基于2-DE和蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶的表达及其诊断应用

目的扩增并表达日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶(SjOAT),评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法构建pET28a/SjOAT质粒,转化至E.coliBL21,IPTG诱导表达;应用Ni2+亲和层析法纯化OAT;SDS-PAGE和Western blot分析、鉴定表达产物;应用ELISA法检测待检患者血清,比较SjOAT与日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对血吸虫和其它寄生虫感染的检测结果。结果成功克隆表达了SjOAT,Western blot检测结果表明rSjOAT能被血吸虫病患者血清识别;以rSjOAT-ELISA和SjSEA-ELISA分别检测急/慢性血吸虫病患者和其它寄生虫感染者血清的结果经校正χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05);对于正常对照者血清和疫区粪检阴性者血清,两种检测方法的特异性比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rSjOAT在体外获得表达,用于诊断人血吸虫病具有高度敏感性和特异性。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶在肾脏疾病中的诊断价值

目的:探讨鸟氨酸氨基甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OCT)在肾脏疾病的诊断价值。方法:分别利用酶联免疫吸附试验和速率法测定健康对照组130例和各类肾脏疾病114例的血清、尿OCT和尿肌酐(UCr)值。结果:健康对照组、肾肿瘤、肾病综合征、上尿路感染、急性肾小球肾炎组的血清OCT值分别为:0.12、0.68、2.35、6.45、144.22IU/L,它们的尿OCT/尿Cr比值分别为:21、133、118、143、371,肾脏疾病组的血清OCT及尿OCT/尿Cr分别显著高于健康对照组(P<0.05)。血清OCT与尿OCT/尿Cr诊断急性肾小球肾炎的敏感度分别为83%、87%,特异性分别为73%、75%。结论:血清OCT与尿OCT/尿Cr是诊断肾脏疾病的特异性指标,对肾脏疾病有较高诊断价值。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定及其在肝病中的诊断意义

目的采用速率法测定鸟氨酸氨基甲酰转移酶活性在各型肝病中的诊断价值。方法在pH=7.2,1/10mol/L磷酸盐缓冲条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶促反应,在全自动生化分析仪上测定鸟氨酸氨基甲酰转移酶的活性。结果鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性病毒性肝炎、肝性脑病时显著升高,与ALT、AST、GGT呈正相关;在慢性肝炎、肝硬化、肝癌时中度升高,阳性率高达90%以上;酒精性肝炎、药物性肝炎时轻度升高。结论鸟氨酸氨基甲酰转移酶是反映肝损伤的灵敏且特异的理想指标,采用速率法测定其活性简便、稳定、准确、快速,尤其可以作为急性病毒性肝炎早期和慢性肝病晚期的常规检测指标。

肝细胞线粒体中鸟氨酸氨基甲酰转移酶的研究进展

鸟氨酸氨基甲酰转移酶(orniththine carbamoyltransferase,OCT)作为尿素循环的调节酶之一,在维持体内血氨浓度平衡中起关键作用。近年来研究发现,OCT也可为不同肝脏疾病的诊断及损伤程度的判定提供一定的临床意义。现就肝细胞线粒体中OCT的研究进展作一概述,为临床实践提供参考。

血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性肾挫伤中的诊断价值

鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）是一种氨基转移酶,主要分布于肝细胞、胆囊上皮细胞的线粒体和肾细胞、脑细胞的核膜,是诊断肝胆疾病的敏感指标,但用于肾病诊断鲜见报道。2009年1～12月,我们对64例急性肾脏挫伤患者血OCT进行检测,以探讨其在急性肾挫伤中的诊断价值。临床资料：选择在我院住院的急性肾挫伤患者,排除肝胆疾病及伴有其他合并症者,共入选64例。其中,男32例、女32例,年龄20～70岁。同期选择我院健康体检者130例,

