miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

天冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数与纤维化-4指数对肝癌切除术后患者预后的预测价值

目的探讨肝硬化血液生化指标天冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数(APRI)、纤维化-4指数(FIB-4)对肝癌切除术后患者预后的预测价值。方法回顾性收集2005年2月至2017年7月在复旦大学附属中山医院行肝癌根治性切除300例患者的临床病理资料、肝癌复发和生存情况,分析APRI、FIB-4与肝癌患者术后复发、生存的关系,应用ROC曲线评价APRI、FIB-4对肝癌切除术后患者预后的预测价值。结果300例患者的中位随访时间为61个月。单因素Cox回归分析显示,APRI、FIB-4、血管侵犯是影响肝癌患者术后无复发生存期(DFS)、总生存期(OS)的危险因素;多因素Cox回归分析显示,血管侵犯是影响肝癌患者术后DFS(HR=1.518,95%CI 1.024~2.252,P=0.038)、OS(HR=2.301,95%CI 1.270~4.167,P=0.006)的独立危险因素。时间依赖ROC(time-ROC)结果显示,APRI、FIB-4预测术后1年、3年和5年DFS的曲线下面积(AUC)为0.555~0.596,预测术后1年、3年和5年OS的AUC为0.600~0.679。结论基于血液生化检测的肝硬化指标APRI与FIB-4对肝癌患者术后预后的预测价值有限。

锦鲤N-乙酰氨基葡萄糖-1-磷酸转移酶α/β亚基(GNPTAB)的生物信息学分析及其组织分布和时序表达

论文旨在研究锦鲤(Cyprinus carpio var. koi)GNPTAB(alpha/beta subunits of N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase)基因的分子生物学特征及对维氏气单胞菌感染的应答规律。对锦鲤GNPTAB基因CDS区进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术研究GNPTAB基因的组织分布和维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)感染机体后的时序表达规律。结果显示,GNPTAB基因CDS区片段长度为3 747 bp,推测编码1 248个氨基酸,含有4个结构域。实时荧光定量PCR分析显示,GNPTAB基因在健康锦鲤各组织中均有表达,在肝脏表达量最高,其次是肌肉、肠道、脾脏、皮肤、中肾、头肾。维氏气单胞菌人工感染锦鲤6~72 h,GNPTAB基因在肠道组织主要呈现上调表达,在肝脏、头肾、脾脏、皮肤、肌肉组织中主要呈现下调表达。维氏气单胞菌感染锦鲤后,GNPTAB基因在这些组织中出现表达差异,推测GNPTAB参与了机体的病理生理过程或免疫应答反应。

超声波和Triton X-100对鸟氨酸氨基甲酰转移酶催化活性的影响

鸟氨酸氨基甲酰转移酶（ＯＣＴ）是鸟氨酸循环合成尿素过程中的一个酶，它特异性地存在于肝脏，是反映肝脏细胞状态的一个有效指标．在肝细胞癌变研究和诱导肝癌细胞恶性表型逆转时，选用该酶作为重要酶学指标之一［１］．在逆转实验测定酶活性时，一般采用超声波粉碎法破...

4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素探究

以25个4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物为研究对象,利用遗传函数逼近法(GFA)构建了10个二维定量构效关系(2D-QSAR)模型,从中选取最优模型并检验其预测可靠性,并分析4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素。结果表明,最优2D-QSAR模型的R^(2)=0.7776、Q^(2)=0.6421、r^(2)=0.87、(r^(2)-r′02)/r^(2)=0.01、k′=0.97、r^(2)_(m)=0.58,具有较高的稳定性和外部预测能力;热力学描述符AlogP、电拓扑状态描述符ES_Sum_sssN、ES_Sum_ssCH 2和空间描述符Shadow_nu是影响4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素,其中Shadow_nu是最重要的微观结构因素。

鸟氨酸氨甲酰基转移酶对黄酒贮藏过程中氨基甲酸乙酯的调控及品质变化研究

氨基甲酸乙酯(EC)是存在于黄酒发酵和贮藏过程中的一种潜在致癌物,其前体物为尿素和瓜氨酸。鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)是一种在乳酸菌精氨酸代谢过程中参与瓜氨酸降解的酶。前期研究发现OTC与EC呈负相关性,并构建了若干个OTC定点突变菌株。本研究在黄酒贮藏过程中添加突变/野生型OTC,分别分析了自然发酵组、不添加OTC酶的对照组、单位点突变组和双位点突变组中EC、主要代谢物、挥发性风味物质、氨基酸、电子舌等含量的变化规律,探究其对EC代谢和黄酒品质变化的影响。结果表明,与对照组相比,添加双位点突变的H140A-Q143W-OTC可显著降低EC浓度至20%;同时,黄酒的味觉、氨基酸和有机酸差异不显著,但对风味物质有所影响。本研究结果为黄酒企业进行EC阻遏提供了新思路。

