鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的探讨上调鸟氨酸脱羧酶(ODC)抗酶-1(AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响。方法制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3.1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3.1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1(AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果在转染pcDNA3.1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达AZ-1引起细胞凋亡增加(P<0.05)。结论过表达AZ-1能抑制ODC表达和促进A549细胞凋亡。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达抑制黑素瘤细胞在小鼠体内的生长

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antienzyme inhibitor-1,OAZI-1)是细胞内调节多胺代谢的重要蛋白质因子。已有研究发现,OAZI-1高表达的黑素瘤细胞在体外能更有效地被抗原提呈细胞识别和吞噬,提示OAZI-1在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。为进一步分析OAZI-1高表达对黑素瘤细胞在小鼠体内生长的影响,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞(B16/OAZI-1)被接种到实验小鼠体内,结果发现,接种瘤出现先成瘤随后逐渐消退的现象,至第24 d时,接种瘤的平均体积为36±25 mm3~,而对照细胞接种瘤的平均体积为326±309 mm^3。为探索上述现象的机制,随后分析了B16/OAZI-1在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫效应,结果发现:1)B16/OAZI-1接种显著增加了小鼠脾脏细胞对B16-F1瘤细胞的杀伤活性;2)源于B16-F1的细胞抗原能更有效地促进B16/OAZI-1接种小鼠脾脏细胞的增殖;3)B16/OAZI-1接种小鼠的脾脏细胞具有更强的分泌IFN-γ的能力;4)当在预接种B16/OAZI-1 30 d后的小鼠体内再次接种B16-F1活细胞时,新接种瘤细胞的生长受到显著抑制,小鼠的存活率增加。上述研究结果提示,高表达OAZI-1的黑素瘤细胞在实验动物体内的生长受到显著抑制,其机制可能与OAZI-1能促进肿瘤抗原提呈和诱导抗肿瘤免疫效应相关。

siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖

目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。

鸟氨酸脱羧酶抗酶2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶2(ornithine decarboxylase antizyme 2,OAZ2)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集80例结直肠癌组织及其配对癌旁组织,采用实时定量逆转录酶聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中OAZ2 mRNA表达,分析OAZ2 mRNA表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。中、低分化结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于高分化结直肠癌,有淋巴结转移结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于无淋巴结转移结直肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:OAZ2 mRNA在结直肠癌组织中低表达,与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白。研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZ1还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能。抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性。本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述。

人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1抗肿瘤机制研究的新进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)是多胺诱导的一种能反馈性负控多胺合成和多胺运输的蛋白,作为多胺"传感器"灵敏地监控和调节胞内多胺水平。近年来的研究发现,OAZ1能与多种重要的蛋白因子相互作用,抑制它们的活性,并介导它们以非泛素化形式被26S蛋白酶体降解,由此调控细胞周期、中心体复制、DNA损伤修复等重要的生理过程。

