鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达抑制黑素瘤细胞在小鼠体内的生长

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antienzyme inhibitor-1,OAZI-1)是细胞内调节多胺代谢的重要蛋白质因子。已有研究发现,OAZI-1高表达的黑素瘤细胞在体外能更有效地被抗原提呈细胞识别和吞噬,提示OAZI-1在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。为进一步分析OAZI-1高表达对黑素瘤细胞在小鼠体内生长的影响,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞(B16/OAZI-1)被接种到实验小鼠体内,结果发现,接种瘤出现先成瘤随后逐渐消退的现象,至第24 d时,接种瘤的平均体积为36±25 mm3~,而对照细胞接种瘤的平均体积为326±309 mm^3。为探索上述现象的机制,随后分析了B16/OAZI-1在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫效应,结果发现:1)B16/OAZI-1接种显著增加了小鼠脾脏细胞对B16-F1瘤细胞的杀伤活性;2)源于B16-F1的细胞抗原能更有效地促进B16/OAZI-1接种小鼠脾脏细胞的增殖;3)B16/OAZI-1接种小鼠的脾脏细胞具有更强的分泌IFN-γ的能力;4)当在预接种B16/OAZI-1 30 d后的小鼠体内再次接种B16-F1活细胞时,新接种瘤细胞的生长受到显著抑制,小鼠的存活率增加。上述研究结果提示,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞在实验动物体内的生长受到显著抑制,其机制可能与OAZI-1能促进肿瘤抗原提呈和诱导抗肿瘤免疫效应相关。

siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖

目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。

siRNA靶向抗酶抑制剂下调前列腺癌细胞PC3中鸟氨酸脱羧酶表达

目的探讨抗酶抑制剂(AZIN)对前列腺癌细胞PC3鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平及增殖的影响。方法将siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞,分别用RT-PCR及Western blot检测抗酶(AZ)、AZIN及ODC在mRNA和蛋白水平的表达,MTT检测细胞增殖。结果 siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞后,AZIN RNA表达水平降低(P<0.01);PC3细胞AZIN蛋白表达水平降低(P<0.05),且使ODC的表达水平降低(P<0.05);PC3细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。结论 siRNA-AZIN可下调前列腺癌细胞PC3中ODC的表达。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子小鼠体内的表达分析

目的:分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor,AZI)在小鼠体内的表达情况。方法:RT-PCR,Northern blot,免疫组化染色。结果:RT-PCR,Northern blot揭示AZT基因(Oazin)的表达是全身性的,即各器官都表达。特别是脑,心,肾脏,肌肉,胸腺,睾丸。免疫组化染色显示AZT蛋白在心瓣膜细胞,肾小管周围的间质细胞以及肝细胞的间质细胞中高表达。结论:用RT-PCR,Northern blot以及免疫组化染色法揭示了AZT在RNA和蛋白水平小鼠体内中的表达情况。

棉花黄萎病菌鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因VdOAZ的功能分析

【目的】明确棉花黄萎病菌中鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白(OAZ)基因(VdOAZ)的功能。【方法】以大丽轮枝菌野生型菌株V592的基因组DNA和cDNA为模板,对VdOAZ基因全长进行克隆并测序。构建针对VdOAZ基因的敲除载体和互补载体,通过农杆菌介导的遗传转化筛选VdOAZ基因敲除菌株和和互补菌株。以野生型菌株V592为对照,对VdOAZ基因敲除突变体和互补菌株的菌落生长速率、产孢量、微菌核产量及对棉花的致病力进行测定;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应测定致病相关的其他基因在VdOAZ基因敲除突变体中的表达量,及亚精胺诱导条件下,V592菌株中VdOAZ基因及致病相关的其他基因的相对表达量。【结果】从棉花黄萎病菌中克隆到VdOAZ基因的全长为1 006 bp,具有2个开放阅读框(Open reading frame,ORF),ORF2编码的蛋白具有OAZ所特有的ODC-AZ保守结构域。与野生型菌株V592和互补菌株相比,VdOAZ基因敲除突变体的菌落生长速率降低、微菌核产量及产孢量明显减少,对棉花的致病力下降,表明VdOAZ基因与大丽轮枝菌分生孢子和微菌核的产生有关,并参与大丽轮枝菌致病。在VdOAZ基因敲除突变体中,VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2和VdSge1基因表达量显著上调;V592菌株经亚精胺诱导培养后,VdOAZ基因的表达量显著上调,而上述5个致病相关基因的表达量均明显下调,表明VdOAZ基因对其表达具有负调控作用。【结论】VdOAZ基因响应多胺水平改变,通过调控VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2、VdSge1的表达影响大丽轮枝菌孢子产生、微菌核形成和致病过程。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZ1还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能。抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性。本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述。