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨

目的建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）自动化分析的方法。方法在磷酸盐缓冲液（pH值7．2）条件下，以瓜氨酸为底物，经一系列酶偶联反应，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH＋H^＋）被氧化为氧化型辅酶Ⅰ（NAD^＋），340nm处测定吸光度（A）变化值，A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系，间接求出OCT的活性。结果本法最适pH值为7．2，最适底物浓度为2．0mmol／L。批内、批间平均变异系数（CV）分别为3．80％、4．08％。米氏常数（Km）值为0．16mmol／L。回收率达91．56％。在320U／L内线性良好。参考范围为0-18U／L。结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性，适用于各类全自动生化分析仪。

人体血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶正常值测定

本文报道126例献血员血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶(SOCT)活性测定。用本法测定SOCT活性灵敏度与精确度高,重现性好,测得的SOCT正常值范围可靠、根据国外资料报道,SOCT作为肝脏病的酶学诊断指标,比SGPT和SGOT灵敏度高,特异性强。

罕见鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症合并MECP2重复综合征一个家系的基因变异分析及产前诊断

目的分析1例鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症(OTCD)合并MECP2重复综合征家系的基因变异特征,并为该家系提供产前诊断。方法回顾性分析2017年12月19日就诊于甘肃省妇幼保健院新生儿重症监护中心的1例患儿(先证者)及其家系成员的临床资料。高通量测序结合多重连接探针扩增(MLPA)技术对患儿进行致病性变异分析。短串联重复序列(STR)连锁分析、MLPA以及拷贝数变异测序(CNV-seq)对胎儿进行产前诊断。结果先证者为出生3 d的女婴,测序发现其携带OTC基因第7~9外显子杂合缺失。根据美国医学遗传学与基因组学会变异相关指南,该变异被评级为可能致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4),与其急性脑病发作合并代谢异常(血氨显著升高、血瓜氨酸降低、尿乳清酸增高)的临床表现相符,确诊其为OTCD。产前诊断未发现胎儿携带与先证者相同的OTC基因缺失变异,但存在Xq28区重复,涵盖MECP2重复综合征的全部区域,且SRY(+),母亲及先证者均证实携带该重复。结合先证者存在X染色体失活的可能性,考虑先证者同时罹患OTCD与MECP2重复综合征,而胎儿为MECP2重复综合征男性患者。结论基因检测明确了OTCD合并MECP2重复综合征家系的致病变异,可为患者家庭的精准治疗、遗传咨询及再次生育提供依据。

家蚕δ-鸟氨酸转氨酶基因Bmoat转录分析及对免疫的响应

分析家蚕δ-鸟氨酸转氨酶基因Bmoat序列信息,明确其组织转录规律,结合家蚕感染BmNPV对其表达的影响,初步探索该基因功能。克隆家蚕δ-鸟氨酸转氨酶基因Bmoat ORF序列,对该基因编码区的氨基酸序列、分子量、结构域等进行生物信息学分析;利用Gene Doc与MEGA 5.0软件对Bm OAT与其他物种δ-鸟氨酸转氨酶进行多序列比对和系统进化分析;利用半定量RT-PCR对其组织和时期转录情况进行分析;实时荧光定量PCR检测家蚕添食BmNPV后Bmoat的表达情况。Bmoat编码407个氨基酸,属非分泌型蛋白,预测分子量为44.7 ku,等电点为6.36。氨基酸序列同源性比较发现,Bm OAT与棉铃虫转氨酶同源性最高,为84.3%。组织和时期转录特征分析表明,该基因在家蚕幼虫的各个组织均表达,且在家蚕整个幼虫时期持续性表达。Bmoat在家蚕感染BmNPV 3 h表达量基因明显上调,而在12、24 h呈现下调,表明Bmoat的表达受到BmNPV感染的诱导。家蚕δ-鸟氨酸转氨酶Bmoat在家蚕感染BmNPV后发生响应,推测该基因参与家蚕免疫应答,进而形成一定的机体能量补偿机制。

