兔肺动脉高压时肺组织中内皮素和鸟苷环－磷酸含量的变化及意义

１１只兔进行从降主动脉至左肺动脉的分流手术，观察三个月后形成了左侧肺动脉高压。取左、右肺组织测定内皮素（ＥＴ）和ｃＧＭＰ，发现左侧肺组织中ＥＴ含量较右侧为高，而ｃＧＭＰ则较右侧为低，两侧比较差异显著。因组织中ｃＧＭＰ的含量间接反映了内皮舒缩血管因子（ＥＤＲＦ）的含量，故认为肺高压时肺组织中ＥＴ分泌增加和ＥＤＲＦ分泌减少。两者的变化在肺高压的形成过程中可能起重要作用。

肾组织环磷酸鸟苷通过直接的肾小管作用引起泌钠作用(英文)

目的 检测NO(一氧化氮 )和cGMP(环磷酸鸟苷 )可引起肾脏泌钠作用的假设。方法 cGMP及其类似物 ,NO合成酶底物通过微透析泵输入肾组织间隙以及肾动脉。通过慢性及急性动物实验 ,观察肾脏泌钠作用及血流动力学变化。结果 肾组织间隙给予cGMP及其 8 Br cGMP 1μg/h ,使 2 4h尿钠排出从对照组 (0 .6± 0 .1)mmol/2 4h增加到 (1 2± 0 10 )mmol/2 4h及 (2 .15± 0 .42 )mmol/2 4h (P <0 .0 0 1)。蛋白激酶G抑制剂Rp 8 pCPT cGMP能够拮抗二者的利钠作用 ,L 精氨酸 (L Arg) (NO合成酶底物 ) 4 0mg·kg 1·min 1可引起尿钠排出增加 (急性动物实验 ) ,从对照组 (1 6± 0 1) μmol/30min到(4 1± 0 1) μmol/30min(P <0 0 0 1) ,这一效应能被可溶性鸟苷酸环化酶的抑制剂ODQ阻断。NO供体SNAP可增加肾脏利钠作用从 (1.6 5± 0 .11) μmol到 (2 .93± 0 .0 8) μmol/30min(P <0 .0 0 1) ,这一效应同样被ODQ阻断。肾动脉输入cGMP(3μg/min) ,可引起尿钠排出增加 ,肾血流量及肾小球滤过率增加。肾组织cGMP增加肾脏泌钠作用 ,但不影响肾血流量及肾小球滤过率。结论 肾脏NO诱导利钠作用通过可溶性的鸟苷酸环化酶的激活以及cGMP产生。cGMP通过蛋白激酶G抑制肾小管钠的重吸收 ,与血流动力学改变无关。

稀土元素对5′-腺苷酸和5′-鸟苷酸的催化水解作用

用ＨＰＬＣ法研究了稀土金属离子ＲＥ３＋ （如Ｌａ３＋ ，Ｃｅ３＋ ，Ｎｄ３＋ ，Ｓｍ ３＋ ，Ｅｕ３＋ ）对５′－腺苷一磷酸（５′－ＡＭＰ）和５′－鸟苷一磷酸（５′－ＧＭＰ）的催化水解断裂作用． 结果表明：在温和条件下，稀土金属离子对５′－ＡＭＰ无明显的断裂作用，而Ｃｅ３＋ 对５′－ＧＭＰ有较好的断裂作用，当浓度降至０．０５ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ时，Ｅｕ３＋ 对５′－ＧＭＰ也有一定的断裂作用；Ｈ２Ｏ２ 能促进稀土金属离子对５′－ＡＭＰ的水解断裂作用；ｐＨ 对稀土金属离子水解切断５′－ＡＭＰ有影响．

