17400 鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化及生物学活性研究

采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex-75柱层析和C_4反相高效液相色谱等分离步骤,从广东阳江鲨鱼软骨中纯化获得新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子SCAI-c(Shark Cartilage Angiogenesis In-hibitor-c,SCAI-c);SDS-PAGE电泳银染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量为17 400;它对鸡胚绒毛尿囊膜血管的形成具有显著抑制效应,并有明显的浓度依赖关系.SCAI-c与SCAI-a具有类似的生物学特征.

基因重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子的发酵条件优化

采用三角摇瓶来优化基因工程菌表达重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子(SCAIF)的最佳发酵条件,并以此为基础在Biotop CF-10L自动控制发酵罐进行发酵培养.基因工程菌BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)诱导表达SCAIF蛋白的最佳摇瓶培养条件是:接种量为2%、装液量为75 mL/500 mL、加入IPTG的诱导时间为培养2 h后、IPTG浓度为0.25 mmol/L、诱导时间为2 h.BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)菌种在Biotop CF-10L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到10 L发酵培养基中,设定pH7.0,温度37℃,培养4 h后,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,诱导2 h后终止发酵.发酵罐中获得的菌体量为10.2 g/L,蛋白表达率为25%左右.

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的研究进展

目的 综述鲨鱼软骨血管生成抑制因子 (SCAIF)的研究进展 ,为改进制备工艺和临床治疗提供依据。方法 依据文献资料结合我们的研究成果 ,综述不同作者从不同鲨鱼软骨中提取的SCAIF的理化性质 ,生物活性 ,抗肿瘤试验研究及临床疗效 ,评述其应用前景。结果 近 10年来 ,不同实验室从不同鲨鱼软骨中获得了相对分子量大小不一 ,生物活性亦有差异的SCAIF ,但它们都具有抑制血管生成的生物活性和对荷瘤小鼠的确切抑瘤效果。尽管临床疗效观察结果不一 ,究其原因可能与制剂纯度和病例选择等因素有关。结论 应用高纯度的SCAIF于临床治疗 ,因其具有生物活性高 ,不易产生耐药性 ,天然而无明显的毒副作用等优点 ,在治疗肿瘤及其它血管增生性疾病中 。

血管生成抑制蛋白1、血清沉默信息调节因子1、血栓素-B_(2)在2型糖尿病肾病中的水平变化及与白蛋白尿进展的关系分析

目的:探究血管生成抑制蛋白1(VASH-1)、血清沉默信息调节因子1(Sirt1)与血栓素-B2(TXB2)在2型糖尿病肾病中的水平变化及与白蛋白尿进展的关系。方法:选取198例2型糖尿病肾病患者纳入研究组,另选100例无肾脏损害的2型糖尿病患者为对照组,对患者进行随访,检测记录患者的血清VASH-1、Sirt1、TXB2水平,并根据患者是否发生白蛋白尿分层研究,分析VASH-1、Sirt1、TXB2水平与患者白蛋白尿进展的关系。结果:与对照组比较,研究组患者的血清VASH-1、Sirt1水平降低,TXB2水平升高(均P<0.05)。与进展组患者相比较,维持组患者的血清VASH-1、Sirt1水平升高,TXB2水平降低(均P<0.05)。进展组和维持组患者的空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)。以研究组患者是否发生白蛋白尿进展为因变量,以患者的血清VASH-1、Sirt1、TXB2水平为自变量,进行多因素Logistic回归分析,可知血清VASH-1、Sirt1、TXB2水平均会对患者发生白蛋白尿进展产生影响(均P<0.05)。采用ROC曲线探究2型糖尿病肾病患者血清VASH-1、Sirt1、TXB2水平对白蛋白尿进展的预测价值,其AUC值分别为0.943、0.758、0.894(均P<0.05)。结论:2型糖尿病肾病患者的血清VASH-1和Sirt1的水平下降,TXB2的水平上升,其水平变化与白蛋白尿的进展有关,对糖尿病肾病患者发生白蛋白尿进展具有一定预测价值。

