鸟嘌呤核苷酸交换因子1与厚体1在胃癌发生发展及转移过程中的作用研究

目的检测鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Vav1)、厚体1(Dkk1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,探讨Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中的作用及临床价值。方法选取2020年6月至2022年6月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院外科行胃癌根治术且经过病理确诊的57例胃癌患者作为研究对象,收集患者胃癌组织、癌旁组织(癌组织边缘5 cm)各57份。应用免疫组化法检测Vav1和Dkk1在胃癌及癌旁组织中的表达,分析胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率的相关性,不同临床病理特征与Vav1和Dkk1表达情况的关系,ROC曲线分析Vav1和Dkk1在胃癌中的诊断价值。结果胃癌组织中Vav1和Dkk1的阳性表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Vav1和Dkk1在癌旁组织很少表达,Vav1和Dkk1在胃癌组织中表达于细胞质,镜下可见胞质中散在黄色或黄褐色染色的颗粒。Vav1阳性与阴性患者肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位、分化程度比较差异无统计学意义。Dkk1阳性与阴性患者分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位比较差异无统计学意义。胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率呈正相关(r>0,P<0.05)。Vav1和Dkk1的AUC分别为0.952和0.857,对胃癌的诊断效能均较理想。结论Vav1、Dkk1在胃癌中的表达呈正相关。Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中起重要作用,Vav1、Dkk1特异性靶向药物有望为胃癌有效治疗提供新思路。

胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

目的探讨胃癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(Rho GDI)2的表达与临床病理的关系及可能机制。方法 60例胃癌患者,取相邻的胃癌癌旁组织为对照组。检测两组Rho GDI2的表达,并对Rho GDI2的表达与胃癌临床病理进行统计学分析。结果胃癌组织中Rho GDI2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7);胃癌组织中Rho GDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);罗格列酮作用后胃癌组织中Rho GDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平明显低于作用前(P<0.01);罗格列酮作用前和作用后胃癌组织中Rho GDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595,P=0.000;rs=0.612,P=0.000)。结果 Rho GDI2在胃癌中呈高表达;胃癌中Rho GDI2的表达参与了胃癌的发病、转移和进展;罗格列酮可以抑制Rho GDI2的表达;Rho GDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病、转移及进展。

肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2的表达及临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2（RhoGDI2）的表达与临床病理的关系及临床意义。方法：选择2011年7月至2015年1月期间70例肝细胞肝癌患者为研究对象，检测患者肝癌组织和癌旁组织RhoGDI2的表达，并对其表达与肝癌临床病理进行统计学分析。结果：RhoGDI2在肝细胞肝癌组织中的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织中RhoGDI2的阳性率（77．14％）高于癌旁组织（47．14％），差异有统计学意义（χ2=13．39，P=0．000）；不同病理分期、分化程度、肿瘤体积以及是否出现淋巴结转移与RhoGDI2的表达有显著相关性（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织申RhoGDI2、MMP2（基质金属蛋白酶2）mRNA均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；siRNA干扰前肝细胞肝癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关（rs=0．581，P=0．000）；siRNA干扰后肝癌中RhoGDI2与MMP2亦呈正相关（rs=0．592，P=0．000）。结论：RhoG-D／2在肝细胞肝癌组织中呈高表达；RhoGDI2在肝细胞肝癌的发病、转移和进展中起重要作用；RhoGDI2与MMP2在肝细胞肝癌的发病、转移及进展中可能共同起作用。

