皮肤镜和反射式共聚焦显微镜在角质形成细胞皮肤肿瘤中的应用

角质形成细胞皮肤肿瘤(KSC)是一类发病率逐年上升的肿瘤,与年紫外线辐射量直接相关,根据不同阶段可以分为光线性角化病(actinic keratosis, AK)、鲍温病(Bowen′s disease, BD)和侵袭性鳞状细胞癌(invasive squamous cell carcinoma, SCC)。KSC的诊断主要通过组织病理学确诊,但早期筛查以及后期随访,无创诊断显得尤为重要。皮肤镜(dermoscopy)和反射式共聚焦显微镜(reflectance confocal microscopy, RCM)属于在体观测皮肤表面以及表皮以下细微结构的无创诊断技术,在皮肤疾病诊断中具有极高的应用价值。本文主要总结并探讨KSC在皮肤镜和RCM下的表现特征以及皮肤镜和RCM在KSC的诊断、筛查和随访中的应用。

高内涵分析系统联合激光扫描共聚焦显微镜观察细胞间隧道纳米管

目的隧道纳米管(tunneling nanotubes,TNTs)是存在于细胞间的膜管样结构,具有直接且远距离的生物信息交换功能。TNTs因结构易破坏、存在时间短以及形成后不稳定,故观察其动态形成与功能存在一定难度。而本研究采用高内涵分析系统(HCA)联合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)尝试观察TNTs形成的动态过程及其对囊泡物质的转运功能。方法荧光探针标记人肺腺癌A549及顺铂耐药A549/DDP细胞,分别利用HCA观察TNTs形成过程、LSCM观察TNTs三维结构、HCA联合LSCM分析TNTs囊泡物质转运功能。结果同种肿瘤细胞(A549或A549/DDP)间、不同亚型肿瘤细胞(A549与A549/DDP)间均可形成TNTs结构;与A549细胞相比,A549/DDP细胞间TNTs结构长且粗、形成指数高(A549和A549/DDP细胞TNTs长度、直径和形成指数分别为14.71μm、2.27μm、4和25.44μm、2.59μm、11);肿瘤细胞间通过细胞接触-膜融合-细胞反向易位-胞膜融合区拉长变细,以及细胞膜凸起-膜凸起丝状伪足样拉长-膜凸起与其他细胞膜/膜凸起融合两种方式形成TNTs;TNTs囊泡转运功能具有双向性,囊泡转运速率及数量因转运阶段和供体细胞不同而存在差异,A549/DDP细胞向A549细胞进行囊泡转运过程中表现为囊泡转运速率初始快、末期慢,A549作为供体细胞向受体A549/DDP细胞转运的囊泡数量和比例高于A549/DDP作为供体细胞的反向转运。结论HCA联合LSCM可有效观察、分析TNTs动态形成过程及囊泡物质转运功能。

树突状细胞研究中激光扫描共聚焦显微镜的应用进展

免疫应答是机体重要的防御功能 ,抗原呈递细胞 (Antigenpresentingcells ,APC)是启动特异性免疫应答的关键。树突状细胞 (Dendriticcells,DC)是体内最强的一类APC ,参与免疫应答的双重调控作用。激光扫描共聚焦显微镜 (Laserscanningconfocalmicroscope ,LSCM)由于具有高分辨率、高灵敏度、“光学切片”、三维重建、动态分析等特点 ,为基础医学与临床医学的研究提供了有效手段 ,使DC的研究更加细致和深入。本文就LSCM在DC的形态学、免疫荧光定位、功能学方面的应用最新进展作一综述。

激光共聚焦显微镜观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的增殖

目的观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的形态及其分布。方法新生7dSD大鼠每天2次腹腔注射Brdu,至出生20d及32d分别取脑片标本,用Tritc(罗丹明)标记的麦芽凝集素及FITC标记的小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体行免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察大鼠海马齿状回神经干细胞的形态、分布特点及数量变化。结果激光共聚焦显微镜观察显示,出生20d大鼠海马齿状回Brdu阳性细胞主要聚集在颗粒下层,呈条带状分布,在海马的其他区域也有呈散在的阳性细胞存在,而出生32d大鼠海马齿状回的神经干细胞呈散在分布,数目明显少于20d大鼠。结论新生SD大鼠海马齿状回存在一定数量的神经干细胞,其数量随着大鼠年龄的增大而减少。

皮肤影像技术在鳞状细胞癌诊疗中的研究进展

皮肤鳞状细胞癌是仅次于基底细胞癌的第二常见的皮肤恶性肿瘤。虽然鳞癌的金标准是组织病理学检查,但病理组织取材会给患者造成创伤,因此光学无创诊断技术得到越来越多的关注。本文综述了近年来皮肤镜、高频超声、反射式共聚焦显微镜、皮肤光学相干层析成像技术等皮肤无创影像技术在皮肤鳞状细胞癌诊疗的研究进展。