血清血管生成抑制蛋白-1成纤维生长因子-23联合尿β2-微球蛋白对DN的诊断价值

目的探究血清血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)、成纤维生长因子-23(FGF23)联合尿β2-微球蛋白(β2-MG)对糖尿病肾病(DN)的诊断价值。方法选取2022年1月至2023年5月在焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院进行治疗的115例DN患者作为DN组,选取同时期本院60例健康体检者为对照组。根据24 h尿清蛋白排泄率(URER),将DN组分为单纯糖尿病组(A组,35例)、微量清蛋白尿组(B组,41例)和大量清蛋白尿组(C组,39例);比较受试者血清VASH-1、FGF-23水平、尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平;采用Pearson法对血清VASH-1、FGF-23水平与尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平进行相关性分析;采用多因素logistic回归分析DN发生的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清VASH-1、FGF-23联合尿β2-MG对DN的诊断价值。结果DN组血清VASH-1、FGF-23、尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平均高于对照组(P<0.05);C组患者血清VASH-1、FGF-23、尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平均高于B组和A组(P<0.05);DN患者血清VASH-1、FGF-23水平与尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平均呈正相关(P<0.05);血清VASH-1、FGF-23、尿素、肌酐含量、尿β2-MG水平均为影响DN发生的危险因素(P<0.05);血清VASH-1、FGF-23、尿β2-M联合诊断DN价值高于单独诊断(Z_(三者联合-VASH-1)=4.389、P<0.001,Z_(三者联合-FGF-23)=3.117、P=0.002,Z_(三者联合-β2-MG)=4.556、P<0.001)。结论DN患者血清VASH-1、FGF-23、尿β2-MG水平与疾病的发生发展有关,且三者联合诊断效果较好,有望为DN的诊断提供一定的临床诊断价值。

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的抗体制备与组织特异性表达的检测

纯化鉴定了鲨鱼软骨血管生成抑制因子 (SharkCartilage derivedAngiogenesisInhibitoryFactor Ⅰ ,SCAIF Ⅰ )的纯度及分子质量 .采用新西兰大白兔背部皮下多点注射法制备了SCAIF Ⅰ的多克隆抗体 ,测定了抗体的效价 .通过Westernblot检测 ,证明了SCAIF Ⅰ相关蛋白在哺乳动物中的广泛分布及SCAIF Ⅰ在鲨鱼软骨中的组织特异性表达 .

鲨鱼软骨中血管生成抑制因子的活性检测

本文通过大量的鸡胚绒毛尿囊膜实验,检测了我们所提取的鲨鱼软骨中血管生成抑制因子的活性,并用统计数据定量地说明了抑制因子的活性大小。

鲨鱼软骨制剂抑制血管生成的研究

以鲨鱼软骨为原料 ,经盐酸胍抽提 ,丙酮分级沉淀 ,超滤等步骤得到鲨鱼软骨制剂 (sharkcartilagepreparation ,SCP) .利用整装细胞扫描电镜方法测定SCP对血管内皮细胞骨架系统的影响 ,体外细胞迁移实验测定它对内皮细胞迁移的抑制效应 ,及鸡胚绒毛尿囊膜实验测定对血管生成的抑制效应 .结果表明SCP能显著抑制内皮细胞的骨架形成 ;显著抑制内皮细胞的迁移 ,并有明显的浓度依赖关系 ;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成 .细胞骨架是细胞分裂增殖及运动迁移的基础 ,血管内皮细胞的运动迁移又是血管生成的基础 ,因此SCP的作用机理可能是通过抑制细胞骨架的形成 ,抑制内皮细胞的运动迁移 。

鲨鱼软骨血管形成抑制因子的分离纯化及其活性的初步研究

以广东阳江鲨鱼软骨为原料 ,研究了鲨鱼软骨新生血管形成抑制因子的分离纯化方法 ,并对其生物学活性进行了初步研究 .采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex G-75柱层析和 C4反相高效液相色谱等步骤 ,分离纯化出一种新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子 -a( Shark Cartilage Angiogenesis Inhibitor-a,SCAI-a) ,分子量为 1 2 60 0 。