一种新的鸟氨酸氨基甲酰转移酶基因突变E122G的鉴定

目的 测定 1个迟发型鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (ornithine transcarbamylase,OTC)缺乏症的中国汉族家系的基因突变及患者 OTC基因外显子序列。方法 用聚合酶链反应 -单链构象多态性结合PCR产物直接测序 ,鉴定其突变类型。结果 在该家系患者 OTC基因中确认了 1个新的错义突变E12 2 G,位于第 4外显子的保守残基 (GAA→ GGA)。结论 OTC基因中 E12 2 G突变引起迟发型 OTC缺乏症 ,是

PEG胁迫及复水对不同抗旱性小麦幼苗脯氨酸代谢关键酶活性的影响

以两种不同抗旱性小麦品种幼苗为试验材料,采用PEG模拟干旱胁迫处理,探究干旱胁迫及复水对小麦幼苗叶片与根系脯氨酸累积及关键酶活性的影响。结果显示:(1)PEG胁迫下抗旱品种‘普冰143’根长和根干重下降不大,而水敏感品种‘郑引1号’根长和根干重下降显著;且于胁迫处理36h时‘普冰143’根系脯氨酸含量增加(75.0%)显著大于‘郑引1号’(37.7%),复水24h后均恢复至对照水平。(2)PEG胁迫下‘普冰143’叶片中谷氨酸合成途径关键酶P5CS和鸟氨酸合成途径关键酶δ-OAT活性均显著增加,且‘普冰143’叶片脯氨酸两条合成途径关键酶活性均得以加强;PEG胁迫处理36h时,‘郑引1号’叶片中P5CS活性增加显著,δ-OAT活性变化较小,且‘郑引1号’叶片脯氨酸合成可能以谷氨酸途径为主;但在PEG胁迫下两个不同抗旱性品种的根中P5CS、δ-OAT活性均变化较小。(3)PEG胁迫处理36h时‘普冰143’叶片脯氨酸降解酶PDH活性显著下降,而‘郑引1号’叶片PDH活性显著增加,复水后抗旱品种叶片该酶活性显著增加,水敏感品种恢复至对照水平;但PEG胁迫处理下两个不同抗旱性品种的根中PDH活性均显著下降。研究表明,PEG胁迫下小麦叶片是合成脯氨酸的主要部位,抗旱品种‘普冰143’根系脯氨酸持续积累与叶片中高的脯氨酸合成关键酶活性及脯氨酸转运有关。

PEG胁迫对偏关苜蓿脯氨酸代谢途径关键酶的影响

以山西地方品种偏关苜蓿(Medicago sativa cv.Pianguan)为试验材料,采用20%聚乙二醇(PEG-6000)分别处理不同时间(0,8,16,24,32,48和72h),研究偏关苜蓿地上部及地下部的脯氨酸(proline,Pro)含量、鸟氨酸δ-氨基转移酶(ornithine-oxo-acidtransaminase,δ-OAT)、吡咯啉-5-羧酸合成酶(pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS)、脯氨酸脱氢酶(proline dehydragenase,ProDH)活性的动态变化。结果表明:PEG胁迫下,地上部Pro含量显著高于地下部,PEG处理40h时,地上部Pro含量最高(3230.4μg.g-1 FW)。地上部和地下部P5CS活性呈"升-降-升-降"的变化趋势。δ-OAT活性则在胁迫8h时升高,之后下降。ProDH活性受PEG胁迫显著降低,呈时间依赖性。PEG胁迫前期,偏关苜蓿的Pro积累以鸟氨酸-脯氨酸途径为主,随胁迫时间的延长,逐渐转为以谷氨酸-脯氨酸途径为主。