激光扫描共聚焦显微镜在树突状细胞研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)由于具有高分辨率、高灵敏度、“光学切片”、三维重建、动态分析等优点 ,为基础医学与临床医学的研究提供了有效手段。本文就LSCM在树突状细胞 (DC)的形态学、免疫荧光分析、缝隙连接、功能研究中的应用作一综述。

细胞凋亡过程中细胞骨架改变的激光共聚焦显微镜观察

目的:了解细胞凋亡过程中细胞骨架的形态学改变。方法:应用高浓度全反式维甲酸诱导卵巢癌细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察经荧光染色的细胞微管蛋白的形态学变化。结果:凋亡早期,微管蛋白在荧光相由正常按一定方向分布的丝网状结构变成杂乱分布的网状结构,晚期呈细颗粒状分布,荧光强度随凋亡发展而逐渐变弱。讨论:在凋亡过程中,细胞骨架随凋亡发展出现相应的形态学改变,凋亡早期,细胞骨架在分布上出现变化,伴随细胞形态出现变化,凋亡晚期,细胞骨架蛋白发生降解,此时的细胞形态改变是不可逆的。

利用激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞呼吸爆发

用过氧化物和超氧化物荧光探针ＤＣＦＨ－ＤＡ标记巨噬细胞后，在激光扫描共聚焦显微镜下，用最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，结果显示：检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，经ＰＭＡ作用后，巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度增强，而且各细胞增强的幅度不同。表明：通过检测ＤＣＦＨ－ＤＡ荧光强度变化可原位实时观察单个或多个活细胞内呼吸爆发的动态变化，ＰＭＡ刺激巨噬细胞呼吸爆发作用。

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)在植物细胞学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)有效地排除了非焦平面信息,提高了分辨率及对比度,使图像更为精确清晰。目前已广泛应用于植物细胞学研究,在植物药研究方面有着广阔的应用前景。综述近年来的相关研究以反映其最新进展。

利用膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时系统观察心肌细胞浆内钙离子的释放

目的:采用膜片钳和激光扫描共聚焦显微镜同步实时系统观察心肌细胞钙离子的释放。方法:在体外培养的单个心室肌细胞上进行全细胞模式膜片钳技术和共聚焦显微镜钙成像技术相结合,同步实时记录钙火花和钙离子浓度变化。结果:在全细胞模式膜片钳记录心肌细胞膜钙电流的同时,激光扫描共聚焦显微镜可准确记录到胞浆内出现的钙火花。此技术有可能对于明确钙火花的特征,准确理解兴奋-收缩偶联的微观机制有重要意义。

疣状表皮发育不良的共聚焦激光扫描显微镜下表现

目的对疣状表皮发育不良患者皮损的共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)图像特征进行初步探索。方法对在我院就诊高度怀疑为疣状表皮发育不良的患者,选定皮损处先做共聚焦激光扫描显微镜扫描,再在该处行组织病理检查,并在皮损附近正常皮肤处做CLSM检查,用做皮损对照。同时选取临床诊断为扁平疣的20例患者与之对照。结果皮损处CLSM图像可见明亮的角质层增厚,表皮中上部较多体积大,形状不规则,大小不一,胞质低折光率呈现黑色的空泡细胞,真皮浅层血管周围可见少量高折光度的淋巴细胞。对照组扁平疣患者CLSM扫描图像:其空泡细胞大小较为一致,呈圆形、椭圆形或梭形,胞质折光率较低。结论疣状表皮发育不良的CLSM图像有一定的特征性,但由于例数有限,其特征有待于进一步发现和证实,此外它能监测该病的动态变化。但应注意与易混淆的CLSM图像相鉴别。

激光扫描共聚焦显微镜系统及其在细胞生物学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜是近十年发展起来的医学图象分析仪器，现已广泛应用于荧光定量测量、共焦图象分析、三维图象重建、活细胞动力学参数监测和胞间通讯研究等方面。其性能为普通光学显微镜质的飞跃，是电子显微镜的一个补充。本文以美国Ｍｅｒｉｄｉａｎ公司的ＡＣＡＳＵＬＴＩＭＡ３１２为例简要介绍了激光扫描共聚焦显微镜系统的结构、功能和生物学应用前景。

应用激光扫描共聚焦显微镜研究卵母细胞和早期胚胎的细胞骨架

介绍了应用激光扫描共聚焦显微镜,结合免疫荧光技术研究卵母细胞和早期胚胎细胞骨架的方法。观察了β-微管蛋白、γ-微管蛋白、微丝以及染色体在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的分布和形态,讨论了实验过程中的注意事项以及实验结果的分析和处理方法。

