鲤科疱疹病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速和敏感的检测鲤科疱疹病毒2型(Cy HV-2)的方法,本研究根据Cy HV-2 DNA聚合酶基因序列合成引物和Taq Man探针,建立了Cy HV-2荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在5拷贝/μL^5×108拷贝/μL具有良好的线性关系,相关系数为0.999;其最低检出量为5拷贝/μL,比普通PCR的敏感度高100倍。该方法仅对Cy HV-2的靶基因序列进行扩增,而对锦鲤疱疹病毒、流行性造血器官坏死病病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性胰脏坏死病病毒及鲤春病毒血症病毒核酸扩增结果均为阴性。组内和组间重复试验变异系数的平均值分别为0.5%和0.3%,具有良好的重复性。与常规PCR相比较,该方法具有快速、敏感、特异及高通量检测等优点,适用于对Cy HV-2的快速检测。