鸟氨酸脱羧酶抗酶2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶2(ornithine decarboxylase antizyme 2,OAZ2)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集80例结直肠癌组织及其配对癌旁组织,采用实时定量逆转录酶聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中OAZ2 mRNA表达,分析OAZ2 mRNA表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。中、低分化结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于高分化结直肠癌,有淋巴结转移结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于无淋巴结转移结直肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:OAZ2 mRNA在结直肠癌组织中低表达,与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达抑制黑素瘤细胞在小鼠体内的生长

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antienzyme inhibitor-1,OAZI-1)是细胞内调节多胺代谢的重要蛋白质因子。已有研究发现,OAZI-1高表达的黑素瘤细胞在体外能更有效地被抗原提呈细胞识别和吞噬,提示OAZI-1在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。为进一步分析OAZI-1高表达对黑素瘤细胞在小鼠体内生长的影响,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞(B16/OAZI-1)被接种到实验小鼠体内,结果发现,接种瘤出现先成瘤随后逐渐消退的现象,至第24 d时,接种瘤的平均体积为36±25 mm3~,而对照细胞接种瘤的平均体积为326±309 mm^3。为探索上述现象的机制,随后分析了B16/OAZI-1在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫效应,结果发现:1)B16/OAZI-1接种显著增加了小鼠脾脏细胞对B16-F1瘤细胞的杀伤活性;2)源于B16-F1的细胞抗原能更有效地促进B16/OAZI-1接种小鼠脾脏细胞的增殖;3)B16/OAZI-1接种小鼠的脾脏细胞具有更强的分泌IFN-γ的能力;4)当在预接种B16/OAZI-1 30 d后的小鼠体内再次接种B16-F1活细胞时,新接种瘤细胞的生长受到显著抑制,小鼠的存活率增加。上述研究结果提示,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞在实验动物体内的生长受到显著抑制,其机制可能与OAZI-1能促进肿瘤抗原提呈和诱导抗肿瘤免疫效应相关。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZ1还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能。抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性。本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述。

siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖

目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。

人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子小鼠体内的表达分析

目的:分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor,AZI)在小鼠体内的表达情况。方法:RT-PCR,Northern blot,免疫组化染色。结果:RT-PCR,Northern blot揭示AZT基因(Oazin)的表达是全身性的,即各器官都表达。特别是脑,心,肾脏,肌肉,胸腺,睾丸。免疫组化染色显示AZT蛋白在心瓣膜细胞,肾小管周围的间质细胞以及肝细胞的间质细胞中高表达。结论:用RT-PCR,Northern blot以及免疫组化染色法揭示了AZT在RNA和蛋白水平小鼠体内中的表达情况。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1抗肿瘤机制研究的新进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)是多胺诱导的一种能反馈性负控多胺合成和多胺运输的蛋白,作为多胺"传感器"灵敏地监控和调节胞内多胺水平。近年来的研究发现,OAZ1能与多种重要的蛋白因子相互作用,抑制它们的活性,并介导它们以非泛素化形式被26S蛋白酶体降解,由此调控细胞周期、中心体复制、DNA损伤修复等重要的生理过程。

棉花黄萎病菌鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因VdOAZ的功能分析

【目的】明确棉花黄萎病菌中鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白(OAZ)基因(VdOAZ)的功能。【方法】以大丽轮枝菌野生型菌株V592的基因组DNA和cDNA为模板,对VdOAZ基因全长进行克隆并测序。构建针对VdOAZ基因的敲除载体和互补载体,通过农杆菌介导的遗传转化筛选VdOAZ基因敲除菌株和和互补菌株。以野生型菌株V592为对照,对VdOAZ基因敲除突变体和互补菌株的菌落生长速率、产孢量、微菌核产量及对棉花的致病力进行测定;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应测定致病相关的其他基因在VdOAZ基因敲除突变体中的表达量,及亚精胺诱导条件下,V592菌株中VdOAZ基因及致病相关的其他基因的相对表达量。【结果】从棉花黄萎病菌中克隆到VdOAZ基因的全长为1 006 bp,具有2个开放阅读框(Open reading frame,ORF),ORF2编码的蛋白具有OAZ所特有的ODC-AZ保守结构域。与野生型菌株V592和互补菌株相比,VdOAZ基因敲除突变体的菌落生长速率降低、微菌核产量及产孢量明显减少,对棉花的致病力下降,表明VdOAZ基因与大丽轮枝菌分生孢子和微菌核的产生有关,并参与大丽轮枝菌致病。在VdOAZ基因敲除突变体中,VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2和VdSge1基因表达量显著上调;V592菌株经亚精胺诱导培养后,VdOAZ基因的表达量显著上调,而上述5个致病相关基因的表达量均明显下调,表明VdOAZ基因对其表达具有负调控作用。【结论】VdOAZ基因响应多胺水平改变,通过调控VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2、VdSge1的表达影响大丽轮枝菌孢子产生、微菌核形成和致病过程。

