麻疯树鲨烯合酶基因SQS的克隆及生物信息学分析

以麻疯树(Jatropha curcas L.)总RNA为模板,根据已报道的鲨烯合酶基因序列设计简并引物,用RACE方法克隆得到麻疯树鲨烯合酶基因全长cDNA,命名为JcSQS。JcSQS全长1609 bp,包含1个1242 bp的开放阅读框,预测麻疯树鲨烯合酶基因编码的蛋白含有413个氨基酸。JcSQS具有鲨烯合酶类的保守结构域,JcSQS蛋白与蓖麻、柿、木榄等植物中SQS基因编码的氨基酸序列具有高度同源性。这为研究麻疯树萜烯类物质的生物合成和调控机制奠定了基础。

黄独微型块茎诱导形成中SQS基因表达的qRT-PCR分析

目的对黄独微型块茎鲨烯合酶（SQS）基因的表达量进行分析，旨在为阐明黄独微型块茎不同诱导形成时期皂苷的合成机制提供理论依据。方法以Actin基因为内参基因，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析技术。通过对不同诱导形成时期的黄独微型块茎进行取样并提取RNA，反转录获得cDNA作模板，利用sybrGreen I成功构建了目的基因SQS和Actin的扩增曲线和熔解曲线。结果定量结果表明，SQS基因在黄独微型块茎诱导形成的初期（第18～36天）。表达量显著增加；在黄独微型块茎诱导形成的中期（第36-72天）SQS基因的表达量显著下降，并趋于稳定；在黄独微型块茎诱导形成的后期（第72-90天）SQS基因的表达量再次显著下降。结论在黄独微型块茎诱导形成的过程中，SQS基因的表达量呈现出“低-高-低-不变-低”的变化趋势，推测SQS是黄独微型块茎诱导形成中皂苷生物合成的关键酶。