人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1抗肿瘤机制研究的新进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)是多胺诱导的一种能反馈性负控多胺合成和多胺运输的蛋白,作为多胺"传感器"灵敏地监控和调节胞内多胺水平。近年来的研究发现,OAZ1能与多种重要的蛋白因子相互作用,抑制它们的活性,并介导它们以非泛素化形式被26S蛋白酶体降解,由此调控细胞周期、中心体复制、DNA损伤修复等重要的生理过程。

皮质酮对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶及抗酶基因表达的影响

以部分肝切除诱导的雄性SD大鼠(180～200g)早期再生肝为材料,用RT-PCR法分析皮质酮处理后再生肝鸟氨酸脱羧酶及抗酶mRNA水平变化。结果表明,皮质酮对鸟氨酸脱羧酶mRNA水平具有剂量依赖性抑制作用;10、20mg/kg体重皮质酮对抗酶mRNA水平影响不大,40mg/kg处理可促进其转录。

鸟氨酸脱羧酶抗酶作为肿瘤治疗靶点的潜在价值

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ),在细胞生长分化中起重要调控功能的蛋白,因其具有独特的翻译框移机制、在多胺代谢中的重要调控地位以及诱导部分细胞内重要大分子的非泛素依赖降解作用而备受研究者关注。本文概述了目前对OAZ作用机制的认识,并从细胞周期、分化、凋亡及遗传稳定性的调节上探讨其在细胞活动中的作用。近年来,OAZ已成为肿瘤治疗的潜在靶点,在实体瘤如肝癌细胞、肺癌细胞中,OAZ的高表达与细胞生长抑制明显相关,体现其抗肿瘤特性.对其作用机制的深入了解,将有助于充分挖掘抗酶在肿瘤治疗中的应用价值。

鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的探讨上调鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗酶-1(AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响。方法制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3.1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3.1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果在转染pcDNA3.1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达AZ-1引起细胞凋亡增加(P<0.05)。结论过表达AZ-1能抑制ODC表达和促进A549细胞凋亡。

鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)具有调控细胞多胺代谢、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的功能。近年来研究发现,鸟氨酸脱羧酶抗酶在动物繁殖过程中也具有重要调控作用。就鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究现状做一综述,为进一步深入研究OAZ功能提供帮助。

鸟氨酸脱羧酶抗酶2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶2(ornithine decarboxylase antizyme 2,OAZ2)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集80例结直肠癌组织及其配对癌旁组织,采用实时定量逆转录酶聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中OAZ2 mRNA表达,分析OAZ2 mRNA表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。中、低分化结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于高分化结直肠癌,有淋巴结转移结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于无淋巴结转移结直肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:OAZ2 mRNA在结直肠癌组织中低表达,与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。

转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)酶联免疫检测方法的建立

从10个不同豇豆品种中筛选出抑制剂活性最高的901青皮豇豆,提取豇豆胰蛋白酶抑制剂。通过G-75凝胶过滤、亲和层析纯化了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)并制备了其兔多克隆抗体。用所制备的抗体建立了酶联免疫检测方法并检测了转CpTI编码基因棉花、水稻中的CpTI含量,发现棉花不同器官CpTI的表达量不尽相同。

组蛋白脱乙酰酶抑制剂apicidin及其类似物的抗原虫与抗肿瘤作用研究进展

Apicidin是镰刀菌代谢产物,属环四肽类分子,能结合组蛋白脱乙酰酶(HDAC)使组蛋白过度乙酰化,具有广谱抗顶复亚门原虫和广谱抗肿瘤作用,可抑制肿瘤细胞转移、增殖和促使肿瘤细胞凋亡、分化。对apicidin类似物的生物学活性研究表明,apicidin的癸酸侧链、大环结构和色氨酸侧链是药效基团元件,使其能竞争性结合HDAC,发挥其生物学效应。