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

Kruppel样因子15通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3表达影响胰岛素抵抗实验研究

目的:探讨Kruppel样因子15(KLF15)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达影响胰岛素抵抗。方法:建立小鼠模型和细胞模型,细胞蛋白电泳检测细胞内目的蛋白表达,聚合酶链反应(PCR)检测KLF15表达量,Western blot检测NLRP3相对表达量,免疫组化法检测组织KLF15表达,免疫荧光染色检测细胞增殖相关蛋白。结果:在链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠模型中,小鼠诱导后1~4个月,血清KLF15 mRNA表达量水平被抑制。用10、20、40 mmol/L葡萄糖诱导HepG2细胞24 h后,细胞内KLF15 mRNA表达量水平随葡萄糖浓度升高而减少(均P<0.05)。小鼠组织中,KLF15、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)在空白组表达最高,其次分别为1、2、4个月组;NLRP3在空白组表达最低,1、2、4个月组依次升高(均P<0.05)。在体外模型中,si-NLRP3质粒可以降低NLRP3表达量;抑制NLRP3表达可以减少干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β表达,同时增加IRS1、GLUT4表达量;NLRP3过表达质粒可以促进NLRP3表达量,过表达NLRP3可以促进INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β表达,同时减少IRS1、GLUT4表达量;上调KLF15可以抑制NLRP3蛋白表达,抑制KLF15可以促进NLRP3蛋白表达(均P<0.05)。结论:KLF15表达量与2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗有关,KLF15低表达量可能会增加胰岛素抵抗。KLF15可能通过抑制NLRP3表达量减少T2DM胰岛素的炎症水平,抑制胰岛素抵抗。KLF15可能为胰岛素抵抗的T2DM的潜在治疗和诊断靶点,为以后的相关研究提供实验依据。

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2基因表达与肝癌细胞迁移和侵袭能力的关系

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:选取肝癌细胞株HCCLM3细胞,随机分为对照组、空白转染组和shRNA转染组,其中空白转染组转染空白质粒,shRNA转染组转染RhoGDI2-shRNA,采用MTT法检测各组细胞增殖,Transwell试验检测各组细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞RhoGDI2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞MMP-9、pAKT和VEGF表达。结果:shRNA转染组细胞RhoGDI2 mRNA相对表达量为(0.201±0.082),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞培养6 h、12 h和24 h时OD值分别为(0.312±0.110)、(0.562±0.107)和(0.700±0.110),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞迁移率和穿膜细胞数分别为(0.310±0.030)%和(9.28±1.11)个,明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞MMP-9、pAKT和VEGF相对表达量分别为(0.762±0.100)、(0.201±0.092)和(0.501±0.101),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05)。结论:下调RhoGDI2表达,可抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,值得进一步研究。

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2和N-myc下游调节基因2在肝癌的表达及与病理生物学特点的相关性

目的探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)和N-myc下游调节基因2(NDRG2)在肝癌组织中的表达及意义。方法所有患者手术中取原发灶癌组织及癌组织旁的正常组织,做好标签,立即放到液氮中保存,以备后期对标本石蜡包埋,免疫组化染色,对RhoGDI2和NDRG2的定位和表达情况进行分析。结果肝癌组织RhoGDI2阳性表达率为69.66%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为22.47%,明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期患者RhoGDI2阳性表达率为91.11%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为8.89%,明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率为87.50%,明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05);RhoGDI2与NDRG2表达呈负相关(r s=-0.640,P<0.05)。结论RhoGDI2在肝癌组织中呈高表达,而NDRG2呈低表达,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。

前列腺癌组织肝激酶B1,Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5 mRNA表达水平与临床病理特征和预后的相关性研究