华泽兰根化学成分及其抑制α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性研究

为研究华泽兰Eupatorium chinense根部的化学成分及其抗糖尿病活性,采用正相硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等色谱方法,从华泽兰根部分离得到15个单体化合物,并通过现代波谱技术鉴定其结构分别为:8 S-9-hydroxythymol(1)、8,10-dehydro-9-hydroxythymol(2)、1-[4-hydroxy-3-methoxy-5-(3-methylbut-3-en-1-ynyl)phenyl]wethanone(3)、speciosin L(4)、(R)-8-hydroxy-9-isobutyryloxythymol(5)、1,4-[13C]-1,2,3,4-tetrahydro-5-naphthyl-amin(6)、eupatriol(7)、3β,6-hydroxytremetone(8)、泽兰酮(9)、(2 R,3 S)-5-acetyl-6-hydroxyl-2-isopropenyl-3-ethoxy-dihydrofuran(10)、(2 R,3 S)-5-乙酰基-6-羟基-2-异丙烯基-3-乙氧基-苯并二氢呋喃(11)、6-羟基-2 H-苯并呋喃-3-酮(12)、3,5-dimethyl-2,3-dihydrobenzofuran(13)、2,4-bis-(5-acetyl-6-hydroxy-benzofuran-2-yl)-4-methyl-pent-1-ene(14)、1,1′-[[(2 E)-4-methylpent-2-ene-2,4-diyl]bis(6-hydroxy-1-benzofuran-2,5-diyl)]diethanone(15)。其中化合物3为首次从泽兰属植物中分离获得,化合物14为首次从华泽兰中分离获得。采用对硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷法与对硝基苯磷酸盐法分别测定所有化合物对诱导糖尿病发生的α-葡萄糖苷酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性进行评价,化合物3、4、5和12具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC 50值分别为3.7、10.1、21.3、22.5μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药阿卡波糖(4.6μg/mL);化合物1、3、4和12具有良好的PTP1B抑制活性,其IC 50值分别为15.2、8.6、2.2和21.2μg/mL,其中化合物3的抑制活性优于良性药齐墩果酸(12.5μg/mL),化合物4的抑制活性优于阳性药正钒酸钠(7.5μg/mL)和齐墩果酸(12.5μg/mL)。研究表明,炔类化合物3和4均具有较明显的α-葡萄糖苷酶和PTP1B抑制活性。利用分子对接技术计算化合物3和4分别与α-葡萄糖苷酶和PTP1B的相互作用,结果表明化合物3和4与α-葡萄糖苷酶和PTP1B均具有较强的结合力。本论文首次采用双靶点对华泽兰根部的化学成分进行了抗糖尿病活性及构效研究,发现化合物3和4可作为抗糖尿病的先导化合物。

血管紧张素转换酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体轴抗炎机制研究进展

肾素-血管紧张素系统(RAS)与炎症反应关系密切。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是RAS的主要参与者,可激活与组织损伤、炎症相关的信号通路,而血管紧张素转换酶2(ACE2)-血管紧张素(Ang)(1-7)-Mas受体轴可发挥与AngⅡ相反的作用,抑制炎症反应。本文拟对ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的基本特性及其在心血管疾病、肾病、肺损伤、神经性疾病中的抗炎机制的研究进展作一综述。

siRNA靶向抗酶抑制剂下调前列腺癌细胞PC3中鸟氨酸脱羧酶表达

目的探讨抗酶抑制剂(AZIN)对前列腺癌细胞PC3鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平及增殖的影响。方法将siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞,分别用RT-PCR及Western blot检测抗酶(AZ)、AZIN及ODC在mRNA和蛋白水平的表达,MTT检测细胞增殖。结果 siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞后,AZIN RNA表达水平降低(P<0.01);PC3细胞AZIN蛋白表达水平降低(P<0.05),且使ODC的表达水平降低(P<0.05);PC3细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。结论 siRNA-AZIN可下调前列腺癌细胞PC3中ODC的表达。

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子小鼠体内的表达分析

目的:分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor,AZI)在小鼠体内的表达情况。方法:RT-PCR,Northern blot,免疫组化染色。结果:RT-PCR,Northern blot揭示AZT基因(Oazin)的表达是全身性的,即各器官都表达。特别是脑,心,肾脏,肌肉,胸腺,睾丸。免疫组化染色显示AZT蛋白在心瓣膜细胞,肾小管周围的间质细胞以及肝细胞的间质细胞中高表达。结论:用RT-PCR,Northern blot以及免疫组化染色法揭示了AZT在RNA和蛋白水平小鼠体内中的表达情况。

