生长激素基因(GH2)多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR -RFLP对南昌白猪 (117头 )和大约克夏猪 (36 1头 )的GH 2基因 - 119～ +486bp的片段进行了扩增 ,并用ApaⅠ酶切 ,产生了 2个等位基因A(44 9+10 1+5 5bp)和B(316 +133+10 1+5 5bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、校正背膘厚、平均背膘厚、瘦肉率和料重比等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,不同GH 2基因型间在所测的生产性能上差异不显著 (P >0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,AA型猪的瘦肉率最低、与BB型猪相比 ,差异显著 (P <0 0 5 )。

鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达

采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ第１个密码子ＴＣＡ．序列分析表明，与Ｋｏｒｅｎ报道的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ相比有两个碱基差异，但推断的氨基酸序列完全一致．将鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ定向克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组鲤鱼ＧＨ基因表达载体ｐＢＶｃＧＨ８．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：经４２℃诱导，ｐＢＶｃＧＨ８在大肠杆菌中可表达一分子量约２２０００的特异蛋白，表达量占细胞总蛋白的２９．２％．该基因重组的鲤鱼ＧＨ添加到饲料中投喂罗非鱼。

鲤鱼生长激素在毕赤酵母中的表达

将编码鲤鱼 (Cyprinuscarpio )生长激素 (GH)成熟肽的cDNA克隆到毕赤酵母 (P .pastoris)胞内表达载体pHIL D2中 ,构建重组表达质粒pHIL D2 GH .转化组氨酸缺陷型酵母GS115,获得表达鲤鱼GH的酵母工程菌 .经甲醇诱导 ,SDS PAGE和Western印迹检测表明 ,鲤鱼GH在酵母中得到表达 ,表达产物在胞内以可溶状态存在 ,具有鲤鱼GH的免疫活性 .用诱导后的酵母投喂罗非鱼 。

转牛（羊）生长激素基因工程鲤鱼研究

生产出转牛和羊生长激素基因实验鲤鱼一万余尾，筛选出生长速度快，含有外源基因的转基因鲤鱼１４３尾。遗传实验证实外源基因可遗传给后代，经池塘生长实验证明子代仍具有生长速度快的特征，建立了把外源基因直接注入鲤鱼受精卵及确定了外源基因导入鲤鱼受精卵的最佳时期等构建转基因鱼的一整套技术。

人生长激素基因在转基因鲤鱼体内的遗传

通过有性繁殖转移人生长激素基因鲤鱼(P_1),获得了转基因鲤鱼的子一代(F_1)和子二代(F_2);外源基因在转基因P_1与普通鲤鱼杂交产生的F_1代和转基因F_1代自交产生的F_2代鱼中的存在率分别为45.4%和66.7%;外源基因拷贝数在子代个体之间存在很大差异,从每细胞2拷贝到每细胞200拷贝不等;外源基因在转基因鱼子代中仍可表达具有生物功能的产物,人生长激素(hGH),并能促进鱼的生长。

波尔山羊生长激素(GH)基因克隆及序列分析

比较生长激素(GH)基因在不同物种间的相似性,设计引物,用PCR方法从波尔山羊基因组中扩增出一条长约2.0kb的DNA片段,然后用PMD-18T载体在感受态DH5α株大肠杆菌中获得GH基因克隆子。DNA测序结果表明,波尔山羊GH基因DNA序列全长1951bp(不含引物序列),含完整的5个外显子编码区。应用ClustalW软件进行同源性分析,结果表明,波尔山羊GH基因与Tokara山羊、澳洲美利奴羊和黄牛的GH基因的相似度分别为98.5%,97.0%和95.4%;内元比外元的变异程度高,在5个外元中,第一外元的保守性最高,其他区域的变异程度随物种亲缘关系的增大而升高,在分子水平上符合物种进化原理。

转生长激素基因鲤鱼与正常鲤鱼经济性状的比较

对 1～ 3龄转大麻哈鱼生长激素基因鲤鱼和正常鲤鱼在高寒地区的池塘的生长、生活力、抗寒、抗病等主要经济性状进行了比较。实验结果表明 ,转基因鲤鱼的生活力、抗寒、抗病等经济性状与正常鲤鱼经t值检验均无明显差异 ,其抗病能力稍弱于正常鲤鱼。而转基因鲤鱼的群体中其生长个体差异大 ,有的个体的生长明显快于正常鲤鱼 ;在试验鱼群体中最大个体体质量比对照组群体中最大个体体质量分别提高了 5 2 .5 % ,4 6 .0 % ,76 .0 % ,这说明外源基因的导入对部分受体鱼有促生长效应 。

酵母表达的重组草鱼生长激素对鲤鱼的促生长效应

通过发酵罐放大培养 ,优化发酵参数 ,提高了重组草鱼生长激素在酵母中的表达量。以含重组草鱼生长激素的酵母裂解物投喂鱼苗 ,实验组鱼体重的增加显著高于对照组 ,体长的亦高于对照组。鱼体生化组成分析表明 :投喂转草鱼生长激素基因酵母裂解物能显著提高鱼体的干物质和蛋白含量 。