基于2-DE和蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶的表达及其诊断应用

目的扩增并表达日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶(SjOAT),评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法构建pET28a/SjOAT质粒,转化至E.coliBL21,IPTG诱导表达;应用Ni2+亲和层析法纯化OAT;SDS-PAGE和Western blot分析、鉴定表达产物;应用ELISA法检测待检患者血清,比较SjOAT与日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对血吸虫和其它寄生虫感染的检测结果。结果成功克隆表达了SjOAT,Western blot检测结果表明rSjOAT能被血吸虫病患者血清识别;以rSjOAT-ELISA和SjSEA-ELISA分别检测急/慢性血吸虫病患者和其它寄生虫感染者血清的结果经校正χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05);对于正常对照者血清和疫区粪检阴性者血清,两种检测方法的特异性比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rSjOAT在体外获得表达,用于诊断人血吸虫病具有高度敏感性和特异性。

鸟氨酸氨甲酰基转移酶/丙氨酸氨基转移酶和甲胎蛋白联合检测在肝细胞癌中的诊断价值

目的:研究鸟氨酸氨甲酰基转移酶/丙氨酸氨基转移酶(OCT/ALT)比值和甲胎蛋白(AFP)联合检测对肝细胞癌的诊断价值。方法:测定61例肝细胞癌、49例慢性肝炎、45例肝硬化和51名健康体检者血清OCT/ALT比值和AFP水平,应用受试者工作特征曲线(ROC)进行评价。结果:肝细胞癌组血清OCT/ALT和AFP水平高于对照组、肝炎组和肝硬化组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清OCT/ALT和AFP的ROC曲线下面积分别为0.808和0.758。OCT/ALT的最优截断点约为3.2,灵敏度和特异度为68.3%和90.3%。AFP的最优截断点约为400ng/ml,灵敏度和特异度分别为60.7%和80.0%。结论:通过ROC曲线评价,在肝细胞癌的诊断中,血清OCT/ALT和AFP联合检测优于两项指标的单独检测。

鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定及其在肝病中的诊断意义

目的采用速率法测定鸟氨酸氨基甲酰转移酶活性在各型肝病中的诊断价值。方法在pH=7.2,1/10mol/L磷酸盐缓冲条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶促反应,在全自动生化分析仪上测定鸟氨酸氨基甲酰转移酶的活性。结果鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性病毒性肝炎、肝性脑病时显著升高,与ALT、AST、GGT呈正相关;在慢性肝炎、肝硬化、肝癌时中度升高,阳性率高达90%以上;酒精性肝炎、药物性肝炎时轻度升高。结论鸟氨酸氨基甲酰转移酶是反映肝损伤的灵敏且特异的理想指标,采用速率法测定其活性简便、稳定、准确、快速,尤其可以作为急性病毒性肝炎早期和慢性肝病晚期的常规检测指标。

血清丙氨酸氨基转移酶及γ-谷氨酰基转移酶水平与2型糖尿病的关系

目的探讨丙氨酸氨基转移酶(ALT)及γ-谷氨酰基转移酶(GGT)与2型糖尿病(T2DM)的关系,为T2DM的早期预防提供依据。方法选取参加健康体检并填写调查问卷的2 597名体检者,根据血清ALT或GGT水平分别进行四分位分组(由低到高依次为Q1组、Q2组、Q3组和Q4组),采用Logistic回归分析评估ALT和GGT不同水平与T2DM患病风险的关系。结果随着ALT或GGT水平的升高,体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血糖(Glu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及高血压患病率均逐渐升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均逐渐降低(P<0.001)。在调整了相关混杂因素(年龄、性别、吸烟、饮酒、锻炼、糖尿病家族史、BMI、TG、TC、HDL-C、LDL-C和高血压)后,ALT Q4组的T2DM患病风险是Q1组的1.70倍[比值比(OR)=1.70,95%可信区间(CI)1.05~2.73],GGT Q4组的T2DM患者风险是Q1组的2.38倍(OR=2.38,95%CI 1.77~3.17)。结论血清ALT和GGT水平与T2DM患病风险有关。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2在不同肿瘤组织中mRNA的表达差异