棉花黄萎病菌鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白基因VdOAZ的功能分析

【目的】明确棉花黄萎病菌中鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白(OAZ)基因(VdOAZ)的功能。【方法】以大丽轮枝菌野生型菌株V592的基因组DNA和cDNA为模板,对VdOAZ基因全长进行克隆并测序。构建针对VdOAZ基因的敲除载体和互补载体,通过农杆菌介导的遗传转化筛选VdOAZ基因敲除菌株和和互补菌株。以野生型菌株V592为对照,对VdOAZ基因敲除突变体和互补菌株的菌落生长速率、产孢量、微菌核产量及对棉花的致病力进行测定;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应测定致病相关的其他基因在VdOAZ基因敲除突变体中的表达量,及亚精胺诱导条件下,V592菌株中VdOAZ基因及致病相关的其他基因的相对表达量。【结果】从棉花黄萎病菌中克隆到VdOAZ基因的全长为1 006 bp,具有2个开放阅读框(Open reading frame,ORF),ORF2编码的蛋白具有OAZ所特有的ODC-AZ保守结构域。与野生型菌株V592和互补菌株相比,VdOAZ基因敲除突变体的菌落生长速率降低、微菌核产量及产孢量明显减少,对棉花的致病力下降,表明VdOAZ基因与大丽轮枝菌分生孢子和微菌核的产生有关,并参与大丽轮枝菌致病。在VdOAZ基因敲除突变体中,VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2和VdSge1基因表达量显著上调;V592菌株经亚精胺诱导培养后,VdOAZ基因的表达量显著上调,而上述5个致病相关基因的表达量均明显下调,表明VdOAZ基因对其表达具有负调控作用。【结论】VdOAZ基因响应多胺水平改变,通过调控VdPKAC1、VMK1、VdNLP1、VdNLP2、VdSge1的表达影响大丽轮枝菌孢子产生、微菌核形成和致病过程。

皮质酮对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶及抗酶基因表达的影响

以部分肝切除诱导的雄性SD大鼠(180～200g)早期再生肝为材料,用RT-PCR法分析皮质酮处理后再生肝鸟氨酸脱羧酶及抗酶mRNA水平变化。结果表明,皮质酮对鸟氨酸脱羧酶mRNA水平具有剂量依赖性抑制作用;10、20mg/kg体重皮质酮对抗酶mRNA水平影响不大,40mg/kg处理可促进其转录。

鸟氨酸脱羧酶抗酶作为肿瘤治疗靶点的潜在价值

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ),在细胞生长分化中起重要调控功能的蛋白,因其具有独特的翻译框移机制、在多胺代谢中的重要调控地位以及诱导部分细胞内重要大分子的非泛素依赖降解作用而备受研究者关注。本文概述了目前对OAZ作用机制的认识,并从细胞周期、分化、凋亡及遗传稳定性的调节上探讨其在细胞活动中的作用。近年来,OAZ已成为肿瘤治疗的潜在靶点,在实体瘤如肝癌细胞、肺癌细胞中,OAZ的高表达与细胞生长抑制明显相关,体现其抗肿瘤特性.对其作用机制的深入了解,将有助于充分挖掘抗酶在肿瘤治疗中的应用价值。

鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)具有调控细胞多胺代谢、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的功能。近年来研究发现,鸟氨酸脱羧酶抗酶在动物繁殖过程中也具有重要调控作用。就鸟氨酸脱羧酶抗酶基因功能的研究现状做一综述,为进一步深入研究OAZ功能提供帮助。

转几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因提高棉花对枯萎病和黄萎病的抗性

枯、黄萎病是世界棉花生产中的两大重要病害。传统育种缺乏抗源,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶是植物防御体系中的两种防卫因子,两者之间存在协同增效作用。据此构建了4个单价和2个双价基因(分别定位于细胞内或细胞外)的植物表达载体,通过花粉管通道法转化棉花,经PCR和Southern杂交检测以及1996～2000年温室及病圃多代筛选鉴定,已培育出对枯、黄萎病抗性提高的转基因棉花株系。将抗病基因导入国产抗虫棉品种GK19中,还获得了兼抗病、虫的转基因优系。

