编号JY1856与JY1650位于同一分支,与已知CEV病毒株亲缘关系较近,而其余8个样品位于同一分支,与已知CEV病毒株亲缘关系较远。通过人工浸泡感染健康鲤鱼,半数致死时间为55d,累计死亡率为71.1%±3.2%,并从试验感染鱼组织中检测到CEV病毒DNA。养成期鲤鱼CEV携带率为77.5%。以上结果表明,天津地区养殖鲤鱼中存在CEV感染,揭示了我国鲤鱼养殖产业可能面临新的疫情,需引起养殖业的高度重视。

2020年河北省锦鲤疱疹病毒病、鲤浮肿病调查报告

为了解河北省锦鲤疱疹病毒病(KHVD)、鲤浮肿病(CEVD)发病情况,采用国家及省级专项监测与实地调查相结合的办法进行调查。结果显示,KHVD、CEVD在河北省发病均呈上升趋势,尤其是鲤浮肿病发病面积与发病死亡率与上一年相比均有所增加,造成的损失较大。

鲤浮肿病检测方法实验室间比对的结果与评价

鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)是在锦鲤中发现的一种传染性病毒病,近年来在全球传播迅速,对鲤养殖业造成严重损害。本研究设计CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物,进行特异性实验;选取套式PCR、荧光PCR和LAMP三种检测方法,组织10家实验室进行室间比对测试:制备含CEV病毒核酸的测试样品,评价其均匀性和稳定性,通过测试结果分析方法检出限。结果显示,套式PCR的核酸样品检测限可达6.8×10^(-10) g。

2018年河北省鲤浮肿病流行情况调查

为了解鲤浮肿病流行情况,对河北省鲤浮肿病或疑似鲤浮肿病进行了监测与调查。结果显示,引种与横向污染是鲤浮肿病病原的主要来源,区域性发病具有连续性,并有扩散趋势,应引起养殖单位高度关注。

鲤浮肿病的诊断与防控

2018年9月初,贵州黔东南州某地的池塘鲤和稻田鲤发生了疑似鲤浮肿病,死亡率达80%,造成养殖户损失30多万元。为了确诊病因,采集病鱼后送往省外的疫病实验室检测,检测结果是锦鲤疱疹病毒和鲤疱疹病毒Ⅱ型为阴性,鲤浮肿病毒为阳性,再结合临床症状确诊为鲤浮肿病毒引起的鲤浮肿病。本文介绍了这起鲤浮肿病的发病情况、临床症状、诊断经过、病因分析以及具体防控措施。目前,鲤浮肿病没有有效的治疗方法,只能是预防控制为主,应加强池塘和稻田的管理,发病期间停止使用药物,停止换水保持水体环境稳定,停止投喂饲料,对池塘开增氧机增氧等。

2021年河北省鲤浮肿病调查报告

2021年对河北省鲤浮肿病发病及流行病学情况进行调查,根据调查结果,对比2017—2020年调查数据,分析得出,CEVD在河北省发病情况仍较严重,造成的经济损失依然较大;区域性发病仍具有连续性;因引种等原因造成点状发病有扩散趋势,应引起养殖单位高度关注。

鲤鱼浮肿病已经流入我国并对鲤鱼和锦鲤养殖造成威胁

鲤鱼浮肿病（Koi sleepy disease,KSD）,最早于1970年在日本养殖的锦鲤上发现并报道,其病原为鲤鱼浮肿病毒（Carp Edema Virus,CEV）,是痘病毒的一种。近年在德国、法国、英国、荷兰、捷克、奥地利、土耳其等国发现养殖鲤和锦鲤因鲤鱼浮肿病毒感染引起暴发性死亡的情况。

郑州鲤养殖场鲤急性烂鳃病的症状与病原鉴定

2019年6月,河南郑州某鲤养殖场发生鲤急性烂鳃病,累计死亡率约40%。为研究发病病因和疾病流行规律,对病鱼解剖,进行细菌和寄生虫检测、组织病理学检测、PCR检测和系统进化分析。结果显示,病鱼体表黏液增多,眼球凹陷,头盖骨凹凸不平,鳃肿胀并伴有溃烂,肾脏肿大至鳔间隔。体视镜下可见病鱼鳃丝末端钝圆、呈棒状,鳃丝间充满大量黏液。组织病理学检查可见病鱼鳃丝和鳃小片组织结构严重受损,鳃丝上皮细胞增生、坏死脱落,鳃弓远端和近端鳃小片均有明显增生且相互融合。PCR方法从病鱼中检出鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV),而SVCV和KHV检测结果为阴性。另外,病鱼体表和鳃并未见任何寄生虫,细菌学检测也未分离到任何与鲤烂鳃病相关的病原菌。遗传进化分析表明,此次检出的CEV毒株属于Ⅱa基因亚型,且与中国分离株(AS1、WJ2016)及日本分离株(CyPP3)的同源性最高,约为98.8%。初步推断Ⅱa基因亚型CEV可能是引起此次郑州鲤急性烂鳃病的主要病因,后续养殖中需加强对该病进行防控。

云南锦鲤养殖场鲤浮肿病毒的鉴定及基因型分析

锦鲤睡眠病(Koi sleepy disease,KSD)是一种由鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)引起鲤科鱼类死亡的病毒性传染病,已经对世界鲤科鱼类养殖业造成危害。2016年,中国云南某锦鲤养殖场养殖的锦鲤出现以体表出血、眼睛凹陷、沉于池底昏睡为主要临床症状的疾病,发病水温为11℃~20℃,累计死亡率30%~50%。从该养殖场不同池塘采集两个样品,使用nested PCR和real-time PCR方法进行实验室诊断。结果表明,两个样品CEV检测结果均为阳性,发病锦鲤鳃和肾脏CEV病毒载量为250.02~1 332.94拷贝/250ng,鳃中CEV病毒载量约为肾脏的6~7倍。在排除寄生虫、细菌、SVCV和KHV感染后,推测CEV可能是引起此次云南锦鲤场发生疫情的病原,但还需回归感染实验做进一步验证。基于CEV P4a基因的遗传进化分析结果表明,此次从云南发病锦鲤检出的两个CEV毒株均属于IIa基因型,且与英国(R083株)和日本CEV毒株(CyPP-3)的遗传进化关系最近。

鲤浮肿病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

为了给鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)的防控提供特异、灵敏、快速的检测方法,针对鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的P4a基因序列设计5条特异性引物,建立CEV的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。结果表明该方法具有很高的特异性。最低可检出6 000拷贝/μL,检测灵敏度与Real-time PCR方法相当。对30个鲤及锦鲤养殖场样品进行检测并与Real-time PCR方法进行比较,该方法的检测结果符合率达到96.7%以上。本方法的建立及应用为CEVD的防控提供依据。