O^6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷—磷酸的制备

O^6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷一磷酸由O^6-甲基脱氧鸟嘌岭苷与磷酸三甲酯在-10℃反应得粗品,再经 DEAE-Sephadex 和 Tsk-gel Toyopearl 二次柱层析纯化,最后用甲醇、丙酮和乙醚(1:1:8)重结晶,得无色针状结晶。

cGAS-STING通路调节机制的研究进展

环鸟苷酸-腺苷一磷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激蛋白(STING)通路在适应性及固有免疫反应的激活中起关键作用。DNA病毒可通过多种病毒组分调节cGAS-STING通路的激活状态,最终产生免疫逃逸。cGAS-STING通路感知外来或自身DNA后的过度激活或抑制状态构成了疾病进程中的有利或不利因素。目前关于不同疾病条件下cGAS-STING通路动态调控的研究仍处于初级阶段,深入研究其在不同条件下的调节状态对于了解疾病的发生发展具有重要意义。此外,cGAS-STING通路的调节状态还参与了肿瘤、炎症性疾病等疾病的发生发展,靶向该通路的激动剂和拮抗剂的研发可以为感染性疾病、炎症性疾病和肿瘤的临床治疗提供新方向。

脉冲电磁场促进大鼠成骨细胞成熟与矿化依赖于NO/cGMP信号途径

脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields,PEMFs)能够促进大鼠成骨细胞(rat osteoblast cells,ROB)成熟矿化,但是其作用机制并不明确。本实验主要研究PEMFs促进大鼠成骨细胞成熟矿化与NO/c GMP信号途径的关系,进而阐明PEMFs促进成骨细胞成熟矿化的机理。首先,将成骨细胞经50 Hz、0.6 m T脉冲电磁场作用不同时间后,检测细胞培养液中一氧化氮(nitric oxide,NO)和细胞内3'-5'-环鸟苷一磷酸(3'-5'-cyclic-GMP,c GMP)的含量,以探明电磁场是否影响NO和c GMP的合成;其次,应用蛋白质印迹,检测细胞内e NOS、i NOS和PKG-1的蛋白表达量;最后,利用NOS的阻断剂L-NAME抑制NO信号通路后,检测成骨性相关指标,包括碱性磷酸酶(ALP)活性、钙化结节数量、成骨性基因Bmp-2、Collagen-1、Osterix及破骨细胞调节因子Rankl基因的表达量。结果发现,经PEMFs处理后,NO含量及c GMP含量均有明显升高;细胞内e NOS、i NOS和PKG-1蛋白表达量较空白对照组均有显著升高,说明PEMFs能够激活NO/c GMP信号途径。且经PEMFs处理的成骨细胞,ALP活性升高,BMP-2、Collagen-1和Osterix基因表达量显著增加,Rankl基因表达量下降,成骨细胞形成钙化结节的能力增强。当加入L-NAME,PEMFs引起的ALP活性增加、成骨性基因表达升高和钙化结节形成能力增强的趋势均被显著抑制。上述结果表明,经PEMFs处理成骨细胞成熟矿化过程中,NO/c GMP信号通路被激活;如该通路被抑制,则电磁场促成骨作用被抵消,说明脉冲电磁场促进成骨细胞成熟矿化依赖于NO/c GMP信号通路。

口腔鳞癌患者免疫功能测定及其临床意义

本文从分子学水平和细胞学水平，对３０例口腔鳞癌患者，及相应的正常对照者，做血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量及外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定。血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量测定发现，口腔鳞癌患者ｃＡＭＰ明显低于正常对照者（Ｐ＜０．０１），而ｃｏＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ无明显差异（Ｐ＞０．０５），提示口腔鳞癌患者ｃＡＭＰ抑制肿瘤细胞生长的能力低下，与全身其他部位癌症基本一致。Ｔ淋巴细胞亚群测定发现，口腔鳞癌患者与正常人存在明显差异，主要表现为口腔鳞癌患者ＣＤ３↓（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８↑（Ｐ＜０．０１），ｃＤ４／ＣＤ８↓（ｐ＜０．０１），提示口腔鳞癌患者细胞免免疫功能紊乱，免疫平衡失调。

心肌缺血时血小板功能变化的机制(英文)