表现为黑甲的甲床色素性鳞状细胞癌:围手术期的反射共聚焦显微镜诊断

皮肤镜可用于黑甲的评估与诊断，但一些不典型病例的诊断仍较困难。作者研究并证实围手术期的反射共聚焦显微镜（reflectance confocal microscopy， RCM）可提高皮肤镜的诊断。对于典型病例，一次有创手术内可完成原位及轻度浸润性黑素瘤的诊断和治疗，从而减轻甲进行反复有创检查带来的痛苦，并减少术后恢复时间。

应用共聚焦激光扫描显微镜对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体的研究

目的通过共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体进行立体、动态、定量研究。方法将所观察的脑脊液细胞分为正常淋巴细胞组、急性淋巴白血病细胞组、鞘膜内注射治疗后急性淋巴白血病细胞组。以线粒体荧光探针MitotrackerGreenFM标记后,得到线粒体的断层扫描图像、荧光强度地形立体分布图定量测量线粒体的荧光强度值。结果急性淋巴白血病细胞(357.13+60.99)与正常淋巴细胞(269.38+56.11)、鞘膜内注射治疗后淋巴白血病细胞(317.41+57.57)相比,平均荧光值有非常显著性差异(P<0.01),线粒体空间立体分布有明显差别。结论采用CLSM对中枢神经系统淋巴白血病的诊断、鉴别诊断、细胞分化程度和功能状态判断有一定意义。

解酒口服液对酒精性肝损伤肝细胞保护作用的激光共聚焦显微镜分析

目的：探讨酒精性肝损伤肝细胞形态与功能变化的特征，以及中药对酒精性肝损伤的防护作用机理。方法：首次采用激光共聚焦扫描显微分析技术，对灌胃二锅头白酒复制的大鼠酒精性肝损伤模型进行了肝细胞形态、肝细胞内ＤＮＡ 与ＲＮＡ 含量变化分析。结果：灌胃白酒可导致严重的肝细胞代谢及形态异常，细胞内ＤＮＡ 和ＲＮＡ 代谢性损害，细胞平均周长、面积均显著大于正常状态，呈现为肝细胞肿胀，甚至肝细胞死亡。解酒口服液对酒精所致的上述形态与功能改变有显著的良好影响。

激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响

目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响。方法:应用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i。结果:胰蛋白酶、SLIGKVt、c-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca2+]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%。胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。结论:PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca2+]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。

激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内游离钙的方法

本文报道运用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内游离钙的测定技术。用Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ进行染色，在３７℃、５％ＣＯ２的孵育箱内孵育６０分钟，用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光监测。药物最适应的ｐＨ值为７４。此方法已成功地运用于多种细胞内游离钙的测定研究上，大量实验结果表明，本方法灵敏、简单、快速，能实时监测细胞内游离钙的变化。

应用激光扫描共聚焦显微镜FRAP技术研究兔早期胚胎发育中细胞间隙连接介导通讯

本研究应用激光扫描共聚焦显微镜的光漂白恢复技术(FRAP)分析兔早期胚胎卵裂球之间通过间隙连接介导的细胞通讯(GJIC)。研究结果发现,用强激光分别将4-细胞期胚胎、异裂胚胎和8-细胞期胚胎的一个卵裂球荧光光漂白后,经过15分钟的荧光恢复,4-细胞期胚胎的光漂白恢复率为17.8％,异裂胚胎的光漂白恢复率为23.7％,二者之间没有明显的差异;8-细胞期胚胎的光漂白恢复率为78.2％,与前二者之间存在明显的差异。推测兔早期胚胎卵裂球细胞间隙连接建立的时间在8-细胞阶段,胚胎卵裂球间隙连接通讯可能是兔胚胎正常发育的重要条件。

应用共聚焦激光扫描显微镜对体外培养人脐静脉内皮细胞的研究

目的：研究内皮细胞内Ｃａ２＋。方法：应用共聚焦激光扫描显微镜术（ＣＬＳＭ）研究体外培养人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）胞浆内游离Ｃａ２＋变化。结果：５μｍｏｌ／ＬＦｌｕｏ－３／ＡＭ恒温（３７℃）孵育体外培养ＨＵ－ＶＥＣ６０ｍｉｎ即可达到最佳负载效果，孵育时间的再延长只能增加背景染色，随着观察时间的延长荧光强度逐渐减弱，可能是荧光淬灭的结果。另外，胞浆内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）在整个细胞内的分布是不均匀的，其确切意义尚不清楚。结论：胞浆内游离Ｃａ２＋的标记需要适宜的条件，并尽早检测。Ｃａ２＋在细胞内的分布是不均匀的。