盐胁迫对扁蓿豆幼苗脯氨酸积累及其代谢关键酶活性的影响

以野生扁蓿豆为试验材料,采用盆栽试验方法研究不同盐(NaCl、Na_2CO_3)的不同浓度(0、50、100、200、300、400、500mmol·L^(-1))胁迫对扁蓿豆苗期脯氨酸积累及其代谢途径的关键酶活性的影响。结果表明,在不同盐胁迫下,扁蓿豆脯氨酸(Pro)含量、吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性、鸟氨酸-δ氨基转移酶(δ-OAT)活性均随盐浓度的升高而逐渐增加,而脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性随胁迫浓度的升高而降低。扁蓿豆幼苗主动积累Pro是缓解其NaCl和Na_2CO_3胁迫的原因,并由Glu途径和Orn途径协同作用于Pro积累,但以Orn途径为主。试验中,扁蓿豆所承受的NaCl和Na_2CO_3浓度不宜超过400mmol·L^(-1)。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶活性测定方法的建立

为了建立血浆鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)活性的测定方法,以健康奶牛血浆为样本,利用OCT能够将氨基甲酰磷酸盐中的氨甲酰基转移到鸟氨酸上,形成瓜氨酸和磷酸盐的反应原理,对瓜氨酸进行比色定量,从而反映血浆OCT活性的高低。结果:成功筛选了奶牛血浆OCT活性的测定条件,测得健康奶牛血浆OCT活性为(13.1±9.18)U/L。本研究建立了适合现代科研条件下用于测定动物血浆OCT活性的瓜氨酸终点显色法,该方法可以方便、快速、准确、大批量检测动物血浆样本,能够作为常规方法在临床上广泛应用。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶的肾脏定位及临床意义

对正常大鼠及模型组大鼠肾中鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）存在部位进行定位并探讨其临床意义。

迟发型鸟氨酸氨基酰转移酶缺乏症一例分析并文献复习

目的 探讨鸟氨酸氨基酰转移酶缺乏症（OTCD）相关临床特点及诊断、治疗经验.方法 报告1例安徽省儿童医院2014年收治的鸟氨酸氨基酰转移酶缺乏症患儿临床诊治疗经过,并结合国内外报道的鸟氨酸氨基酰转移酶缺乏症的资料进行文献复习.结果 （1）8岁男童,进食较多鸡蛋后,出现呕吐、意识模糊症状1d.既往有类似病史.血氨2 500μmol/L.疑诊OTCD,给予禁食、高热卡静脉输注、降血氨等治疗,患儿病情进行性加重,最终因脑疝、中枢性心血管功能衰竭而死亡.死亡后尿气相色谱-质谱、血浆氨基酸报告血瓜氨酸、精氨酸降低,尿乳清酸升高,OTC基因突变[OTCc.386G＞A p.（Arg129His）]确诊为OTCD.（2）总结近5年国内外数据库中检索到的明确诊断及有治疗结果的OTCD 65例,发病年龄在3d至49岁;40例有呕吐症状,32例有意识障碍.52例行血氨基酸、尿有机酸检查,均有血瓜氨酸、精氨酸降低,尿乳清酸升高;42例行OTC基因检查,均检测到OTC致病基因位于Xp21.1,致病基因均有基因突变,重复位点较少.55例国外患者资料中,存活53例,死亡2例.10例国内患者资料中,存活3例,4例死亡,3例失联.结论 OTCD常以呕吐、意识障碍起病,有血氨升高,可先临床诊断并治疗,确诊须通过尿气相色谱-质谱、血浆氨基酸检查以及基因检测结果.国内OTCD患者预后差可能与对此类疾病认识度不高有关.