研究了冠心病人以及实验大鼠心肌缺血期间血小板功能变化的机制。利用血小板聚集仪检测血小板聚集率 (PAgR)。应用CD41,CD6 2和标记第二抗体FITC在流式细胞仪上检查了GPⅡb/Ⅲa和GMP 140表达的变化。利用荧光血小板聚集仪测定了血小板ATP的释放量 ;利用血小板离子钙聚集仪检测胞浆内钙含量。结果表明缺血时PAgR的增高是由于血小板表面的GPⅡb/Ⅲa受体表达增加所致。缺血期间GMP - 140表达的增加表明心肌缺血时血小板易于被激活 ,并且黏滞性增高。心肌缺血时ATP释放量也明显增加。在血小板ATP释放反应和血小板聚集率之间有正反馈相互作用关系。心肌缺血能显著引起胞浆内钙含量的增高 ,后者是导致血小板功能异常变化的重要细胞内机制。

射麻止喘液对哮喘模型大鼠环核苷酸变化的影响

【目的】进一步探讨治疗哮喘的临床有效方剂射麻止喘液 (射干、麻黄、椒目等 )的作用机理。【方法】建立大鼠哮喘模型 ,设立大鼠正常组、模型组、西药组、中药组 ,用放射免疫法对各组肺组织的环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷 (cGMP)含量的变化进行比较研究。【结果】治疗后西药组和中药组的cAMP、cAMP cGMP均较模型组提高 ,cGMP降低 (P <0 .0 5 ) ,但中药组与西药组间的cAMP cGMP无显著性差异。【结论】提示射麻止喘液可能通过调节cAMP cGMP的失衡 ,从而抑制炎症细胞浸润 ,取得平喘的良效。

黎氏哮喘Ⅰ号方对哮喘小儿环核苷酸及哮喘豚鼠肺超微结构的影响

[目的]探讨小儿哮喘与血浆环核苷酸的关系及黎氏哮喘Ⅰ号方(由麻黄、桂枝、五味子、鹅管石、当归、毛冬青、五指毛桃根等组成)治疗哮喘的作用机理。[方法]将70例哮喘患儿随机分为黎氏哮喘Ⅰ号方治疗组(A)47例和氨茶碱对照组(B)23例,并设10例健康儿童对照组(C),应用放射免疫法观察各组治疗前后血浆cAMP(环磷酸腺苷)、cGMP(环磷酸鸟苷)水平,并在哮喘豚鼠模型上进行验证。同时利用透射式电子显微镜观察黎氏哮喘Ⅰ号方对哮喘豚鼠肺超微结构变化的影响。[结果]治疗后A、B两组哮喘儿童cAMP、cGMP水平均有改善,cAMP/cGMP比值上升(与治疗前相比,均P<0.01)。动物实验表明,治疗后中药高剂量组cAMP/cGMP比值改善优于氨茶碱组(P<0.01)。黎氏哮喘Ⅰ号方连续治疗7 d后,哮喘豚鼠肺毛细血管壁增厚程度减轻,无胶原纤维增生。[结论]黎氏哮喘Ⅰ号方能提高哮喘患儿及哮喘豚鼠cAMP/cGMP比值,减轻哮喘豚鼠肺组织的炎症程度。

粒细胞白血病患者环核苷酸代谢的研究

通过对２１例粒细胞白血病患者血浆环一磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量、腺苷酸环化酶（ＡＣ）、环腺苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）比活性和环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量进行检测，并与１８例非白血病患者和２２例正常人血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量和ＡＣ、ＰＤＥ比活力进行比较，发现急性和慢性粒细胞性白血病组的ｃＡＭＰ水平显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ＡＣ比活力也显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ｃＧＭＰ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而ＰＤＥ比活力较正常对照组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在非白血病组，上述指标较正常对照组的差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。本文结果提示粒细胞白血病患者ｃＡＭＰ水平降低并伴随着ｃＧＭＰ水平的增高，呈相反现象，而ｃＡＭＰ水平降低的原因系由于腺苷酸环化酶（ＡＣ）比活力下降的结果，并对ＡＣ比活力下降的机理以及造成粒细胞白血病及其前期细胞快速增殖和异常分化的病理生理机制进行了讨论。

