霉酚酸对人骨髓来源间充质干细胞的作用

目的:研究霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对人骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的作用及其机制。方法:在MSCs生长和分化过程中加入不同浓度的MPA,用CCK-8方法分析MSCs增殖的情况,用Annexin V/PI双染色法检测MPA各浓度组的细胞凋亡,RT-PCR方法分析MSCs次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)的表达;应用von Kossa染色、钙定量和real-time PCR方法分析MPA对MSCs成骨分化的影响。结果:1～100μmol/L的MPA呈时间浓度依赖性地抑制间充质干细胞的生长,添加鸟嘌呤核苷可以解除该抑制效应,且该抑制效应与细胞凋亡无关;RT-PCR结果显示,MSCs表达IMPDHⅠ和IMPDHⅡ两种亚型;von Kossa染色和钙定量显示,MPA抑制MSCs的成骨分化,Osteopontin和BMP-2的表达相应减低;进一步研究发现,MPA可能通过影响转录因子Runx2、Osterix的表达而影响MSCs的成骨分化。结论:MPA通过耗竭鸟嘌呤核苷的方式呈时间浓度依赖性抑制人骨髓来源的间充质干细胞的增殖;同时,MPA通过抑制Runx2和Osterix蛋白的表达,抑制MSCs的成骨分化。

环腺苷酸结合蛋白在心脏功能及相关心脏疾病中的作用研究进展

3,5-环磷酸腺苷（cAMP）是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^（[1]）。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP。

鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制

目的探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制。方法分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预。实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组。用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3GmRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均<0.01),凋亡率均降低(P<0.05,P<0.01);C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P<0.01)。结论过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的。

恩替卡韦治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化36例两年疗效观察

目的:观察恩替卡韦治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的疗效及安全性。方法:将71例失代偿期乙型肝炎肝硬化患者按入院先后顺序分为两组,对照组根据病情需要给予休息、合理饮食、保肝退黄、血浆、蛋白支持、利尿、抗感染等内科综合治疗。治疗组在此基础上加服恩替卡韦0.5mg,1次/d,观察2年疗效。结果:治疗组2例死亡,34例存活,生存患者肝功能指标明显改善,HBV-DNA转阴率为94.1%;对照组14例死亡,21例存活生存患者肝功能指标无明显改善,HBV-DNA转阴率为4.6%。结论:恩替卡韦能迅速有效地改善绝大多数失代偿期乙型肝炎肝硬化患者的生活质量,明显降低病死率,提高生存期。

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎55例肝功能及血清肝纤维化指标观察

我院于2008年10月至2011年9月对55例慢性乙型肝炎患者采用恩替卡韦治疗，并与55例对照观察肝功能及血清肝纤维化指标，现将结果分析报告如下。

Epac/Rap1信号通路在急性肺损伤中作用的研究进展

急性肺损伤(ALI)中炎症信号通路的失调控以及炎症因子平衡紊乱是其发生和发展的重要原因。能直接被cAMP活化的交换蛋白(Epac)在调节肺部气道炎症和细胞增殖方面是一个新的效应器,新的关于cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)非依赖性通路研究表明,cAMP/Epac/Rap1信号通路参与并行使许多类型细胞的功能,包括细胞分泌、细胞间黏附和连接、细胞凋亡、细胞增殖和分化等。cAMP能通过Epac/Rap1信号通路参与ALI的发病过程,Epac/Rap1信号通路是ALI防治的潜在靶点。本文综述Epac/Rap1信号通路在肺部相关炎症及急性肺损伤中作用机制的国内外研究进展。

人pEGFP-GEF-H1载体的构建及其表达

背景:研究表明GEF-H1能激活Rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染结肠癌HCT116细胞,以转染空质粒和未转染的细胞分别作为空质粒组和空白对照组。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,测序结果表明序列正确。转染重组质粒pEGFP-GEF-H1后,荧光显微镜下可见较强的绿色荧光,GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平均较空质粒组和空白对照组明显上调。结论:体外成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,且转染结肠癌HCT116细胞后高表达GEF-H1,为进一步探讨结肠癌与GEF-H1的关系提供了必要的实验材料。

