鳞柄小奥德蘑多糖提取工艺的优化及抗氧化活性

研究鳞柄小奥德蘑多糖的最佳提取工艺及其体外抗氧化活性。采用正交实验法优化提取工艺,蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定多糖含量,分别采用普鲁士蓝法、水杨酸法和邻苯三酚自氧化法测定鳞柄小奥德蘑多糖的抗氧化能力。研究结果显示,影响鳞柄小奥德蘑粗多糖得率的主次因素为:料液比>提取时间>提取温度>提取次数,多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶40,提取时间1 h,提取温度90℃,提取次数3次。在最佳提取工艺条件下,水提法提取鳞柄小奥德蘑粗多糖的得率约8.84%。体外抗氧化活性测定结果表明,鳞柄小奥德蘑粗多糖对·OH的清除效果比较明显,随着质量浓度的升高,清除效果越发显著(p<0.05),4 mg/m L的粗多糖对·OH的清除率达48.94%±12.32%;鳞柄小奥德蘑粗多糖具有一定的还原能力;对O-2·的清除能力较弱。因此,鳞柄小奥德蘑中粗多糖的含量较高且具有一定的抗氧化能力,可用于开发研制多糖药物和保健性食品等深加工产品。

鳞柄小奥德蘑两变种栽培比较

成功的实现了鳞柄小奥德蘑两变种的人工栽培 ,其中鳞柄小奥德蘑双孢变种为首次报道。就鳞柄小奥德蘑原变种和鳞柄小奥德蘑双孢变种的菌株进行了对比栽培研究。结果表明 ,鳞柄小奥德蘑原变种菌株 2 85和鳞柄小奥德蘑双孢变种菌株 2 2 3在菌丝最佳生长温度、最适出菇温度、采菇期及生物效率等方面存在差异 ,在云南前者适合于夏季栽培 ,而后者则适于秋。

鳞柄小奥德蘑多糖对巨噬细胞免疫功能的调节作用

研究鳞柄小奥德蘑多糖对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用。采用灌洗腹腔法收集小鼠巨噬细胞,建立其体外培养体系;采用鸡血红细胞法、荧光探针标记、总一氧化氮检测和酶联免疫吸附试验等方法分别检测巨噬细胞吞噬能力、NO合成量、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、白细胞介素-6和白细胞介素-12等的分泌量。结果显示,与空白对照组相比,鳞柄小奥德蘑多糖能显著增强体外培养和腹腔内巨噬细胞的吞噬能力和NO合成量,增加体外培养的小鼠巨噬细胞对肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1、白细胞介素-6和白细胞介素-12等细胞因子的分泌量。因此,鳞柄小奥德蘑多糖可能通过提高细胞对NO和多种免疫相关信号分子的分泌量,增强细胞的吞噬能力,进而调节小鼠巨噬细胞的免疫功能。

鳞柄小奥德蘑凝集素的提取及性质研究

以鳞柄小奥德蘑粉为试材,采用磷酸缓冲溶液浸提凝集素,倍比稀释法测定其热稳定性、耐盐性、糖特异性和对多种血红细胞的凝集能力;以凝血活力为指标,采用单因素试验和正交实验优化了鳞柄小奥德蘑凝集素的提取工艺,以期研究鳞柄小奥德蘑凝集素的最佳提取工艺及其凝血活性。结果表明:鳞柄小奥德蘑凝集素可凝集兔、鸡、羊和人的血红细胞,对兔血红细胞的凝集能力最强,凝集能力无物种专一性和血型专一性;具有一定的耐热性和耐盐性,80℃及以上温度处理可显著降低其凝集能力,且随着处理时间的延长,凝集能力逐渐降低,80℃处理50 min或90℃处理10 min,凝集能力消失;含0~0.8 mol·L-1 NaCl的0.01 mol·L-1磷酸缓冲溶液对其凝集能力无显著性影响;特异性糖为N-乙酰-D-半乳糖胺。鳞柄小奥德蘑凝集素的最佳提取工艺为浸提液种类0.01 mol·L-1磷酸缓冲溶液,料液比1∶15 g·mL-1,浸提时间2 h,浸提液pH 7.0。