cGMP对原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通遭的作用

3′，5′-环一磷酸鸟苷（cGMP）具有激活血管平滑肌细胞膜上钙激活钾通道（KCa通道）的作用，从而引起血管平滑肌细胞的舒张。但cGMP激活KCa通道的机制存在争论。本工作应用膜片箝技术以原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞为对象研究了cGMP影响KCa通道的机制。实验结果显示：（1）在cell－attached膜片方式下，当浴液内游离Ca2+浓度为10－7mol／L，膜电位为＋70mV时，不同浓度的cGMP的膜透过类似物8－bromo-cGMP（0．25mmol／L，0．50mmol／L，1．00mmol／L）对此类通道有明显的激活作用；（2）在inside-out膜片方式下，1．00mmol／L的8－bromo－cGMP对通道却无激活作用。说明cGMP对KCa通道的激活作用并非是直接的，而是需要经过一系列的胞内过程才能实现。

六味地黄汤及其配伍对L-T_4模型血浆中核苷酸含量的影响

给小鼠皮下注射L-甲状腺素(L-T_4)0.6mg/天,能显著增加血浆中cAMP、cGMP含量,但对cA/cG比值无显著影响。在L-T_4模型基础上,“全方”及“三泻”不能对抗被L-T_4增加的cAMP,而对被上升的cGMP含量能使其显著下降,“三补”则能对抗被L-T_4增加的cAMP使其含量降至与空白对照组相近水平。“全方”提高模型小鼠的cA/cG比值,但与空白对照组没有显著变化,“三补”、“三泻”对模型动物的cA/cG比值无显著影响。

一氧化氮与脂质过氧化相关性的动物实验研究

目的脂质过氧化对Wistar大鼠一氧化氮(NO)活性的影响。方法超氧阴离子、NO相关因素灌流离体大鼠主动脉,观察血管环一磷酸鸟苷(cGMP)水平和MDA含量的动态变化。结果与对照组比较,低浓度、高浓度H2O2灌流主动脉分别使血管条cGMP含量增加23.08%(P<0.05)、降低75.21%(P<0.01);预先应用NO合成底物L-Arg孵育,可以显著抑制高浓度H2O2灌流主动脉引起的cGMP水平下降的效应,使MDA含量降低;与较高浓度H2O2灌流组比较,L-NNA灌流使血管cGMP明显降低(P<0.05),MDA含量增加(P<0.05);NPS、SOD灌流可以拮抗高浓度H2O2抑制cGMP活性(P<0.01)的效应;并显著降低MDA含量(P<0.01)。结论低浓度和高浓度的脂质过氧化,分别促进和抑制血管NO的合成与释放,表明NO在一定范围内可以抑制脂质过氧化,进而对缺血、缺氧组织有明显的保护作用;同时超氧阴离子过剩与NO生成和功能缺陷有直接的相关性。

一氧化氮在一次高负荷运动诱导大鼠腓肠肌线粒体生物合成的转录调控作用

目的:观察一次高负荷运动后NO介导腓肠肌线粒体生物合成的转录调控作用。方法:6周龄雄性SD大鼠56只,随机分成:安静对照组(C)、运动后即刻组(E0)、运动后3 h组(E3)、6 h组(E6)、12 h组(E12)、18 h组(E18)和24 h组(E24);硝酸还原酶法测腓肠肌NO浓度和NOS活性,放射性免疫法测cGMP含量;RT-PCR测eNOS、PGC-1α、NRF-1、Tfam和COXIV基因;Western-blotting测COXIV蛋白。结果:E0组腓肠肌NO浓度、cGMP含量升高,NOS活性增加,eNOS mRNA下降;E6组NOS活性、eNOS mRNA和cGMP含量都达到峰值。E0组腓肠肌NRF-1 mRNA、Tfam mRNA、PGC-1α和COXIV mRNA升高。结论:一次高负荷运动可能通过NO-NOS-cGMP通路激活、调控NO体系,进而激活sGC-cGMP依赖信号途径,激发线粒体生物合成。