穿琥宁抗炎作用的血红素加氧酶-1的信号转导机制

目的初步探讨穿琥宁抗炎作用的信号转导机制。方法用WST-8细胞计数试剂盒检测穿琥宁的细胞毒性;用IN Cell Analyzer 2000活细胞成像系统及组成型增强表达绿色荧光蛋白偶联NF-κBP65(EGFP-NF-κBP65)融合蛋白的CHO细胞和EGFP偶联促分裂原活化蛋白激酶APk2(EGFP-MAPK-APk2)融合蛋白的BHK细胞观察穿琥宁对白细胞介素1β(IL-1β)或肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导NF-κBP65核转位及脂多糖(LPS)诱导的P38MAPK下游分子MAPK-APk2核转位的影响;Western印迹法检测穿琥宁和血红素加氧酶-1(HO-1)特异性抑制剂锌原卟啉(ZnPP)对RAW264.7细胞HO-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶2(COX-2)表达的影响;Griess反应和ELISA法测定穿琥宁对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)生成的影响。结果穿琥宁3～100μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞无细胞毒性。穿琥宁不能抑制由IL-1β诱导的NF-κBP65核转位和LPS诱导的MAPK-APk2核转位,对TNF-α诱导的NF-κBP65核转位有较弱的抑制作用,抑制率为20%,无明显浓度效应关系。穿琥宁3,10,30和100μmol·L-1作用4 h能诱导RAW264.7细胞HO-1表达,穿琥宁100μmol· L-1作用6 h显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达和PGE2产生,作用12 h抑制iNOS表达和NO产生。HO-1活性抑制剂ZnPP能部分逆转穿琥宁的上述作用。结论穿琥宁的抗炎作用可能主要通过HO-1信号转导,继而抑制iNOS和COX-2的表达及NO和PGE2的产生。对NF-κB信号传导系统的调节作用尚不清楚。

人参二醇对四氧化二氮染毒鼠α_1-抗胰蛋白酶及血清酶学变化的影响

目的 :探讨人参二醇对四氧化二氮 (N2 O4 )染毒鼠血清蛋白酶抑制物变化及血清酶学变化的影响 ,以寻找简便易行的对 N2 O4 中毒防治的新途径。方法 :12 3只 L ACA雄性小鼠 ,按体质量随机分成对照组、染毒组、染毒加人参二醇组 ,每组 4 1只。中毒后 15 min、1h对照组及染毒组每只小鼠均给予腹腔注射生理盐水0 .2 ml,人参二醇组每只小鼠给予腹腔注射人参二醇 0 .2 ml,连续 7d。观察小鼠的表现和存活情况 ,7d后取眼球静脉血。测定血清α1 抗胰蛋白酶 (α1 AT)及丙氨酸转氨酶 (AL T)、胆碱酯酶 (Ch E)、肌酐 (Cr)、乳酸脱氢酶(L DH )及α羟丁酸脱氢酶 (HBDH )水平。结果 :N2 O4 染毒小鼠伤后 1h血清α1 AT较对照组明显下降 ;人参二醇组小鼠在受伤后 1h血浆α1 AT虽也有不同程度的下降 ,但下降程度明显小于 N2 O4 组。另外 ,人参二醇能够显著降低 N2 O4 染毒小鼠血清 AL T、Cr、L DH及 HBDH水平。结论 :人参二醇能缓解急性肺损伤后血清 α1 AT的下降。在某种程度上能够对抗或缓解急性肺损伤的组织损害。

1-MCP对青花菜贮藏寿命、品质和抗氧化酶活性的影响(英文)

以 0 - 5μL/ L浓度范围的 1-甲基环丙烯 (1- MCP)处理青花菜花球 6 h,能提高在 2 0℃贮藏条件下青花菜的贮藏寿命 ,延缓其叶绿素的降解 ,处理效果因浓度而异 ,其中以 2 .5μL / L处理的效果最为显著 ,这一处理与对照相比 ,在 2 0℃贮藏期间 ,维生素和蛋白质含量均明显高于同期的对照 ;并使抗氧化酶 SOD、CAT的活性高于对照 。

人α_1抗胰蛋白酶基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 克隆人α1 抗胰蛋白酶 (α1 -AT)基因并在真核细胞中表达。方法 以人α1 抗胰蛋白酶(α1 -AT)基因的总RNA为模板,采用反转录PCR法得到α1 -AT的编码区cDNA,构建真核表达载体pcD NA3. 1( +) -α1 -AT,在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系COS-7,经G418压力筛选建立稳定转染人α1 -AT的细胞系,用Western印迹检测其在COS-7细胞中的表达。结果 获得的人α1 -ATcDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致,Western印迹证实稳定转染人α1 -AT的COS-7细胞系中有α1 -AT的表达。结论 构建了人α1 抗胰蛋白酶的真核表达载体,并在COS-7细胞中获得稳定表达。