采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)Ras结合结构域的空间结构

Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(Ral GDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2SO4,0.2 mol/L Na Ac,0.1 mol/L HEPES,5%MPD,p H 7.5)中,晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人Ral GDS的Ras结合域(Ral GDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人Ral GDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同。人Ral GDS-RBD通过Glu838和Glu840在Ral GDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠Ral GDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人Ral GDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。

胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

目的探讨胃癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(Rho GDI)2的表达与临床病理的关系及可能机制。方法 60例胃癌患者,取相邻的胃癌癌旁组织为对照组。检测两组Rho GDI2的表达,并对Rho GDI2的表达与胃癌临床病理进行统计学分析。结果胃癌组织中Rho GDI2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7);胃癌组织中Rho GDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);罗格列酮作用后胃癌组织中Rho GDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平明显低于作用前(P<0.01);罗格列酮作用前和作用后胃癌组织中Rho GDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595,P=0.000;rs=0.612,P=0.000)。结果 Rho GDI2在胃癌中呈高表达;胃癌中Rho GDI2的表达参与了胃癌的发病、转移和进展;罗格列酮可以抑制Rho GDI2的表达;Rho GDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病、转移及进展。

肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2的表达及临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2（RhoGDI2）的表达与临床病理的关系及临床意义。方法：选择2011年7月至2015年1月期间70例肝细胞肝癌患者为研究对象，检测患者肝癌组织和癌旁组织RhoGDI2的表达，并对其表达与肝癌临床病理进行统计学分析。结果：RhoGDI2在肝细胞肝癌组织中的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织中RhoGDI2的阳性率（77．14％）高于癌旁组织（47．14％），差异有统计学意义（χ2=13．39，P=0．000）；不同病理分期、分化程度、肿瘤体积以及是否出现淋巴结转移与RhoGDI2的表达有显著相关性（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织申RhoGDI2、MMP2（基质金属蛋白酶2）mRNA均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；siRNA干扰前肝细胞肝癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关（rs=0．581，P=0．000）；siRNA干扰后肝癌中RhoGDI2与MMP2亦呈正相关（rs=0．592，P=0．000）。结论：RhoG-D／2在肝细胞肝癌组织中呈高表达；RhoGDI2在肝细胞肝癌的发病、转移和进展中起重要作用；RhoGDI2与MMP2在肝细胞肝癌的发病、转移及进展中可能共同起作用。

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

二氢杨梅素通过调控鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2对结肠癌生长的抑制作用

目的研究二氢杨梅素(DHM)对结肠癌生长的抑制作用及其可能机制。方法 (1)细胞实验:实验分4组:对照组(以2%胎牛血清处理SW480结肠癌细胞)、低、中、高3个剂量实验组(分别以10,20,40μmol·L^(-1)DHM处理SW480结肠癌细胞);以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法检测SW480结肠癌细胞的增殖;以免疫印迹法检测SW480结肠癌细胞中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)蛋白的表达。(2)动物实验:在Balb/c裸小鼠右下肢皮下接种SW480结肠癌细胞悬液0. 2 mL构建移植瘤模型;按照体重将模型小鼠随机分4组:模型组、对照组(顺铂3 mg·kg^(-1))和低、高2个剂量实验组(20,60 mg·kg^(-1)DHM),每组5只;以免疫组化法检测结肠癌组织中RhoGDI2蛋白的表达。结果 (1)细胞实验:处理SW480结肠癌细胞1 d后,对照组和低、中、高3个剂量实验组对结肠癌细胞的抑制率分别为(2. 17±0. 53)%,(5. 83±1. 91)%,(16. 2±2. 82)%和(34. 51±1. 74)%;这4组的RhoGDI2灰度值分别为72. 16±2. 73,61. 39±3. 81,48. 76±3. 92和32. 39±3. 17。3个剂量实验组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。(2)动物实验:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组的RhoGDI2表达强度分别为8053. 60±236. 21,2791. 39±189. 72,6521. 28±172. 89和4381. 86±226. 33,低、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。结论 DHM能够抑制SW480结肠癌细胞的增殖和体内生长,其作用机制可能为抑制RhoGDI2蛋白的表达有关。

晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2和自然杀伤细胞活化受体2D的表达及意义

目的 探讨晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2 (RhoGDI2)、自然杀伤细胞活化受体2D(NKG2D)的表达水平及临床意义.方法 选择2012年1月至2014年12月50例中晚期肺癌患者为研究对象.肺鳞癌20例,肺腺癌18例,小细胞肺癌12例;Ⅲ期30例,Ⅳ期20例;淋巴结转移22例,无淋巴结转移28例.另选择2012年1月至2014年12月体检健康者50名为对照组.采用ELISA法检测RhoGDI2;采用流式细胞仪检测NKG2D.结果 肺癌Ⅳ、Ⅲ期患者RhoGDI2水平高于对照组[(70.19±8.54)、(49.76±7.25)、(5.62±1.26) μg/L];NKG2D表达水平低于对照组[(71.49±5.57)％、(78.97±6.62)％与(84.59±6.96)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);肺癌Ⅳ期患者RhoGDI2水平高于Ⅲ期患者[(70.19±8.54)与(49.76±7.25) μg/L],肺癌Ⅳ期患者NKG2D水平低于Ⅲ期患者[(71.49±5.57)％与(78.97±6.62)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);发生淋巴结转移的患者RhoGDI2水平高于无淋巴结转移[(71.32±6.79)与(48.29±2.36) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.01),NKG2D水平低于无淋巴结转移患者[(72.36±6.62)％与(81.27±6.86)％],差异有统计学意义(P＜0.01).血清RhoGDI2、NKG2D表达之间呈负相关(r=-4.176,P=0.011).结论 RhoGDI2、NKG2D等指标的异常表达与肺癌的临床分期、肿瘤的淋巴结转移有关,而与肺癌的类型无关;RhoGDI2、NKG2D的表达之间呈负相关关系.