鳞柄小奥德蘑发酵产物抑菌活性初步研究

采用抑制菌丝生长速率法、活体组织法及盆栽法对鳞柄小奥德蘑发酵产物的抑菌活性进行了研究。结果表明,鳞柄小奥德蘑发酵产物具有较强的抑菌活性,且抑菌活性成分主要分布于菌丝体提取物中。在供试浓度为0.5 mg/mL(菌丝干重)时,其菌丝体丙酮提取物对苹果腐烂病菌(Cytospora sp.)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata (Fries) Keissler)、苹果炭疽病菌(Golletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz.et Sacc.)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis(Nisikado.et Miyake)Shoem.)和番茄灰霉病菌(Botrytis cirerea Pers.et Tris.)等5种病原真菌菌丝生长抑制率均高于80%;在活体组织法测定中,菌丝体丙酮提取物对番茄灰霉病具有较好的防治效果,3 d的治疗效果和保护效果分别为71.2%和76.2%;在盆栽试验中对玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard&Suggs)和小麦白粉病(Blumeria graminis(DC.)Speer.f.sp.tritici Marchal)的治疗效果和保护效果均在60%以上。

鳞柄小奥德蘑多糖对体外培养的巨噬细胞抑制结直肠腺癌细胞生长的影响

【目的】研究鳞柄小奥德蘑多糖对体外培养的巨噬细胞抑制结直肠腺癌细胞生长的影响。【方法】建立巨噬细胞和结直肠腺癌细胞的体外共培养体系,采用四甲基偶氮唑蓝法测定存活细胞数量,荧光探针法标记细胞内NO的合成,Griess法检测NO的分泌量,双抗体夹心法测定诱导型一氧化氮合成酶、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1分泌量。【结果】在一定的浓度范围内,鳞柄小奥德蘑多糖对结直肠腺癌细胞生长无显著影响,但能显著降低共培养体系中结直肠腺癌细胞的数量(P<0.05),增加巨噬细胞对诱导型一氧化氮合成酶合成(P<0.05)、NO和肿瘤坏死因子-α的分泌量(P<0.05)。【结论】鳞柄小奥德蘑多糖可能通过提高巨噬细胞对诱导型一氧化氮合成酶、NO和肿瘤坏死因子-α的合成或分泌,从而抑制结直肠腺癌细胞的增殖、增强巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的能力,并降低了共培养体系中结直肠腺癌细胞的数量。

响应面法优化鳞柄小奥德蘑多糖的提取及其理化性质和营养成分初探

目的:通过响应面法获得鳞柄小奥德蘑多糖的最佳提取工艺,并确定其理化性质和营养成分含量,为日后研究提供理论基础依据。方法:根据Box-Benhnken设计原则,以提取时间、提取温度、提取料液比进行3因素3水平研究,通过Design-Expert软件分析获得的最佳提取条件;通过苯酚硫酸法计算鳞柄小奥德蘑多糖中糖含量;紫外光谱扫描确定多糖中是否含有蛋白质,以考马斯亮蓝法测定蛋白含量;间羟基联苯法测定多糖中糖醛酸含量;全自动氨基酸分析仪测定其中氨基酸含量;原子吸收分光光度法测量微量元素含量。结果:多糖最佳提取条件为提取时间3 h、提取温度80℃、提取液料比为35:1,此条件下多糖提取率为8.72%;鳞柄小奥德蘑多糖中糖含量为28.30%;多糖在280 nm处有明显的紫外吸收峰,测得蛋白质含量为9.40%;多糖中几乎不含糖醛酸;多糖中富含赖氨酸、色氨酸等8种人体必需氨基酸及多种其他氨基酸;多糖中含有铁、铜、锌等多种微量元素。结论:鳞柄小奥德蘑多糖的多种测试结果均表明其理化性质优良,富含多种营养成分,具有广泛的开发空间。