伴血氨正常的鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症一例及文献复习

目的探讨迟发型鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症(ornithine transcarbamylase deficiency,OTCD)的临床特点,减少临床误诊率。方法分析我院收治的1例反复住院治疗的OTCD患儿各阶段的临床特点及转归。结果患儿以呕吐、嗜睡为主要症状,入院后反复检查血氨正常,颅脑影像学检查提示皮层及皮层下广泛异常信号(T2Flair稍高信号,DWI高信号),脑电图呈广泛低电压,有机酸气相质谱检测发现乳清酸及尿嘧啶异常增高,基因检测发现OTC基因的核苷酸碱基存在错义突变。结论OTCD患儿通常伴血氨升高,但临床中如有不明原因的呕吐、嗜睡症状,即使血氨正常也不能排除本病,应完善有机酸气相质谱及基因检测方法进一步明确诊断。

血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性肾挫伤中的诊断价值及意义

目的:探讨血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性肾挫伤中的诊断价值。方法:选取2009年5月-2012年6月于本院进行治疗的34例急性肾挫伤患者为观察组,同期的34名健康体检人员为对照组,将两组患者血清OCT、CysC、Scr、hs-CRP、Ccr及肾主动脉血流动力学指标进行比较。结果:观察组的血清OCT、Cy-sC、Scr、hs-CRP均高于对照组,Ccr低于对照组,肾主动脉Vmax、Vmin均低于对照组,AT、RI及PI均高于对照组,且重度患者变化幅度大于轻度患者,开放性患者大于闭合性患者(P均<0.05)。结论:血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性肾挫伤中的诊断价值较高,与患者的肾损伤相关指标及炎性因子的变化基本一致。

OAT在非小细胞肺癌中的表达及生物信息学分析

背景与目的已有的研究表明,鸟氨酸氨基转移酶(ornithine aminotransferase,OAT)可能参与多种恶性肿瘤的发生和发展,本研究旨在检测非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)中OAT mRNA和蛋白质的表达,并对其进行生物信息学分析。方法通过RT-PCR的方法比较A549和16HBE细胞间OAT mRNA水平的差异;采用免疫组织化学SP法检测55例肺癌组织和17例癌旁肺组织中OAT蛋白表达;利用生物信息学的方法对OAT蛋白的生物信息学特征和相互作用蛋白进行分析,并对筛选出来的相互作用蛋白进行GO注释和信号通路分析。结果①A549中OAT mRNA相对含量较16HBE中低,两者差异约2.85倍。②NSCLC中OAT蛋白的表达明显高于癌旁肺组织(P<0.05);OAT蛋白在鳞癌和腺癌间的表达差异有统计学意义,而与患者性别、年龄、有无淋巴结转移、肿瘤直径及TNM分期无关。③生物信息学分析提示OAT蛋白定位于线粒体、为高度保守的亲水性蛋白,具有Aminotran-3结构域,可能存在多个丝/苏氨酸磷酸化位点,在信号转导、转录和分子转运等方面发挥一定的作用;在筛选出来的54种可能和OAT存在相互作用的蛋白质中,TNF和TRAF6这两种蛋白参与了NF-κB信号通路。结论 OAT可能在NSCLC的发生和发展中发挥重要作用,有望成为肺癌的早期诊断标志物和治疗的新靶点。

水分胁迫下斑茅3个逆境代谢相关基因表达的实时PCR分析

【研究目的】初步探讨斑茅3个关键逆境适应相关基因在水分胁迫下的表达机制。【方法】已克隆S-腺苷蛋氨酸脱羧酶、鸟氨酸氨基转移酶、甜菜碱脱氢酶3个基因和内参基因的基础上,应用定量PCR技术,对这3个基因在不同胁迫时间下的表达水平进行分析。【结果】斑茅的S-腺苷蛋氨酸脱羧酶、鸟氨酸氨基转移酶基因、甜菜碱脱氢酶基因表达在初期均受抑制,后期表达持续上调,但甜菜碱脱氢酶基因受水分诱导表达较前两个基因明显。【结论】这可能暗示着在斑茅中,脯胺酸和甜菜碱的合成受水分胁迫诱导,而甜菜碱的合成相对脯胺酸和多胺受水分胁迫诱导影响更大。这些研究为斑茅抗旱的分子机制提供初步的理论基础。