目的 :观察三种不同肿瘤组织中ppGalNAc T2的表达差异 ;方法 :本文采用RT PCR方法从mRNA水平上研究其表达 ,同时在同一反应管中进行内对照 β 微球蛋白的扩增以进行半定量分析 ;结果 :ppGalNAc T2在不同肿瘤组织中 ,其在肿瘤部分、癌旁部分与正常部分的表达水平不具有一致性 ;结论 :ppGalNAc T2具有组织特异性 ;不同肿瘤组织的糖基转移酶作为肿瘤标志基因有待进一步的研究。

探讨丙氨酸氨基转移酶IFCC法检测试剂中加入5＇-磷酸吡哆醛对结果的影响

目的探讨丙氨酸氨基转移酶（ALT）IFCC法检测试剂中加入5’-磷酸吡哆醛对结果的影响。方法依据IFCC公布的酶学测定参考方法（37C）的SOPL]，使用该室建立的测定系统进行丙氨酸氨基转移酶测定，比较加入5’-磷酸吡哆醛和未加5’-磷酸吡哆醛两种试剂检测结果的相关性，并探讨加入5’-磷酸吡哆醛对结果的影响。结果在参考实验室用加5’-磷酸吡哆醛和未加5’-磷酸吡哆醛的ALT试剂分别用参考方法检测22份临床标本，对检测结果进行比较，回归方程为y=0．854X＋1．3059，R2=0．9758，两种试剂的检测结果相关性良好，但两种方法的捡测结果差异有统计学显著性意义（P〈0．05）。用两种试剂分别检测14份混合血清，加入5’-磷酸吡哆醛ALT试剂的检测结果：平均值（x）=104．1536U／L；标准差（s）-1．5820；变异系数（CV）=1．5％，而未加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂的检测结果：平均值（i）=88．7231U／L；标准差0）-0．5542；变异系数（CV）-0．6％。结论加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂与未加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂有较好的相关性，但两组结果的差异有统计学意义。加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂测试结果比未加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂测试结果约高20％，加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂测试结果的变异系数比未加5’-磷酸吡哆醛ALT试剂测试结果的变异系数高。

血清鸟氨酸氨基甲酰转移酶在急性肾挫伤中的诊断价值

鸟氨酸氨基甲酰转移酶（OCT）是一种氨基转移酶,主要分布于肝细胞、胆囊上皮细胞的线粒体和肾细胞、脑细胞的核膜,是诊断肝胆疾病的敏感指标,但用于肾病诊断鲜见报道。2009年1～12月,我们对64例急性肾脏挫伤患者血OCT进行检测,以探讨其在急性肾挫伤中的诊断价值。临床资料：选择在我院住院的急性肾挫伤患者,排除肝胆疾病及伴有其他合并症者,共入选64例。其中,男32例、女32例,年龄20～70岁。同期选择我院健康体检者130例,

血清HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶水平与干扰素-α1b治疗慢性乙型肝炎疗效的关系

目的探讨血清HBV DNA定量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平与干扰素-α1b治疗慢性乙型肝炎疗效之间的关系。方法86例慢性乙型肝炎患者接受干扰素-α1b治疗48周。结果在治疗结束时,完全应答组患者治疗前血清HBV DNA水平为5.8±0.4log copies/ml,显著低于部分应答组(6.9±1.2log copies/ml)和无应答组(7.7±1.4log copies/ml,P<0.05);在完全应答患者,血清HBV DNA水平于治疗第4和第12周时较治疗前下降大于2log;完全应答组患者治疗前血清ALT水平(175.3±39.2IU/L)高于部分应答组(115.4±22.3IU/L)和无应答组(88.4±21.2IU/L),有显著性差异(P<0.05);治疗4周时,完全应答组血清ALT水平较治疗前上升(185.2±35.20IU/L),明显高于部分应答组(89.5±15.7IU/L)和无应答组(75.6±18.4IU/L),差异显著(P<0.01)。结论慢性乙型肝炎患者在接受干扰素-α1b治疗前和治疗开始后4周至12周时,血清HBV DNA水平低和ALT水平高预示疗效较好。

