鸟传染性支气管炎病毒类木瓜蛋白酶基因的克隆和表达

[目的]为探究鸟传染性支气管炎病毒(IBV)的感染和复制过程及其防治提供信息和途径。[方法]以鸟IBV的cDNA为模板,利用PCR技术克隆IBV类木瓜蛋白酶基因。将回收片段与pGEX-6p-1载体连接并转入大肠杆菌DH5α中。在IPTG诱导下将克隆的重组质粒在大肠杆菌BL21中进行表达,经纯化获得目标蛋白。[结果]克隆的类木瓜蛋白酶基因全长为924 bp,编码308个氨基酸的完整开放读码框。它与Genbank中IBV M41毒株类木瓜蛋白酶基因的序列完全一致,证实该基因为IBV的类木瓜蛋白酶基因。在IPTG诱导下,BL21菌株成功表达目标基因和GST融合蛋白,融合蛋白约为60 kD。经纯化和酶切后所得蛋白产物的分子量约为34 kD。[结论]该基因的成功克隆和表达为有关蛋白结构与功能的研究奠定了基础。

鸟传染性支气管炎病毒RNA结合蛋白基因的克隆和表达

以鸟传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)的cDNA为模板,用PCR技术克隆出编码该病毒非结构蛋白NSP9中的RNA结合蛋白基因,连接到pGEX-6p-1载体中并转入大肠杆菌DH5α中进行测序。随后将该重组载体转入大肠杆菌BL21中进行表达,通过GST亲和层析纯化得到目标蛋白。DNA测序分析表明所得克隆片段的长度为333bp,将其序列与GenBank的报道比对,可知所得结果与鸟传染性支气管炎病毒M41毒株的RNA结合蛋白基因一致。同时,所得蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分析证实其分子量为12kD,与ExPASy ProtParam所得到的预期大小一致。