目的研究前列腺癌患者癌组织中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)及Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(Rab guanine nucleotide exchage factor-5,Rab EX-5)mRNA表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测92例前列腺癌组织和80例良性前列腺增生组织中LKB1及RabEX-5 mRNA的表达,比较LKB1,RabEX-5 mRNA表达组间差异及与临床病理特征的关系。Pearson线性相关分析LKB1与RabEX-5 mRNA表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析LKB1,RabEX-5 mRNA表达与前列腺癌患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响前列腺癌患者生存预后的危险因素。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达明显升高(1.311±0.374 vs 0.457±0.083),差异有统计学意义(t=20.758,P=0.000),而LKB1 mRNA表达显著降低(0.373±0.052 vs 1.234±0.268),差异有统计学意义(t=30.181,P=0.000)。LKB1,RabEX-5 mRNA表达与Gleason评分、骨转移、TNM分期有关(t=2.419~9.965,均P<0.05),与年龄、前列腺特异抗原(PSA)水平无关(t=0.379~1.453,均P>0.05)。前列腺癌组织中LKB1与RabEX-5 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.402,P=0.000)。低LKB1表达组3年总体生存率低于高LKB1表达组(χ^(2)=55.605,P=0.000),高RabEX-5表达组3年总体生存率低于低RabEX-5表达组(χ^(2)=29.435,P=0.000)。多因素COX回归分析结果表明,Gleason评分≥7分(OR=2.671,P=0.018)、骨转移(OR=1.528,P=0.031)、TNM分期为Ⅲ期(OR=1.634,P=0.037),LKB1 mRNA低表达(OR=1.764,P=0.008)及RabEX-5 mRNA高表达(OR=2.587,P=0.000)是影响前列腺癌患者生存预后的危险因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达升高,而LKB1 mRNA表达降低,二者共同参与前列腺癌的发生发展,有望成为评估前列腺癌患者预后的组织肿瘤标志物。

核苷酸类抗病毒药物治疗对乙型肝炎患者肝脏血流动力学参数及血清Th1/Th2型细胞因子水平的影响

目的:探讨核苷酸类抗病毒药物长期治疗对乙型肝炎患者肝脏血流动力学参数及血清Th1/Th2型细胞因子水平的影响。方法:选取76例乙型肝炎患者,根据治疗方案的不同,将其分为对照组(35例)与观察组(41例)。对照组患者接受常规乙型肝炎临床治疗,不服用核苷酸类似物;观察组患者在常规治疗的基础上长期口服核苷酸类抗病毒药物;比较两组患者治疗前、后肝脏血流动力学指标以及血清辅助T淋巴细胞1和辅助T淋巴细胞2(Th1/Th2)型细胞因子水平变化。结果:1两组患者治疗后其肝脏血流动力学指标以及肝内循环时间(HV-HA)相比均明显改善,但观察组患者改善效果更为显著,与对照组相比差异显著,具有统计学意义(t=1.253,t=0.925,t=0.413,t=0.816,t=2.931,t=2.517,t=2.915;P<0.05);2两组患者治疗后白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)及总胆红素等指标比较均明显改善,但治疗组患者各项指标改善效果更为显著,与对照组相比差异显著,具有统计学意义(t=1.957,t=1.681,t=2.041,t=2.113;P<0.05)。结论:长期应用核苷酸类抗病毒药物治疗乙型肝炎,可有效改善患者肝脏血流动力学指标,并可改善患者血清细胞因子水平,对提高患者肝功能、平衡乙型肝炎肝硬化患者细胞因子网络,调节机体免疫功能具有重要作用。

采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)Ras结合结构域的空间结构

Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(Ral GDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2SO4,0.2 mol/L Na Ac,0.1 mol/L HEPES,5%MPD,p H 7.5)中,晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人Ral GDS的Ras结合域(Ral GDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人Ral GDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同。人Ral GDS-RBD通过Glu838和Glu840在Ral GDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠Ral GDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人Ral GDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。

Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子家族及其在疾病发生中的作用

Rho GTP酶(Rho GTPase)家族在真核生物细胞中参与细胞骨架调节、基因转录、膜泡运输等过程,扮演着分子开关的角色。Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)是调节Rho GTPase活性的关键因子,在Rho GTPase信号调节、组织器官的生长发育及免疫应答中起着至关重要的作用。RhoGEF与肿瘤、发育及神经类疾病、病原微生物感染等也有密切关系,对其功能的深入了解有助于人们认识某些生理和病理现象的发生机制。