鸟氨酸脱羧酶抗酶作为肿瘤治疗靶点的潜在价值

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ),在细胞生长分化中起重要调控功能的蛋白,因其具有独特的翻译框移机制、在多胺代谢中的重要调控地位以及诱导部分细胞内重要大分子的非泛素依赖降解作用而备受研究者关注。本文概述了目前对OAZ作用机制的认识,并从细胞周期、分化、凋亡及遗传稳定性的调节上探讨其在细胞活动中的作用。近年来,OAZ已成为肿瘤治疗的潜在靶点,在实体瘤如肝癌细胞、肺癌细胞中,OAZ的高表达与细胞生长抑制明显相关,体现其抗肿瘤特性.对其作用机制的深入了解,将有助于充分挖掘抗酶在肿瘤治疗中的应用价值。

鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的探讨上调鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗酶-1(AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响。方法制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3.1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3.1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果在转染pcDNA3.1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达AZ-1引起细胞凋亡增加(P<0.05)。结论过表达AZ-1能抑制ODC表达和促进A549细胞凋亡。

鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)具有调控细胞多胺代谢、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的功能。近年来研究发现,鸟氨酸脱羧酶抗酶在动物繁殖过程中也具有重要调控作用。就鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究现状做一综述,为进一步深入研究OAZ功能提供帮助。

用基因捕获法制作鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因“敲出”小鼠

目的分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠生长发育过程中的功能。方法用特殊的捕获载体导入小鼠ES细胞中,5′RACE方法鉴定成功地捕获鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因(Oazin)后,由这种ES制作了Oazin“敲出”小鼠。结果Oazin“敲出”小鼠捕获载体位于Oazin基因启动子上游,Qazin基冈的转录被抑制。结论Oazin“敲出”小鼠为分析Oazin基因的功能提供了有用的实验材料。

鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白与细胞增殖抑制

鸟胺酸脱羧酶抗酶(ornithine decarboxylase antizyme,OAZ)基因通过特殊的阅读框移机制翻译全长有功能的抗酶蛋白,结合并降解鸟氨酸脱羧酶,使细胞内多聚胺浓度下降,抑制细胞增殖。抗酶还能结合cyclinD1,阻滞细胞周期。此外,OAZ还能够引起肿瘤细胞逆分化。它在多种肿瘤细胞中呈低表达,对肿瘤细胞的基因治疗有重要意义。

鸟氨酸脱羧酶抗酶I与多胺代谢

鸟氨酸脱羧酶抗酶I(ornithine decarboxylase antizyme 1,OAZ1)是调节细胞内多胺含量的重要因子,参与细胞生长与分化、胚胎发育、基因表达调控等重要生理过程,也是抗肿瘤治疗的潜在分子靶点。简要综述鸟氨酸脱羧酶抗酶I在结构与功能,及其调控多胺代谢机制方面的研究进展。

小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1功能基因的克隆及原核表达

目的克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)功能基因,原核表达并纯化OAZ1重组蛋白。方法采用RT-PCR法从小鼠黑色素瘤细胞总RNA中扩增OAZ1基因,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因,并构建重组表达质粒pET15b/OAZ1-T,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重叠PCR法扩增出692bp的OAZ1功能基因,重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,重组蛋白可在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。纯化的重组蛋白纯度可达79.96%,且可与抗His标签抗体特异性结合。结论已成功克隆了小鼠OAZ1功能基因,原核表达并纯化了重组OAZ1蛋白。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1与细胞增殖

多胺(腐胺、精脒、精胺)参与细胞增殖、分化和凋亡等重要生命过程,细胞内多胺代谢紊乱也与包括肿瘤在内的多种疾病的发生发展密切相关。鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(antizyme inhibitor-1,AZIN1)是重要的多胺代谢调节蛋白,它通过多种途径调控细胞的生长。AZIN1能与鸟氨酸脱羧酶抗酶(antizyme,AZ)相互作用,解除后者对多胺合成限速酶鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)的抑制,由此上调细胞内多胺的含量。AZIN1还能通过调节细胞周期蛋白cyclin D1的降解速度和干扰细胞中心体复制而影响细胞增殖。AZIN1基因转录后修饰和某些特定mi RNA也对AZIN1的细胞增殖调节功能有重要影响。现对该研究领域的研究进展做简要综述。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的作用