RhoGDI2在肺鳞癌、腺癌组织和肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的本研究探讨RhoGDI2在肺鳞癌和腺癌组织及肺癌细胞系中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测112例肺癌组织标本中RhoGDI2蛋白和20例新鲜肺癌组织中RhoGDI2 mRNA的表达,结合肺癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western blot和RT-PCR方法检测肺癌细胞系中RhoGDI2蛋白和mRNA水平的表达情况。结果肺鳞癌和腺癌组织中RhoGDI2的表达与组织分级有关,随着分化程度的降低,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与TNM分期有关,随着分期级别的升高,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与是否淋巴结转移有关,存在淋巴结转移的标本,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01)。RhoGDI2蛋白的表达与组织类型、患者的年龄和性别无关。在选取的肺癌细胞系A549、95D、SPC-A-1和NCI-H446中,无论mRNA水平还是蛋白水平RhoGDI2都有表达,但表达水平不尽相同,在A549、NCI-H446细胞系中表达较低,在SPC-A-1、95D细胞系中表达相对较高。结论RhoGDI2与肺癌的发生发展和转移过程有关,进一步研究RhoGDI2与其作用因子之间的相互作用,将有助于进一步揭示肺癌发生发展及转移过程。

RhoGDI2蛋白的高表达促进胃癌的侵袭和转移

目的:通过检测Rh oGTP酶解离抑制因子2(RhoGTPase dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)在胃癌和癌旁组织中的表达并结合临床病理特点进行分析,探讨RhoGDI2的蛋白表达水平与胃癌组织侵袭转移的关系及在肿瘤发生发展中的作用.方法:采用免疫组织化学方法检测127例肿瘤组织标本和癌旁标本中RhoGDI2蛋白的表达.结果:RhoGDI2阳性表达主要在血液淋巴细胞、粒细胞、巨噬细胞.胃癌细胞中也有表达,主要为胞浆表达.实验中发现胃癌组织中RhoGDI2阳性表达率为65.4%(83/127).且大多数在细胞浆中表达,低分化癌细胞核也有表达.在癌旁正常胃黏膜组织中表达阴性,胃癌组织中RhoGDI2的表达在低分化组显著高于高中分化组(χ2=9.702,P<0.05),随着原发肿瘤的浸润深度阳性表达率增高(浸润深度T3-4,或T1-2)(χ2=8.029,P<0.05),有淋巴结转移的阳性表达率显著高于无淋巴结转移(χ2=18.53,P<0.05),有远处转移较无远处转移的表达高(χ2=24.1,P<0.05)临床分期(Ⅲ-Ⅳ)显著高于临床分期(Ⅰ-Ⅱ)(χ2=8.530,P<0.05).RhoGDI2表达与性别(χ2=0.126,P>0.05)、年龄(<60岁,≥60岁)(χ2=0.916,P>0.05)、原发灶直径(<5 cm,≥5 cm)(χ2=2.620,P>0.05)无相关性.结论:RhoGDI2的表达与胃癌的发生发展和转移过程呈正相关,RhoGDI2可能参与胃癌发生发展中的侵袭及转移过程.

动物免疫增强剂的研究进展

免疫增强剂可促进动物对抗原的免疫应答反应,显著增强疫苗的免疫效果。文章综述了动物疫苗研究领域中的免疫增强剂,如免疫刺激复合物、脂质体、细胞因子、胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸和天然产物对动物疫苗免疫效果的影响,并对免疫增强剂的发展趋势作了展望。

RhoGDI2调控TGF-β1对气道上皮-间质转化的研究

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho guanosine diphosphate dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)在气道上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)中的作用,以及可能的作用机制,有助于揭示气道重塑的分子生物学机制并提供新的治疗靶点。方法:构建RhoGDI2过表达气道上皮细胞(16HBE)模型。Western Blot检测RhoGDI2蛋白的表达。构建成功后,Western Blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达;同时收集细胞培养上清液,双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中TGF-β1的表达水平。在RhoGDI2过表达16HBE细胞模型中加入TGF-β1抑制剂,进一步明确TGF-β1在RhoGDI2调控EMT过程中的作用。结果:(1)Western Blot检测16HBE过表达组RhoGDI2表达水平较对照组明显升高(P<0.01)。(2)过表达组16HBE中N-cadherin、Snail表达较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01),而E-cadherin表达明显下降(P<0.01);RhoGDI2过表达组细胞中、上清液中TGF-β1的表达水平亦较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01)。(3)过表达组中加入TGF-β1抑制剂后,TGF-β1、N-cadherin、Snail表示水平下降,E-cadherin表达水平升高(P<0.05)。结论:RhoGDI2可通过调控TGF-β1的表达促进人气道EMT过程。

RhoGDI2在结直肠癌组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系

目的:研究鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho GDI2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系。方法:收集本院于2015年1月至2015年12月收治的80例CRC患者手术切除的原发灶组织和正常癌旁组织。采用免疫组化法检测各组织标本中Rho GDI2的表达情况,并分析其表达量与临床病理特征的相关性。结果:(1)Rho GDI2主要表达于CRC癌细胞胞浆中,在肿瘤原发灶和正常癌旁组织中的阳性表达率分别为26.25%和0.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)肿瘤原发灶中Rho GDI2的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤位置、大小、数量、组织学分级、原发灶分期、血管浸润、神经浸润间均不存在相关关系(P>0.05),而与淋巴结转移及远端转移有关(P<0.05)。结论:Rho GDI2在CRC肿瘤原发灶中呈阳性表达,且其高表达可促进CRC的侵袭转移,可作为CRC治疗的作用靶点。