吸入性肺炎患者肺泡灌洗液中核苷酸结合寡聚化结构域2、核因子-κB的表达及其临床意义

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)和核因子-κB(NF-κB)在吸入性肺炎(AP)患者肺泡灌洗液(BALF)中的表达水平及其临床意义。方法选择2018年1月~2019年10月在我院住院的肺炎患者90例,其中吸入性肺炎组(AP组)患者40例,非吸入性肺炎组(非AP组)患者50例。采用RT-PCR法检测住院患者BALF中NOD2 mRNA和NF-κB mRNA表达水平;采用ELISA法检测BALF中hs-CRP和IL-6水平;采用ROC曲线分析NOD2、NF-κB用于诊断AP的敏感度和特异度。结果 (1) AP组NOD2 mRNA、NF-κB mRNA表达水平(7.46±1.82、39.12±9.53)高于非AP组(3.38±0.65、12.13±3.76),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)AP组IL-6、hs-CRP水平[(23.72±6.54)ng/ml、(17.38±4.42)mg/L]高于非AP组[(14.37±4.67)ng/ml、(7.35±2.86)mg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。(3) NOD2和NF-κB诊断AP的ROC曲线下面积分别为0.734、0.789,二者对AP均具有诊断价值(P<0.05)。结论 AP患者NOD2 mRNA和NF-κB mRNA表达水平和炎症因子水平明显升高,NOD2和NF-κB可能参与AP致炎过程。

MEF2A基因CAG三联核苷酸重复序列与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关研究

目的 检测我国汉族人群中肌细胞增强因子2A（MEF2A）基因CAG三联核苷酸重复序列的多态性分布，调查MEF2A基因CAG三联核苷酸重复序列的多态与冠状动脉粥样硬化性心脏病发生的相关性。方法 用聚合酶链反应．单链构象多态性和（或）聚合酶链反应产物直接测序法对257例冠状动脉粥样硬化性心脏病阳性病例、154例冠状动脉粥样硬化性心脏病阴性对照及232例健康体检者的MEF2A基因编码区和5’非翻译区进行全基因扫描，并用病例-对照方法研究了CAG等位基因与冠状动脉粥样硬化性心脏病发生的相关性。结果 在我国汉族人群中，MEF2A基因第11号外显子中CAG三联核苷酸重复单元的个体携带数目从4～15个不等，存在CAG三联核苷酸的多态分布，4～8个CAG的等位基因与冠状动脉粥样硬化性心脏病的易感性显著相关（P=0.0057，OR=2．73，95％CI：1．25～6．15）.结论 MEF2A基因第11号外显子4-8个CAG的等位基因可能与我国汉族人群冠状动脉粥样硬化性心脏病发生相关，提示MEF2A基因第11号外显子4-8个CAG的等位基因可能是冠状动脉粥样硬化性心脏病的易患因素.

ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏炎症及核苷酸结合寡聚域2和受体相互作用蛋白2 mRNA表达的影响

目的研究ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏中性粒细胞浸润、炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6]及核苷酸结合寡聚域2(NOD2)和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达的影响。方法 24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、假手术+ghrelin组(Sham+ghrelin组)、脓毒血症组(CLP组)和脓毒血症+ghrelin组(CLP+ghrelin组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法建立脓毒血症大鼠模型。Sham+ghrelin组和CLP+ghrelin组分别于假手术或CLP后即刻经尾静脉注射10 nmol/kgghrelin,Sham组和CLP组于相应时间点尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,给药速率为0.2 mL/min。于假手术或CLP后6 h麻醉下处死大鼠,取肺组织,光学显微镜下观察肺组织病理学变化,并测定髓过氧化物酶(MPO)活性、TNF-α和IL-6水平以及NOD2和RIP2 mRNA的表达。结果与Sham组和Sham+ghrelin组比较,CLP组和CLP+ghrelin组肺组织MPO活性、TNF-α和IL-6水平、NOD2和RIP2 mRNA的表达均显著升高(P值均<0.05);CLP+ghrelin组肺组织MPO活性、TNFα-和IL-6水平、NOD2和RIP2 mRNA的表达均显著低于CLP组(P值均<0.05)。结论 ghrelin可改善脓毒血症大鼠肺脏中性粒细胞的浸润、下调肺组织炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)的表达,其作用可能与抑制NOD2/RIP2信号通路有关。