组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤机制研究进展

组蛋白的乙酰化调节在基因表达的渐成说调控中起重要作用。抑制组蛋白去乙酰酶成为逆转与癌症相关的异常渐成说变化的一种方法。临床前试验研究发现组蛋白去乙酰酶抑制剂有很强的特异性抗癌活性,有几类组蛋白去乙酰酶抑制剂已进入临床试验研究阶段。但是,组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤作用的分子机制目前尚未完全阐明。因此,综述组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤机制研究的最新进展将有助于它的开发和应用。

新型靶向组蛋白去乙酰化酶抑制剂的抗肿瘤作用及其机制

探讨3种新型靶向组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂D16,D22,D29的抗肿瘤活性作用及其抑制人宫颈癌细胞增殖的机制。MTT法检测D16,D22,D29对MCF-7、HCT-116、A549、HeLa以及K562的增殖抑制作用;测定D16,D22,D29对HDAC及其HDAC-1的酶活抑制作用;流式细胞术观察D16,D22,D29对HeLa细胞周期及凋亡诱导作用;Western blot测定D16,D22,D29对HeLa细胞中乙酰化组蛋白H3(Ac-H3),p21cip/WAF的蛋白表达影响。结果显示,D16,D22,D29明显抑制多种肿瘤细胞株的增殖,有效抑制HDAC及其HDAC-1的活性,其效果优于阳性对照药Vorinostat(SAHA),并诱导HeLa细胞产生G1期细胞周期阻滞及凋亡,Ac-H3及p21cip/WAF的蛋白水平明显上升。D16,D22,D29具有一定的抗肿瘤活性,其机制与诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,促进p21cip/WAF的蛋白表达有关。

影响血管紧张素转化酶抑制剂抗尿蛋白作用的因素

目的 :分析、探讨影响血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI)抗尿蛋白作用的因素。方法 :原发性肾小球疾病患者 13 6例。分别实施卡托普利、西拉普利和依那普利各两个剂量组治疗 4个月。治疗前及治疗后每月检测平均动脉压 (MAP)、尿蛋白、尿白蛋白排泄率 (UAER)、尿钠和肾功能 ,并检测患者ACE基因表型。依据尿蛋白减少率 (UPDR )分为 :显效组 (UPDR >50 % ) 3 3例 ,良效组 (UPDR :3 0 %～ 50 % ) 49例 ,有效组 (UPDR :10 %～ 3 0 % ) 2 3例 ,无效组 (UPDR :-10 %～ 10 % ) 2 1例 ,恶化组 (UPDR <-10 % ) 10例。分析各组间ACEI种类、剂量以及上述各检测指标的变化。结果 :1.ACEI的抗尿蛋白作用 ,与ACEI种类、剂量和患者ACE基因多态性无关 ;2 .与其他组相比 ,显效组患者治疗前肾功能良好、MAP较低 ;3 .无效组和恶化组治疗过程中食盐摄入控制不良。结论 :ACEI种类、剂量和患者ACE基因多态性不影响ACEI的抗尿蛋白作用 ,肾脏疾病早期应用以及严格限制食盐摄入可提高ACEI抗尿蛋白疗效。

肝X受体激动剂对高脂载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉壁一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原和纤溶酶原激活物抑制剂1表达的影响

目的研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317对高脂载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉壁一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原、纤溶酶原激活物抑制剂1表达的影响。方法以高脂饲养载脂蛋白E基因缺陷小鼠为动脉粥样硬化模型,分为无药对照组、3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯干预组[10 mg/(kg.d)]和T-0901317干预组[10 mg/(kg.d)],每组6只小鼠,灌胃6周。用免疫组织化学SP法检测主动脉壁中诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原、纤溶酶原激活物抑制剂1蛋白的表达。结果药物干预的两组主动脉壁中诱导型一氧化氮合酶的表达均显著低于对照组(P<0.01),而血管内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶的表达均显著高于对照组(P<0.01)。各组增殖细胞核抗原和纤溶酶原激活物抑制剂1的表达无显著性差异(P>0.05)。结论肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317均可促进血管内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶的表达,抑制动脉壁中诱导型一氧化氮合酶的表达。提示肝X受体激动剂还可通过调脂以外的其它途径,如抑制炎症反应和保护内皮功能等方面,发挥其抗动脉粥样硬化作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗休克的研究进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）是酶抑制剂领域近年来国内外研究的热点之一，既往研究主要针对于其抗肿瘤及血液病治疗方面，其中部分药物已应用于临床。但近年来发现其在各种休克早期治疗中有显著效果。本文拟就HDACI抗休克作用的研究进展进行综述。