肝细胞线粒体中鸟氨酸氨基甲酰转移酶的研究进展

鸟氨酸氨基甲酰转移酶(orniththine carbamoyltransferase,OCT)作为尿素循环的调节酶之一,在维持体内血氨浓度平衡中起关键作用。近年来研究发现,OCT也可为不同肝脏疾病的诊断及损伤程度的判定提供一定的临床意义。现就肝细胞线粒体中OCT的研究进展作一概述,为临床实践提供参考。

对乙酰氨基酚致小鼠肝微粒体谷胱甘肽S-转移酶的激活机制

目的 探索大剂量对乙酰氨基酚 (Par)在体内对小鼠肝微粒体谷胱甘肽S 转移酶(mGST)活性的影响及其可能的机制。方法 小鼠饮用 1 0 %乙醇 7d以诱导肝药酶 ,Par90 ,1 5 0 ,2 1 0mg·kg-1ip ,在 6h内测定肝mGST活性及谷胱甘肽 (GSH)含量 ,结合二硫苏糖醇(DTT)逆转与N 乙基马来酰亚胺 (NEM)激活效应来探讨mGST活性变化机制 ,并用SDS PAGE和负染凝胶法评价Par对mGST蛋白分子量及含量的影响。结果 ipPar90～ 2 1 0mg·kg-1,在短时间内引起小鼠mGST活性增加 ,GSH含量减少。mGST活性的改变与Par处理之间存在时效及量效关系。Par引起的mGST的激活效应不被二硫键断裂剂DTT逆转 ,NEM在Par激活的mGST半胱氨酸 49巯基 (Cys 49 SH)上总激活效应降低 ;激活的mGST未见蛋白分子量变迁及蛋白表达增加。结论 大剂量Par引起小鼠体内mGST活性增加 ,其激活机制主要与Cys 49

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

不同白血病细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶Ⅰ-Ⅶ mRNA的表达

目的 从mRNA水平观察不同白血病细胞中ppGalNAcT1 T7的表达情况。方法 采用RT PCR技术 ,检测ppGalN AcT1 T7在NB4和K5 6 2细胞株中mRNA水平的表达。结果 K5 6 2细胞中ppGalNAcT2、T4、T5、T7和NB4细胞中ppGalNAcT1、T2、T3、T4、T7有不同程度表达。结论 不同白血病细胞中ppGaINAcT1 T7的表达情况不一样 ,两者之间的相关性有待进一步的研究。

糖尿病患者γ-谷氨酰氨基转移酶与胰岛素抵抗的关系

目的探讨糖尿病患者γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)与胰岛素抵抗的关系。方法选择102例2型糖尿病患者,检测空腹血糖、GGT、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素,用HOMA模式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。根据GGT测定结果,分为GGT升高组和GGT正常组,进行比较分析。结果GGT升高组糖尿病患者HOMA-IR和TG水平分别为(3.841±2.224)、(2.70±1.85)mmol/L,明显高于GGT正常组的(2.236±1.749)、(1.49±0.60)mmol/L(t=4.037、4.472,P<0.001)。相关分析,GGT与HOMA-IR呈正相关(r=0.189,P<0.05),TG与HOMA-IR呈明显正相关(r=0.291,P<0.01)。结论糖尿病患者血清GGT水平增高与胰岛素抵抗有一定的关联,GGT有可能是糖尿病的一种危险标志。

肝硬化患者血清β_2-微球蛋白、丙氨酸氨基转移酶的变化及临床意义

目的 :探讨肝硬化患者血清 β2 微球蛋白 (β2 Mictroglobulin ,β2 MG)、丙氨酸氨基转移酶 (Alanineaminotransferase ,ALT)的变化及临床意义。方法 :5 3例肝硬化患者按Child Pugh分级标准分为 3组 :①A组 (A级 ) :8例 ;②B组 (B级 ) :2 8例 ;③C组 (C级 ) :17例。对照组 :2 0例。均采用放射免疫法和自动生化分析仪分别测定血清 β2 MG、ALT的含量。结果 :A组、B组、C组及对照组血清 β2 MG、ALT检测结果比较 ,A组与对照组比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;B组与A组及对照组比较 ,B组高于A组及对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;C组与A组、B组及对照组比较 ,C组高于A组、B组及对照组 ,有显著性的差异 (P <0 .0 1)。血清 β2 MG与ALT水平呈正相关 (γ =0 .75 2 1,P <0 .0 1)。结论 :随肝硬化Child pugh分级增加 ,血清 β2 MG及ALT水平增高 ,检测血清 β2 MG水平对判断肝硬化患者肝功能有一定临床价值。