鲨鱼软骨血管形成抑制因子研究与开发现状

通过抗新生血管增生达到抑制肿瘤目的是当今抗癌研究与治疗的热点。鲨鱼软骨提取物含有高浓度新生血管形成抑制因子,经实验研究和临床试用,都显示鲨鱼软骨提取物具有抗肿瘤生长作用。鲨鱼软骨有很大开发利用前景。

鲨鱼软骨血管抑制因子的高效液相色谱与电喷雾质谱研究

The studies of SCAIF I(an unknown protein) by HPLC and ESIMS was reported in this paper. The SCAIF I is a kind of antiangiogenesis extracted from shark cartilage. The extracted protein was purified by HPLC and then studied by ESIMS. The molecule weight of the SCAIF I protein was confirmed to be 15 601 in the first time. Peptide map of the unknown protein was obtained by HPLC ESIMS with a trypsin digestion and possible partial sequences were deduced with the online CID technique. With partial sequence information the homologous proteins are searched with protein database. The homology of SCAIF I summarized in this work is useful in further studies of this unknown protein.

赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化及抗血管生成活性验证

以赤魟软骨为原料,通过盐酸胍抽提、离子交换层析、凝胶过滤、反相高效液相色谱等步骤,首次获得赤魟软骨血管生成抑制因子-I(Dasyatis akajei cartilage angiogenesis inhibitory factor-I,DCAIF-I)。12%的SDS-PAGE电泳-考染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量约为62 ku。通过鸡胚绒毛尿囊膜活性抑制模型进行活性分析,结果表明,活性物质处理组(DCAIF-I组)与阳性对照组(CS组)抑制效果明显,CAM上的血管发生大面积褪色,血管结构模糊,分枝发生断裂,血管密度减少。PBS对照组血管网清晰,呈叶脉状、放射状生长。血管定量分析结果表明,随着活性物质处理组DCAIF-I含量的增加,CAM上血管的数量减少更加明显,当DCAIF-I含量为1μg时,对CAM上血管的抑制率达56%,结果表明,DCAIF-I对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成具有明显的抑制效果,且抑制活性具有一定的浓度依赖性。

赤魟软骨血管生成抑制因子的分离纯化

确定了制备高纯度赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化工艺，并通过胶原酶模型、CAM模型验证其生物学活性。正交实验确定了赤魟软骨组织抽提的最佳条件，抽提产率可达0．84％。丙酮分级沉淀对抽提产物进行粗分离，25～35％的丙酮分级产物的CAM血管生成抑制率达85％。优化离子交换层析、凝胶过滤、反相层析的条件，可进一步有效的获得高纯度的赤魟软骨血管生成抑制因子-Ⅰ（DCAIF-Ⅰ）。SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色显示为一条带，分子量为62kDa。活性验证结果表明，DCAIF-Ⅰ对胶原酶具有一定的抑制活性，抑制率为36．3％，对CAM血管生成的抑制活性具有一定的剂量依赖关系。

一线EGFR-TKIs联合血管生成抑制剂治疗晚期EGFR突变非小细胞肺癌的疗效分析

目的:比较一线表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)联合血管生成抑制剂对比EGFR-TKIs单药治疗晚期EGFR突变非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的疗效和安全性。方法:对PubMed、Embase、Web of Science和Cochrane Library数据库以及欧洲医学肿瘤学会(ESMO)、美国临床肿瘤学会(ASCO)中会议摘要进行了全面的文献检索。检索时间截止至2020年11月13日。使用STATA V.14.0对相关数据进行统计分析。结果:本meta共纳入6个II/III期RCTs(11篇文章),包括1537例符合分析条件的NSCLC患者。结果表明,与EGFR-TKIs单药组相比,联合血管生成抑制剂组患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)显著延长(HR=0.62,95%CI 0.54~0.70,P<0.001)。然而,联合治疗并不能改善患者的总生存期(overall survival,OS)(P=0.536)、客观缓解率(objective response rate,ORR)(P=0.186)和疾病控制率(disease control rate,DCR)(P=0.918)。联合治疗组发生grade3+不良事件(RR=1.80,95%CI 1.46~2.22,P<0.001)和严重不良事件(RR=1.48,95%CI 1.22~1.81,P<0.001)的风险较EGFR-TKIs单药组增加。其中联合治疗组患者蛋白尿、高血压和腹泻的发生显著增加。此外,亚组分析结果表明,联合治疗组中Ex19del(HR=0.62,95%CI 0.51~0.75,P<0.001)和Leu858Arg(HR=0.62,95%CI 0.51~0.75,P<0.001)突变的NSCLC患者获益相当。结论:一线EGFR-TKIs联合血管生成抑制剂可以显著延长晚期EGFR突变NSCLC患者的PFS。尽管联合组不良反应发生率增加,但毒性尚可耐受和管理。联合治疗可作为晚期EGFR突变NSCLC患者一线选择。

