鲶鱼骨蛋白酶解物中抗菌活性物质的初步分离纯化

用胃蛋白酶酶解鲶鱼头、鱼骨,酶解得到抑菌活性较高的鲶鱼骨酶解液,然后对酶解液进行初步分离与纯化。鲶鱼骨蛋白抑菌活性最强的酶解物经过超滤(MW3 000 u)和Sephadex G-15凝胶层析分离纯化,采用比浊法和滤纸片法测定其抑菌活性。结果表明,分离纯化后,酶解混合物对大肠杆菌、藤黄微球菌以及枯草杆菌的抑菌活性都有一定的提高,其中层析后峰2的抑菌活性最强,峰2对大肠杆菌、藤黄微球菌以及枯草杆菌的抑菌活性要比酶解粗品提高1倍左右,且各组分的平均分子质量均在1 500 u以下。峰2经反相高效液相色谱分析得出,组分由70多种物质组成,要想得到纯的抗菌活性物质还需要进一步深入研究。

鲶鱼骨酶解物抗氧化活性及其稳定性研究

探讨鲶鱼骨酶解物体外抗氧化活性及其抗氧化稳定性。测定不同浓度酶解物对羟自由基(.OH)、H2O2和超氧阴离子自由基(O2-)的清除效果,观察其抗氧化活性及其剂量效应关系;将酶解物溶液进行不同pH、温度、微波以及紫外光照射处理,观察其抗氧化活性的变化。结果表明:在试验浓度下,酶解物对.OH、H2O2和O2-均有较强的清除能力,其清除作用随着酶解物浓度的增加而增强,清除作用的IC50分别为6.47、15.96、12.50 mg/mL;在pH2~9范围内、80℃~121℃加热条件下,以及20 min^120 min紫外线照射和0 min^5 min微波处理时,酶解物的总体抗氧化活性变化不大。鲶鱼骨酶解物具有较强的抗氧化作用且抗氧化活性基本稳定。

鲶鱼骨蛋白酶解产物抗菌性的酶解工艺优化

采用四因子二次通用旋转设计,以抑菌率为测定指标,对胃蛋白酶水解革胡子鲶Claris lareza鱼骨蛋白的条件进行了优化,同时测定了酶解产物中可溶性肽的含量,以分析抑菌率与可溶性肽含量之间的相关关系。经Design Expert 7.1.2软件优化,得出胃蛋白酶酶解鲶鱼骨蛋白的最优条件为:底物浓度0.277kg/L,加酶量1 408 U/g,水解温度39.2℃,水解时间4.86 h,在此条件下获得的水解物,对大肠杆菌、藤黄微球菌及枯草芽孢杆菌的抑菌率分别为71.40%、56.88%和64.54%。通过SAS软件分析二者的相关性,发现可溶性肽含量和抑菌率之间并不存在相关性。

鲶鱼骨酶解物抑菌性能研究

以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌3种菌为受试菌,研究了鲶鱼骨酶解物的抑菌性能,并初步探讨了鲶鱼骨酶解物抑菌作用的稳定性。结果表明,鲶鱼骨酶解物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌都有明显的抑制作用,其中对藤黄微球菌抑制作用最强,其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别是6 mg/mL和8 mg/mL,鲶鱼骨酶解物的抑菌活性具有较好的热稳定性和pH不稳定性。

鲶鱼骨酶解物的降血压肽活性研究

以鲶鱼骨蛋白为原料制备ACE抑制肽,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶进行酶解,通过体外检测法测定其抑制率,优选出最佳用酶。通过单因素试验和正交试验,确定了碱性蛋白酶酶用量、pH、酶解温度、酶解时间、底物浓度等因素对ACE活性抑制效果的影响。结果表明:利用碱性蛋白酶水解鲶鱼骨,酶用量为500U/g、pH值8.5、温度为60℃、底物浓度为0.33kg/L、时间6h时酶解液对ACE的抑制活性最强,抑制率为88.36%。通过比较,最佳酶解条件下得到的降血压肽的ACE抑制率要高于降血压药尼莫地平和硝苯地平的ACE抑制率。