鲤鱼生长激素基因的PCR扩增、克隆及其序列比较

从鲤鱼(Cyprinus carpio)脑垂体中分离其总RNA,经反转录成为第一条链cDNA。以第一条链cDNA为模板,以合成的两段29个寡聚核苷酸为引物,再经过PCR扩增,合成了鲤鱼的生长激素基因,并把其克隆到大肠杆菌表达载体(p^(Blue-scriptⅡ KS+/-))上。序列分析和限制酶切图谱表明所克隆的鲤鱼生长激素基因的开放读框含有630bp,编码210个氨基酸,其中含有22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟GH序列。我们所克隆的鲤鱼GH基因与Koren发表的鲤鱼GHcDNA的序列在编码区完全一致,但是与Chao发表的鲤鱼GHcDNA比较,在编码区核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为95.6％和96.7％。

饥饿状态下转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素的表达研究

研究采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)技术,比较分析了转GH基因鲤鱼和对照鲤鱼在饥饿和饱食状态下血清生长激素水平的变化规律,并探讨其可能机制。实验结果表明,在投喂实验中,转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素水平均无明显变化,但转基因鲤鱼血清生长激素远高于对照鲤鱼,分别为(142.0±4.9)ng/mL和(1.6±0.2)ng/mL,转基因鲤鱼体重增长速率显著高于对照鱼。在饥饿实验中,转基因鲤鱼的血清生长激素迅速下降,从(142.0±4.9)ng/mL降至(46.0±3.2)ng/mL,而后稳定在这一较低水平;对照鲤鱼血清生长激素持续上升,从(1.6±0.2)ng/mL升至(10.9±1.4)ng/mL,体重负增长速率没有显著差异。研究结果提示,转GH基因鲤鱼血清生长激素的调控机制与对照鲤鱼的不同,其表达水平不受脑垂体反馈抑制调控机制的影响,而与重组GH基因中β-actin基因启动子的调控模式相关。

性类固醇激素对鲤鱼脑垂体生长激素基因表达的影响

建立核糖核酸酶保护法 ,检测性类固醇激素对鲤鱼脑垂体生长激素基因表达水平的影响。根据已知的鲤鱼生长激素cDNA设计PCR引物 ,亚克隆构建新的含鲤鱼生长激素cDNA片段的质粒 ,并以此作为模板 ,体外转录合成鲤鱼生长激素的反义RNA探针 ,用以检测鲤鱼脑垂体中的生长激素mRNA水平。处于性腺成熟早期的雌性鲤鱼埋植雌二醇 5天或 10天后 ,血液中生长激素水平均显著高于对照组 ,但其脑垂体的生长激素mRNA水平均没有显著变化 ;埋植睾酮 5天或 10天 ,血液中生长激素水平与对照组之间无显著性差异 ,生长激素mRNA水平也没有显著性变化。但埋植雌二醇 5天后显著增强了促性腺激素释放激素类似物对血液生长激素水平升高和促进生长激素mRNA合成的刺激作用。这表明 :性类固醇激素不能在转录水平上对生长激素基因表达进行调控 。

间接判定运动员滥用人生长激素的指标的可行性研究.Ⅱ.优秀运动员安静时血清GH、IGF-Ⅰ水平的分析

以北京体育大学人体运动科学系非体育专业新生 2 0名 (男女各 10名 )作为对照组 ,实验组包括 16名田径运动员 ( 9名男性 ,7名女性 )、古典式摔跤男运动员 7名、男子足球运动员 2 3名。实验组运动员在训练期间均服用营养补剂。实验研究发现 :优秀成年运动员血清IGF -Ⅰ安静值与正常男女对照组无显著性差异。优秀成年运动员血清IGF -Ⅰ安静值不受性别、年龄、身高和体重指数的影响。男子田径运动员血清IGF -Ⅰ安静值显著高于足球运动员。

促黄体素释放激素类似物和多巴胺对鲤鱼幼鱼和性成熟雌鱼生长激素分泌的作用

以性腺未发育的５～６月龄幼鲤和１龄性成熟雌鲤为材料，研究年龄对促黄体素释放激素类似物和多巴胺能药物刺激的鲤鱼ＧＨ分泌的影响。结果表明：５～６月龄幼鱼血清基础ＧＨ水平明显低于１龄性成熟鱼；５～６月龄幼鱼对ＬＨＲＨＡ、ＤＡ和ＡＰＯ刺激的ＧＨ分泌的反应性也明显低于１龄性成熟鱼；ＤＡ和ＡＰＯ在５～６月龄幼鱼和１龄性成熟鱼都不能增强ＬＨＲＨＡ对ＧＨ分泌的刺激作用；ＤＯＭ不影响５～６月龄幼鱼和１龄性成熟鱼的血清ＧＨ水平。