FGFR2基因rs2981582位点单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的关系

目的探讨成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)基因rs2981582位点单核苷酸多态性(SNP)与乳腺癌易感性之间的关系。方法对193例乳腺癌患者和150例正常女性进行病例对照研究,采用DNA直接测序法同时检测其FGFR2基因第二内含子的SNP位点rs2981582的基因及基因型。结果乳腺癌患者FGFR2基因rs2981582位点的基因分布频率与正常女性相比,P>0.05;对该位点的基因分布频率与乳腺癌雌激素受体(ER)表达状态进行分析后发现,等位基因T的频率在ER阳性乳腺癌患者中为43.93%,在正常女性中为34.67%,两者相比,P<0.05(OR为1.476)。结论 FGFR2基因第2内含子rs2981582位点的SNP与ER阳性乳腺癌的发生显著相关,携带等位基因T的个体患病风险增加。

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制大鼠子宫内膜异位种植的实验研究

目的了解血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对大鼠子宫内膜异位种植的抑制作用。方法用外科自体移植术建立SD大鼠右侧壁腹膜上子宫内膜异位症模型,在建模同时分别腹腔注射不同剂量的VEGF反义寡核苷酸(1 000μmol/L,2 000μmol/L)或生理盐水100μl,隔日1次,共4周。观察VEGF反义寡核苷酸对SD大鼠异位症建模成功率、移植物、在位内膜和卵巢的组织学变化及血清E2,P水平的影响。结果VEGF反义寡核苷酸腹腔注射使大鼠异位症模型的建模成功率明显降低,移植物体积均显著下降(P<0.01)。对照组建模成功的SD大鼠腹膜上的移植物囊肿内壁的上皮、固有膜以及固有膜的基质细胞、腺体样结构都和成熟大鼠的子宫内膜相似,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜表面都有丰富的血管形成。而用药组建模成功的SD大鼠移植物腔内面上皮不发达,固有膜较薄,固有膜的基质细胞、腺体样结构减少,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜血管稀少。各组血清E2,P水平差异无显著性(P>0.05)。结论VEGF反义寡核苷酸腹腔注射可以抑制大鼠子宫内膜的异位种植和生长,但不影响卵巢功能。

CIK联合核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎患者Th1/Th2类细胞功能变化

目的观察核苷(酸)类药物联合CIK治疗慢性乙型肝炎患者Th1/Th2类细胞功能变化,为维持持久免疫应答,减少核苷(酸)类药物停药后复发提供理论依据。方法15例慢性乙型肝炎患者在核苷(酸)类药物治疗达到HBV DNA检测水平下限时给予CIK治疗,分别在核苷(酸)类药物治疗前、HBV DNA达到检测水平下限以及CIK治疗后2周3个时间点采用流式细胞术检测Th1/Th2类细胞功能,10例单独接受CIK治疗和10例单独接受核苷(酸)类药物治疗的慢性乙型肝炎患者作为对照组。结果无论是观察组还是对照组,当接受核苷(酸)类药物并HBV DNA水平达到不可检测水平以下时,CD4细胞产生IFN-γ水平明显升高(1.511±1.026 vs 2.139±0826,1.656±0.869 vs 2.511±1.133,P<0.05),IL-4水平无明显变化,单独接受CIK治疗后IFN-γ水平也明显增高(1.434±0.924 vs 2.211±0.921,P<0.05),IL-4水平无明显变化,同前两组比较IFN-γ水平和IL-4水平均无差异。核苷(酸)类药物联合CIK治疗后相比单独CIK治疗和单独核苷(酸)类药物治疗,不但IFN-γ明显增高(3.288±0.561 vs 2.211±0.921,3.288±0.561 vs 2.511±1.133,P<0.05),并且IL-4水平也降低(0.277±0.237 vs 0.428±0.208,0.277±0.237 vs 0.477±0.255,P<0.05)。结论核苷(酸)类药物联合CIK治疗明显提高Th1类细胞应答,并抑制Th2类细胞功能,但是否持久维持Th1类细胞免疫应答还需要进一步研究。