鲶鱼骨酶解物的抗氧化活性研究

主要探讨鲶鱼骨酶解物的抗氧化活性,利用羟自由基(.OH)抑制实验、还原力的测定和油脂抗氧化实验判断酶解物的抗氧化活性。结果表明,酶解物对羟自由基有较强的清除能力,且随着浓度的增大,清除羟自由基的能力增强,半数抑制率(IC50)为0.374 g/L;酶解物的还原能力随着其浓度的增加而增强,呈剂量效应关系;在猪油中添加0.01﹪和0.05﹪的酶解物,其酸价和过氧化值均低于空白组,说明酶解物能抑制猪油的酸败。从而得出结论:鲶鱼骨酶解物具有较强的抗氧化活性。本研究为动物骨的综合开发及酶解物在食品与医药工业中的应用提供了理论依据。

利用鲶鱼骨及碎肉开发骨肉粉的工艺技术研究

以八须革胡子鲶鱼骨及碎肉为原料,通过高压蒸煮、绞碎、酶解、打浆、真空冷冻干燥或喷雾干燥等工艺制成鲶鱼骨肉粉,作为宠物食品加工中的配料。实验确定了中性蛋白酶为最适水解用酶。以骨肉粉的溶解性为指标,通过正交试验,确定了中性蛋白酶酶解鲶鱼骨及碎肉的最佳条件为:酶用量2 200 U/g、50℃酶解时间6 h、pH 7.0、底物浓度1.0∶3.0;真空冷冻干燥骨肉粉的水分含量为3.67%,喷雾干燥后骨肉粉的水分含量为8.09%,真空冷冻干燥方法生产的骨肉粉溶解度为37.14%,高于喷雾干燥方法的33.73%。对采用喷雾干燥方法生产的骨肉粉进行37℃保温试验,在贮存到第8周时,菌落总数为5.08 CFU/g,TBARS值为1.53 mg/100 g。推测该骨肉粉在常温条件下可贮存8～10个月。

鲶鱼骨蛋白酶解产物与其他防腐剂抑菌效果的比较

试验用胃蛋白酶酶解鲶鱼头、鱼骨,酶解得到抑菌活性较高的鲶鱼骨酶解液,冷冻干燥后配成不同浓度,与常用食品防腐剂进行抑菌活性的比较。确定了鲶鱼骨蛋白酶解液对大肠杆菌、藤黄微球菌,以及枯草杆菌的最低抑菌浓度。结果表明,质量分数为1%的酶解液对大肠杆菌的抑制作用,是质量分数为0.025%Nisin的5～6倍,是0.1%SDA的2～3倍,是1%大蒜汁的1～2倍;对藤黄微球菌的抑制作用与0.025%的Nisin作用相当,是0.1%SDA的4倍,是1%大蒜汁的1～2倍;对枯草杆菌的抑制作用与0.025%的Nisin作用相当,是0.1%SDA的2倍。可见,酶解液粗品具有很强的抑菌活性。鲶鱼骨酶解液对大肠杆菌、藤黄微球菌以及枯草杆菌的最低抑菌质量分数分别为0.04%,0.04%和0.08%。

鲶鱼骨酶解产物抑菌活性的酶解工艺优化

试验以鲶鱼头、鱼骨为原料,通过先匀浆后高压、先高压后匀浆、直接匀浆3种不同的预处理方法,以蛋白质含量为指标,选出一种最优的预处理方法。利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶5种酶分别在各自最适条件下对其进行水解,采用正交试验设计,以大肠杆菌、枯草杆菌和藤黄色葡萄球菌为供试菌种,以抑菌性为测定指标确定酶解的最佳用酶以及酶解的工艺条件。试验结果表明:对鲶鱼头、鱼骨先高压后匀浆的预处理方法得到的蛋白质含量最高;胃蛋白酶为酶解鲶鱼骨的最佳用酶;胃蛋白酶的最佳酶解工艺条件为:底物浓度为1∶4,酶添加量为2000U/g,酶解时间2.5h,酶解温度37℃,最适pH值7.0。