Vav1对T细胞的调控作用及其与相关疾病的关系

Vav1作为T细胞受体下游的关键信号分子,拥有鸟苷酸交换因子功能的催化核心结构DH-PH-ZF和接头蛋白功能的SH3-SH2-SH3结构,因而在T细胞发育、活化、增殖和功能发挥等各个阶段,以及在自身免疫性疾病、移植排斥和肿瘤等发生、发展中具有不同的调控作用,可为临床治疗提供潜在靶点。本文综述了Vav1对T细胞的调控作用及其与相关疾病的关系。

多氯联苯增强苯并(a)芘致HepG2细胞DNA的损伤作用

目的研究多氯联苯1254对苯并(a)芘致HepG2细胞DNA损伤的影响。方法设11.5、23.0和46.0μmol/L多氯联苯1254剂量组,苯并(a)芘50μmol/L剂量组,10 m l/L二甲基亚砜为溶剂对照。用不同浓度多氯联苯1254预处理HepG2细胞,24 h后染毒,通过单细胞凝胶电泳和高效液相-电化学技术,检测细胞中的DNA链断裂和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷酸(8-OHdG)。结果50μmol/L苯并(a)芘诱导HepG2细胞中DNA O liver尾矩(OTM)值为1.66±0.21,8-OHdG含量为(23.31±6.02)8-OHdG/106dG,溶剂对照组OTM值为0.79±0.15,8-OHdG含量为(12.31±3.24)8-OHdG/106dG,两组比较差异均有统计学意义;11.5、23.0和46.0μmol/L单独处理组OTM值分别为0.88±0.20、1.01±0.15和1.10±0.16,8-OHdG含量分别为(19.57±7.57)、(22.80±9.16)和(31.74±9.25)8-OHdG/106dG,46.0μmol/L组与溶剂对照组比较,8-OHdG含量显著增加,差异有统计学意义;经11.5、23.0和46.0μmol/L的多氯联苯1254预处理,苯并(a)芘诱导的OTM值分别为2.14±0.22、2.43±0.32和2.71±0.31,8-OHdG含量分别为(32.50±3.81)、(49.23±16.66)和(60.36±18.04)8-OHdG/106dG,与苯并(a)芘单独作用组比较均显著增加,差异有统计学意义。结论多氯联苯1254能使苯并(a)芘诱导的HepG2细胞DNA损伤作用显著增强,表明多氯联苯1254对苯并(a)芘的遗传毒性作用具有一定的协同效应。

MTH2蛋白在快速老化P8小鼠海马中表达的增龄性变化

目的观察8氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2（MTH2）在快速老化P8小鼠（SAMP8）海马中的表达，探讨其与SAMP8增龄性变化的关系。方法该实验选用1、4、8、12月龄的sAMP8及同龄的抗快速老化R1小鼠（SAMR1）作为实验对象，每组8只，用免疫组化和免疫印迹法分别检测海马中MTH2蛋白的表达。结果免疫组化结果显示，MTH2主要在SAMP8神经元胞浆内表达；海马不同区域均有表达，尤以CA1和CA3区表达最多。定量结果显示，SAMR1海马各区域MTH2的表达随增龄无显著性改变；而在SAMP8MTH2的表达随月龄增加而下降，8月龄海马CA1区的吸光度值（A值）为0．0473、CA3区为0．0510，显著低于4月龄海马CA1区的0．0619、CA3区的0．0680；12月龄海马CA1区的A值为0．0369、CA3区为0．0465，显著低于8月龄；8月和12月龄A值SAMP8分别显著低于同龄的SAMR1（P〈0．05）。免疫印迹结果显示，4～12月龄SAMP8海马内MTH2表达的灰度值（greylevel）分别为0．529、0．313、0．032，显著低于同龄SAMR1（P〈0．05）。结论MTH2蛋白的表达量在SAMP8随增龄而下降，8月龄和12月龄SAMP8的MTH2蛋白表达量与同龄对照组比较差异有统计学意义，提示MTH2蛋白表达量的减少与SAMP8的快速老化相关。