目的探索鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的功能。方法用特殊的基因诱捕载体（genetrapping vector）制作了鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因敲除小鼠。用Western印迹、RT-PCR、X-gal染色方法分析该基因在突变小鼠体内的表达。PCR法鉴定小鼠不同发育时期的基因型。结果鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在纯合型突变小鼠体内被抑制后，纯合型突变小鼠在出生后死亡。结论鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因是致死基因，对小鼠生存有不可缺少的作用。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂蛋白家族研究进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂蛋白(ornithine decarboxylase antizyme inhibitors,AZIN)家族有两个成员:AZIN1和AZIN2。AZIN1是一种能够负反馈性调节多胺合成和运输的蛋白质,其参与细胞周期、中心体复制、DNA损伤修复等重要的生理过程,同时也与许多疾病息息相关。AZIN2在脑和睾丸中高表达,是囊泡运输的调节剂,能够调节哺乳动物细胞中的多胺摄取和细胞分泌活性。本文对该鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂蛋白领域的最新研究进展做了简要综述,以期为相关研究提供参考。

鸟氨酸脱羧酶在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及意义

目的研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)在卵巢型子宫内膜异位症中的表达,探讨其在卵巢型子宫内膜异位症形成及发展中分子机制。方法收集不同分期的临床卵巢子宫内膜异位囊肿的Ⅰ~Ⅱ期内膜11例,Ⅲ~Ⅳ期内膜19例,非子宫内膜异位症患者的子宫内膜作为对照组(30例患者)。采用免疫组化及Western Blot检测组织中ODC的表达情况采用实时荧光定量PCR检测鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(OAZ-1)在样本中的mRNA表达情况及分析ODC与OAZ-1两者mRNA在子宫内膜异位症中的相关性。结果Ⅰ~Ⅱ期及Ⅲ~Ⅳ期在位内膜及异位内膜组织ODC蛋白表达均高于对照组内膜(均P<0.05);不同临床期别子宫内膜异位症的异位内膜和在位内膜ODC的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);各期在位内膜、异位内膜组织OAZ-1mRNA表达均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。在EMs组织中,ODC mRNA表达与OAZ-1mRNA表达无相关性(P>0.05)。结论ODC可能与子宫内膜异位症的发生有关,但可能与子宫内膜异位症的发展不存在相关性。

高表达OAZI-1的小鼠乳腺癌4T1细胞诱导抗肿瘤免疫应答的实验研究

目的在细胞和实验动物水平上分析高表达OAZI-1对小鼠乳腺癌4T1细胞诱导抗肿瘤免疫应答的影响。方法RT-PCR和Western blot用于鉴定高表达OAZI-1的4T1细胞(4T1/OAZI-1);流式细胞仪检测Mφ下同和DC对4T1细胞的吞噬率以及成熟DC标志性表面分子的表达水平;ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中IFN-γ和TNF-α含量。用4T1/OAZI-1和4T1/3.1对照细胞分别接种Balb/c小鼠后,观察接种瘤的生长状况及荷瘤小鼠的生存期。结果1)成功构建OAZI-1高表达的4T1/OAZI-1细胞株;2)M?和DC对4T1/OAZI-1细胞的吞噬率(10.8%,58.4%)显著高于对照细胞(6.3%,19.6%);3)将DC与4T1/OAZI-1共孵育后,CD40、CD80和CD86(成熟DC细胞表面标志分子)表达阳性的DC比率(62.8%、77.9%和75.1%)显著高于和对照细胞共孵育的DC(43.9%、57.5%和49.6%);4)将4T1/OAZI-1活化的DC与Balb/c小鼠脾淋巴细胞共孵育后,细胞培养上清中IFN-γ含量(28.7 pg/ml)显著高于对照细胞(19.4 pg/ml);5)将4T1/OAZI-1和4T1/3.1细胞分别接种Balb/c小鼠右前肢腋窝皮下,小鼠体内4T1/OAZI-1接种瘤的生长速度显著低于对照细胞接种瘤,其生存期和血清TNF-α和IFN-γ水平也明显高于接种对照细胞的小鼠。结论高表达OAZI-1的小鼠乳腺癌4T1细胞能更有效地被抗原提呈细胞识别、吞噬并诱导T淋巴细胞活化与成熟,诱导机体的抗肿瘤免疫应答,抑制接种瘤在动物体内的生长。