软骨血管生成抑制因子抑制血管生成的研究

小牛气管软骨经盐酸胍抽提，丙酮分级沉淀，膜超滤，柱层析等步骤得到软骨血管生成抑制因子（ｃａｒｔｉｌａｇｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＣＡＩＦ）．ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示ＣＡＩＦ由单一组分组成，分子量为２７７００．通过［￣３Ｈ］－ＴｄＲ掺入，活细胞检测等方法测定ＣＡＩＦ对内皮细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＱＧＹ７７０３细胞与小鼠骨髓细胞、人皮肤成纤维细胞等的ＤＮＡ合成的影响，以及细胞毒作用．采用鸡胚绒毛尿囊膜实验测定ＣＡＩＦ对血管生成的抑制效应．结果显示：ＣＡＩＦ对内皮细胞产生强的抑制作用，对Ｈｅｌａ细胞抑制很弱，对ＱＧＹ７７０３细胞、小鼠骨髓细胞、人皮肤成纤维细胞均无抑制作用；对鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成产生明显的抑制作用．提示ＣＡＩＦ能较特异地抑制血管生成，ＣＡＩＦ达到电泳纯，是专一性较强的血管生成抑制因子．

中国姥鲨软骨新生血管抑制因子的分离纯化及理化性质检测

实验用盐酸胍抽提、超滤、层析等方法 ,从中国姥鲨软骨中分离纯化到一种新生血管抑制因子 (shark cartilage derived inhibitor,SCDI) ,得率为 1/ 6 0 0 0 0经毛细管电泳检测 ,其纯度为90 .6 7% ;SDS- PAGE电泳及等电聚焦电泳结果表明 :SCDI的分子量为 16 10 0 D,等电点为 8.15;氨基酸组成分析表明 SCDI含有 2 0种氨基酸 ,其中以 L eu、Ile和

中国姥鲨软骨新生血管抑制因子的生物学活性研究

实验对分离纯化了的姥鲨软骨新生血管抑制因子 (Shark cartilage derived inhibitor,SCDI)进行了生物学活性研究 ,结果表明它对 型胶原酶、内皮细胞 DNA合成、角膜新生血管和荷瘤小鼠的肿瘤生长具有较明显的抑制作用。12 μg SCDI可竞争抑制一个单位的胶原酶活性 ;其对小鼠心肌和肺毛细血管内皮细胞 DNA合成的 IC50 分别为 3.38μg和 11.74 μg;高剂量组 (40 μg)和低剂量组 (10μg) SCDI对家兔眼角膜新生血管的抑制率分别为 70 .2 4 %和 38.38% ;SCDI在 2 0 mg/kg的剂量下对 B16黑色素瘤和 L ewis肺癌的抑瘤率分别为 4 5.4 5%和 37.84 % .

血管生成抑制因子K4K5 cDNA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物r K4K5分子量约 2 1 5kD ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 15 0～ 2 5 0mg/L。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成。

用CAM技术评价鲨鱼软骨提取物抑制新生血管生长的活性

采用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）技术，检测了鲨鱼软骨提取物（SCAE）抑制新生血管生长的活性。其方法是将肿瘤组织、SCAE等样品接种在置于孵化5d鸡胚CAM膜上的硅环中，继续孵育2d后取膜，观察新生毛细血管生长情况，并采用Crums顺序进行评判。结果表明，SCAE能显著地抑制CAM的新生血管生长，并对BI。黑色素瘤促新生血管形成作用亦有非常显著的抑制作用。