青石棉诱导A_L细胞CD59基因突变和DNA氧化损伤的研究

目的 研究谷胱甘肽合成酶抑制剂buthioninesulfoximine(BSO)和自由基清除剂二甲亚砜 (DMSO)对青石棉诱导人鼠杂交瘤 (AL)细胞CD59基因突变率的影响以及青石棉引发细胞内 8 羟基脱氧鸟苷 (8 OHdG)产生的规律。方法 细胞毒性、遗传毒性检测分别采用克隆法 ;8 OHdG检测采用ABC酶免疫染色法 ;非蛋白巯基化合物 (NPSH)检测采用改进后的Tietze法。结果 2 5μmol/LBSO预处理AL 细胞 2 4h后的细胞内NPSH含量降为 2nmol/ 10 7细胞 ,仅为对照组的 5%。青石棉单独处理组AL 细胞CD59基因突变率为 2 0 8± 18。BSO预处理 2 4h后与青石棉继续共同孵育组细胞突变率可达到 3 97± 55,是青石棉单独处理组的 2倍左右 ,差异有显著性 (P <0 .0 5) ;而DMSO存在时 ,青石棉诱导的CD59基因突变率仅为 57± 8,比青石棉单独处理组降低 72 .6%。细胞内 8 OHdG的产生随着青石棉处理剂量的增加而线性增加 (y =150 + 2 0x ,r =0 .962 1)。当青石棉处理剂量为 6μg/cm2 时 ,细胞内 8 OHdG含量由对照组的 13 7± 9提高到 2 89± 6,是对照组的 2倍以上。DMSO存在时 ,可使 6μg/cm2 石棉诱导的细胞内 8 OHdG含量由 2 89± 6降低到 170± 3。结论 自由基是青石棉诱导基因突变和DNA损伤过程中重要的调节物 ,具有剂量

可见光对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的观察可见光对体外培养视网膜色素上皮（RPE）细胞内活性氧（ROS）、8-羟基一2L脱氧鸟瞟呤（8-OHdG）和8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶l（h（）GGl）表达的影响。方法人RPE-19细胞按1：4至1：6传代培养。取第4～6代80％融合细胞用于实验。细胞分为白光、红光、蓝光照射组和对照组，细胞平面光照强度为600Lux。白光，红光分别照射6、12、24、48h；蓝光照射1、3、6、12h；对照组以锡纸包裹避光培养。2’，7＇-二氯荧光素二乙酸酯（DCFHDA）法检测细胞内ROS表达量，免疫细胞化学（ICG）法检测细胞内8—0HdG表达量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞内h0GGl表达情况。结果DCFH—DA法检测结果显示，白光、红光照射组分别照射12、24、48h，蓝光照射组照射1、3、6、12h，细胞内ROS表达量均升高且随时间延长而增加，与对照组细胞内ROS表达量比较，差异均有统计学意义（F白光=11．6jl，F红光=6．706，F蓝光=23．259；P〈O．05）。ICG法检测结果显示，白光、红光照射组分别照射12、24、48h，细胞胞浆8～OHdG表达量增高，照射后12、24h表达量随时间延长而增加，48h有所降低，与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较，差异均有统计学意义（F白光=16．032，F红光=6．378；P〈0．05）；蓝光照射组照射后1、3、6、12h，细胞胞浆8-OHdG表达量均增高，照射后6、12h细胞胞浆8-OHdG表达量较1、3h细胞胞浆8—OHdG表达量有所降低，但与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较，差异均有统计学意义（F蓝光=19．484，Pd0．01）。Western blot检测结果显示，白光、红光照射组照射12、24、48h，蓝光照射组照射6、12h，细胞内hOGGl表达量均增高，与对照组细胞内hOGGl表达量比较，差异均有统计学意义（F白光=15．121，F红光=21．041；F蓝光=12．479，P〈o．05）。结论白光、红光、蓝光能以时间依赖性方式诱导RPE细胞ROS生成增加并导致RPE细胞DNA氧化损伤。RPE细胞在可见光作用下能增加DNA糖基化酶hOGG1的表达量以对DNA氧化损伤进行修复。

RASGRF2基因的研究进展

Ras鸟苷酸释放因子2（RASGRF2）属于Ras鸟嘌呤核苷酸交换因子类（RASGEF），能使与GDP结合而失活的Ras蛋白释放GDP，恢复Ras至活性状态，在Ras信号途径中起着重要的调控作用，参与体内多种生理功能。近年来研究表明，RASGRF2在恶性肿瘤中呈现高频率的DNA甲基化和表达缺失，提示RASGRF2的失活参与肿瘤的发生发展。