cGMP对大鼠心肌细胞葡萄糖摄取的抑制作用

目的 :观察大鼠心脏两种负荷状况时环化鸟苷一磷酸 (c GMP)对心肌细胞摄取葡萄糖的影响。方法 :应用 c GMP类似物 8- Brc GMP、一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂 L - NAME和 NO供体 SNAP灌注 Wistar大鼠心脏 ,并用放免法测定组织内c GMP浓度。根据 2 - 3H标记率计算葡萄糖摄取量。结果 :低负荷状况时 8- Brc GMP使冠脉血流增加 ,细胞内糖原浓度升高。高负荷状况时 8- Brc GMP使心排出量减少 ,心肌细胞对葡萄糖摄取减少和使糖原浓度降低。 L - NAME降低心肌细胞 c GMP浓度 ,并刺激葡萄糖摄取 ,而 SNAP作用则相反。 结论 :心肌细胞内 c GMP浓度升高 ,可抑制葡萄糖摄取 ;而 NOS抑制剂 L -NAME则能降低 c GMP浓度 ,使心肌细胞葡萄糖摄取增加 ,糖原分解减少 ,使缺血心肌功能受到保护。

一氧化氮的细胞内信号转导

从多个方面对一氧化氮(NO)的细胞内信号转导途径进行了阐述。

NP-cGMP-PKG信号通路在D型钠尿肽抑制延迟整流型钾电流中的作用

目的:探讨NP-cGMP-PKG信号通路在D型钠尿肽(DNP)抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上延迟整流型钾电流中的作用及其相关机制.方法:用全细胞模式的膜片钳技术记录豚鼠胃窦环形肌上延迟整流型钾电流(IK(V)).并观察NP-cGMP-PKG信号通路在DNP抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上延迟整流型钾电流中的作用.结果:DNP抑制豚鼠胃窦环形肌上IK(V)并呈现剂量依赖关系.0.01,0.1和1μmol/L的DNP在去极化到60mV时使IK(V)抑制到原来的83.5%±2.1%,71.8%±2.3%和63.8%±2.2%.鸟苷酸环化酶抑制剂LY83583减弱这种抑制作用,0.1μmol/L的LY83583使1μmol/L的DNP抑制IK(V)的程度由原来抑制到63.8%±2.2%减弱为抑制到76.8%±2.3%.而cGMP敏感的磷酸酯酶抑制zaparinast却能增强这种作用.1μmol/L的zaparinast使1μmol/L的DNP抑制IK(V)的程度由原来抑制到63.8%±2.2%增强为抑制到56.8%±2.1%.DNP对IK(V)的抑制作用可完全被cGMP依赖的蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT5823所消除,但不受cGMP依赖的蛋白激酶A(PKA)抑制剂的影响.结论:NP-cGMP-PKG途径参与DNP抑制豚鼠胃窦环形肌细胞上IK(V)过程,而cAMP-PKA途径并不参与此过程.IK(V)在维持豚鼠胃窦环形肌细胞静息电位中起重要作用.

大鼠心肌环核苷酸系统的增龄变化

测定不同月龄大鼠心室肌中cAMP、cGMP和钙调素(CaM)含量,及腺苷酸环化酶(AC)基础活性、AC肾上腺素激活活性、cAMP磷酸二酯酶(cAMP-PDE)活性。结果:cAMP、AC基础活性和AC肾上腺素激活活性随大鼠月龄增长而明显降低,cAMP/cGMP比值和CaM含量24月龄鼠明显低于10月龄鼠,cGMP含量10月龄鼠明显低于2月龄鼠,cAMP-PDE活性10月龄鼠明显高于2月龄鼠。提示心肌环核苷酸系统随大鼠月龄的增加而变化。