基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨莪术-鳖甲药对抗肝纤维化的作用机制

采用网络药理学、分子对接技术和实验验证探讨莪术-鳖甲药对(Curcumae Rhizoma-Trionycis Carapax,CRTC)抗肝纤维化的作用机制。首先搜集鳖甲和莪术的化学成分和靶点信息;然后将两味药的作用靶点合并去重。使用疾病数据库以获取肝纤维化的相关基因。提取CRTC和肝纤维化的交集靶点,进一步对“药物-潜在活性成分-潜在靶点”网络进行可视化展示。将交集靶点导入STRING数据库以构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI);然后进行GO功能和KEGG通路富集分析并可视化,再用Autodock Vina软件实现分子对接模型的构建。最后通过体内实验对网络药理学预测的靶点及通路进行实验验证。共筛选得到CRTC与肝纤维化的交集靶点共65个。PPI网络中筛选得到度值排名前四的靶点分别为白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt serine/threonine kinase 1,AKT1)、信号传导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG)。GO功能富集分析显示涉及的生物过程有1025条,细胞组分有41条,分子功能有84条;KEGG通路富集分析得到149条通路,其中关键通路有EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性。分子对接结果显示IL-6、STAT3等核心靶点与其对应成分均有良好的结合活性。体内动物实验结果证实CRTC能改善肝纤维化的病理学形态,且显著抑制了IL-6、EGFR、STAT3的表达。综上所述,CRTC通过多靶点、多通路发挥其抗肝纤维化作用,其机制与网络药理和分子对接技术预测的IL-6/EGFR/STAT信号轴相关。

青蒿-鳖甲药对配伍治疗系统性红斑狼疮小鼠的代谢组学研究

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)小鼠(MRL/lpr)经青蒿-鳖甲药对治疗后血清代谢物的变化,探讨SLE发病及药物作用机制。方法采集对照组、SLE模型组和青蒿-鳖甲药对治疗组(低、高剂量组)小鼠的血清样本,应用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用系统(HPLC-Q-TOF/MS),对样本进行代谢图谱分析。应用Mass Hunter和MPP软件处理数据,数据模式识别采用有监督的偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。结果代谢组学分析发现,SLE模型小鼠存在较明显的脂代谢紊乱。与模型组相比,药物组可以改善狼疮鼠体内脂质代谢异常,影响SLE疾病血栓的发生发展;并且可以改善SLE小鼠急性期的炎症反应,减少其病理损害。结论青蒿-鳖甲药对通过调节SLE小鼠的脂质代谢及炎症反应对其发挥一定的治疗作用。

青蒿-鳖甲药对配伍对MRL/lpr狼疮小鼠IL-6、IFN-γ分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的:观察青蒿-鳖甲药对对MRL/lpr狼疮模型小鼠相关免疫指标及狼疮性肾炎(lupus nephri-tis,LN)病理改变的影响,探索青蒿-鳖甲药对对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的治疗机理。方法:采用ELISA方法检测小鼠血清中的IL-6、IFN-γ含量,对肾脏组织进行HE常规染色及PAS、Masson特殊染色。结果:灌胃青篙-鳖甲药对水煎液后,低、高剂量组MRL/lpr小鼠血清中的IL-6水平显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01);高剂量组血清中的IFN-γ水平与模型组相比,显著下降(P<0.05);高剂量组肾脏组织HE、PAS、Masson染色病理改变差异显著。结论:青蒿-鳖甲药对能抑制MRL/lpr小鼠血清中IL-6的生成,减少小鼠血清中IFN-γ的分泌,能明显改善小鼠狼疮性肾炎的病理状态。

青蒿—鳖甲药对对阴虚内热肺癌晚期患者肿瘤标志物、肾上腺皮质醇及性激素水平的影响

目的:观察青蒿—鳖甲药对对阴虚内热肺癌晚期患者肿瘤标志物、肾上腺皮质醇及性激素水平的影响。方法:将105例纳入病例随机分为观察组54例和对照组51例,对照组给予标准GP化疗方案,观察组在对照组的基础上给予青蒿—鳖甲药对。治疗2个化疗周期之后观察两组肿瘤标志物(CEA、CA125、CYFRA21、NES)、肾上腺皮质醇(Cor)及性激素(T、E2、FSH、LH)水平的变化。结果:治疗后,两组CEA、CA125、CYFRA21、NES明显下降(P<0.05),且观察组降幅大于对照组,治疗后同期比较有统计学差异(P<0.05);观察组Cortisol及E2、FSH明显下降而T、LH则上升(P<0.05),对照组Cor明显下降(P<0.05)而性激素各指标无明显变化(P>0.05),治疗后同期两组Cor及E2、FSH、T、LH比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:青蒿—鳖甲药对具有抑制肿瘤标志物表达、调节内分泌紊乱的作用。

张小玲临证应用鳖甲药治疗肿瘤相关病证经验探析

张小玲教授系宁波市名中医,临证经验丰富,辨证思路清晰,对经方应用得心应手,并能够随机化裁,灵活多变,形成了“药对-病机”的学术思想。余乃张小玲教授学术继承人,有幸师从左右,聆听教导,现选取老师临证经典病案,阐述其临床应用鳖甲药治疗肿瘤相关病证的学术思想,以供同道借鉴。1鳖甲与淡竹叶、生地:透热转气患者男,52岁,于2017年11月14日在宁波市第二医院全麻下行“腹腔镜下直肠癌根治术”,术后病理示:(直肠)腺癌,中分化,大小5 cm×3 cm×1.5 cm,浸润至肠壁外纤维脂肪组织,神经侵犯(+)。

鳖甲-莪术药对对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力及其上皮间质转化的作用及机制

目的探究鳖甲-莪术药对对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响及细胞上皮间质转化(EMT)的作用及机制。方法将含药血清体外培养的MDA-MB-231细胞设空白组、单诱导组、鳖甲组、莪术组、鳖甲-莪术组以及紫杉醇组,采用CCK-8法、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法和RT-qPCR法分别检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白及mRNA表达。结果与单诱导组相比,各实验组细胞增殖抑制率增加、细胞迁移率降低、细胞迁徙数目减少(P<0.05),提示各实验组细胞增殖、迁移以及侵袭能力均降低;组间比较,鳖甲-莪术组对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率高于鳖甲组和莪术组(P<0.05);与单诱导组相比,各实验组的E-cadherin蛋白及mRNA表达均上升,Vimentin、N-cadherin、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达均下降(P<0.05);组间比较,鳖甲-莪术组E-cadherin蛋白及mRNA表达最高,Vimentin、N-cadherin、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达低于鳖甲组、莪术组(P<0.05)。结论鳖甲-莪术药对能抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力及其EMT进程,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路中某些蛋白及基因水平有关。