鲤鱼（Cyprinus carpio）生长激素基因的亚克隆及其序列分析

本文对ＰＣＲ扩增的６６８ｂｐ的ＤＮＡ片段进行了亚克隆，，然后以Ｓａｎｇｅｒ双脱氧中止法为原理，利用美国ＡＢＩ公司３７０Ａ自动核酸序列分析仪，确定了６６８ｈＰ的核苷酸序列。序列分析表明鲤鱼生长激素基因的开放读框含有６３０ｂｐ，并推测其中包括２２个氨基酸的信号肽和１８８个氨基酸的成熟多肽。鲤鱼生长激素基因的酶切图谱和序列分析的结果都证明我们已获得了全长的鲤鱼生长激素基因。

不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素和生长激素分泌活动的影响

以１龄性腺发育中期鲤鱼为材料，采用腹腔（ｉ．ｐ）注射的方法，研究不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）分泌的影响。结果表明：促甲状腺激素释放激素（ＴＲＨ）、Ｌ－多巴（Ｌ－ＤＯＰＡ）、甲基睾酮（ＭＴ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、促黄体素释放激素类似物（ＬＨＲＨ－Ａ）和三碘甲状腺原氨酸（Ｔ３）都能显著刺激ＧｔＨ的分泌，但最大效应时间各不相同。ＴＲＨ和ＬＨＲＨ－Ａ能促进ＧＨ的分泌，Ｌ－ＤＯＰＡ、ＭＴ、ＧＡＢＡ对血清ＧＨ水平没有明显影响；Ｔ３则对ＧＨ分泌有一定的抑制作用。这说明鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ的分泌除了受各自的下丘脑释放因子和释放抑制因子的双重神经内分泌调控外，还受多种其它相同和不同调节因子的影响，也反映了鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ分泌的神经内分泌调控的复杂性。

E_2对鲤鱼生长激素分泌的影响:离体研究

采用离体灌流孵育的方法研究了１７β－雌二醇（Ｅ２）对鲤鱼脑垂体生长激素（ＧＨ）分泌的影响．结果表明：１μｍｏｌ／ＬＥ２作用于性腺成熟期鲤鱼脑垂体碎片３０ｍｉｎ后，ＧＨ基础分泌显著提高，２ｈ后达到最大值，随后逐步下降，４ｈ后ＧＨ基础分泌水平与作用前无显著性差异．用Ｅ２（１μｍｏｌ／Ｌ）进行１０～１２ｈ的过夜孵育，ＧＨ的基础分泌无显著性变化，但影响了脑垂体对ＬＨＲＨ－Ａ和ＴＲＨ刺激的反应性，对前者有抑制作用。

转生长激素基因鲤鱼的生长研究

本文报导了生长激素基因对鲤鱼生长影响的研究。经池塘对照实验表明，转生长激素基因鲤鱼的快速生长效应比正常鲤鱼明显，而且由转生长激素基因阳性性成熟鲤鱼经人工催产繁殖的子一代群体中，仍表现出快速生长的特性、这一结果，为能获得一个转外源生长激素基因并具快速生长特性的遗传稳定的转基固鲤鱼核心群体提供了可靠的数据。

重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响

选用体质量 5 0 kg左右的去势长白×大约克公猪 16头 ,随机分为试验组和对照组 ,试验组猪每日肌肉注射重组猪生长激素 (rp GH) 4 m g/头 ,2 8d后屠宰采集背部皮下脂肪 ,用 RT- PCR方法 ,以 18S r RNA作内标 ,定量分析脂肪组织中生长激素受体 (GH- R)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)、胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)和瘦蛋白(L eptin)的 m RNA丰度。结果显示 ,试验猪脂肪细胞 GH- R m RNA丰度比对照猪增加了 5 0 .9% (P<0 .0 5 ) ,IGF- 1m RNA丰度增加 2 7.8% (P<0 .0 5 ) ,IGF- R m RNA丰度增加 4 8.1% (P<0 .0 1) ,而 L eptin m RNA丰度则比对照猪减少 2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结果提示 ,生长激素不仅可以直接调节脂肪组织 ,还可能通过脂肪 GH- R介导产生 IGF- 以旁 (自 )

细胞外Ca^(2+)和K^+对鲤鱼脑垂体离体生长激素分泌的影响

采用脑垂体离体灌流孵育系统,研究细胞外 Ca^(2+)和 K^+对鲤鱼脑垂体基础的和鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)刺激的生长激素(GH)分泌的影响。离体灌流孵育的鲤鱼脑垂体基础 GH分泌和 sGnRH 刺激的 GH 分泌都是细胞外 Ca^(2+)依赖的,缺细胞外 Ca^(2+)存在时,基础 GR分泌显著下降,2分钟脉冲式 sGnRH 刺激的 GH 分泌反应接近消失。Ca^(2+)通道阻滞剂异搏定以剂量依存形式显著抑制基础的和2分钟脉冲式sGnRH 刺激的 GH 分泌,表明细胞外 Ca^(2+)的作用至少部分通过细胞膜电位敏感性 Ca^(2+)通道。50mM K^+显著刺激基础GH 分泌,并显著加强高剂量sGnRH 刺激的GH 分泌,且K^+的作用是细胞外 Ca^(2+)依赖的。

重组鲤鱼生长激素的试验制备与纯化

采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 。