结核分枝杆菌H37Ra诱导核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2-/-)小鼠的1型辅助T（Th1）细胞型免疫应答

目的探讨1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)及多功能T细胞在感染结核分枝杆菌H37Ra的核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2-/-)小鼠中的作用.方法NOD2-/-小鼠与野生型C57BL/6小鼠气管分别滴入MTB减毒株H37Ra建立肺部感染模型并设立生理盐水对照组,每组10只.4周后,取肺组织进行HE染色及病理评分;ELISA检测肺组织匀浆中TNF-α和IFN-γ含量;流式细胞术检测脾细胞中多功能CD4+T/CD8+T细胞的比例.结果NOD2-/-小鼠感染H-37Ra后肺组织炎症加重,肺组织TNF-α和IFN-γ含量增加.与生理盐水组相比,两种小鼠感染后,CD4+/CD8+T细胞中TNF-α+、IFN-γ+单阳性细胞及TNF-α+IFN-γ+细胞均显著增加;与C57BL/6小鼠感染组相比,NOD2-/-小鼠感染组体内TNF-α+CD4+T细胞、IFN-γ+CD4+T细胞及IFN-γ+CD8+T细胞显著增加.结论H37Ra可诱导NOD2-/-小鼠的Th1细胞型免疫应答反应.

甲基化SIM2、GNA12、CTGF在子痫前期孕妇中表达水平及其对疾病的预测价值

目的 探究子痫前期孕妇血浆中甲基化DNA的表达水平及对子痫前期发生的预测价值。方法 纳入2022年1-12月在该院确诊的82例子痫前期孕妇作为观察组,另外纳入82例健康孕妇作为对照组。提取患者游离总DNA,经过DNA亚硫酸氢盐修饰后通过实时荧光定量PCR反应(qRT-PCR)检测患者血浆中甲基化单意同源物2(SIM2)、结缔组织生长因子(CTGF)及鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)基因的相对表达水平,并采用相关性分析及受试者工作特征(ROC)曲线对各甲基化DNA预测子痫前期发生的价值进行评估。结果 观察组血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期孕妇各甲基化DNA相对表达水平更高(P<0.05)。相关性分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平与孕妇发生子痫前期均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平单独及联合检测对预测孕妇子痫前期的效能均较好,且三者联合检测的预测效能最高(曲线下面积为0.888,95%CI:0.827~0.949)。结论 相较于健康孕妇,子痫前期孕妇血浆中甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均较高,且其与孕妇子痫前期的发生率呈正相关,血浆甲基化SIM2、GNA12及CTGF相对表达水平有望成为判断子痫前期是否发生的重要指标。

溃疡性结肠炎PTPN2和NF-κB单核苷酸多态性的研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种发病机制尚不十分明确且病情反复的肠道疾病.目前众多学者认为,UC是遗传易感性、环境暴露、胃肠道菌群失调及炎症过度反应的共同作用后的结果.非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2(protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 2,PTPN2)和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在炎症中均扮演重要的角色.这两种炎症因子在UC的发生与发展过程中也起到了重要的作用.近些年,UC基因多态性研究已成为热点,西方人群中UC与PTPN2和NF-κB单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism)的相关性多有报道,我国南方地区也有报道但结果存在争议.现就UC易感基因:PTPN2和NF-κB的基因多态性进行综述.