神经突触中枢神经突触膜相关鸟甘酸激酶锚定蛋白参与疼痛调节的研究进展

背景中枢神经突触膜相关鸟苷酸激酶（membrane-associatedguanylatekinase，MAGUK）蛋白家族包含4种突触相关蛋白：PED-93、PSD-95、SAP-102、SAP-97，它们参与调节谷氨酸突触信号传递，与学习记忆和疼痛等有关。目的综述神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和分子之间的相互作用及其在疼痛信号调节及传递中的作用。内容神经突触MAGUK锚定蛋白可通过与N．甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体、神经元型一氧化氮合酶（neuronalnitricoxidesynthase，nNOS）、使君子酸（a-amino-3-hydroxy-5．nlethy4_isoxazolepropionate，AMPA）受体以及突触细胞黏附分子（synaptiecell-adhesionmolecules，SynCAM）等相互作用参与调节疼痛信号在突触的传递，影响突触传递强度。趋向干扰神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和重要分子间的相互作用可影响疼痛信号在突触的传递，是疼痛治疗的新靶点。

CARMA蛋白家族与疾病关系的研究进展

含半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白(CARMA),属于膜相关鸟苷酸激酶家族成员。CARMA蛋白家族有三个成员,分别是CARMA1、CARMA2和CARMA3。CARMA蛋白家族三个成员均可通过与B细胞淋巴瘤10(BCL10)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤基因1(MALT1)组成CARMA1-BCL10-MALT1(CBM)复合体参与人核转录因子κB(NF-κB)的激活过程,从而发挥其生物学功能,广泛参与各种人类疾病的发生、发展过程。

慢性强迫游泳对大鼠行为学及脑内GKAP表达的影响

目的探讨慢性强迫游泳应激对大鼠脑组织内鸟苷酸激酶相关蛋白表达的影响。方法将30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠按体重随机分为对照组、游泳应激组、游泳应激＋MK801组，每组10只，建立动物模型，将游泳应激组、游泳应激＋MK801组大鼠置于（100X80×80）cm^3方型容器中进行强迫游泳，每次1只，每只每天游10min，持续14d，游泳应激＋MK801组大鼠每天游泳之前皮下注射MK801（1g·kg·d^-1）。观察3组不动时间、体重增长情况、液体消耗量。采用免疫印迹方法测定慢性强迫游泳应激后各组大鼠海马、前额皮质、基底结的鸟苷酸激酶相关蛋白表达水平。结果经慢性强迫游泳应激后，与对照组及游泳应激＋MK801组相比，游泳应激组体重增长量、糖水消耗量、糖水偏爱百分比均显著减少（P〈O．05）。游泳应激组大鼠在第14d强迫游泳中，不动时间较第1d显著增加（P〈0．05），而游泳应激＋MK801组则无显著变化。游泳应激组海马鸟苷酸激酶相关蛋白表达量显著高于对照组及游泳应激4-MK801组（P〈O．01），前额皮质及基底结的鸟苷酸激酶相关蛋白量3组间差异无显著性。结论慢性强迫应激对大鼠的心理行为和生理成长均产生影响，鸟苷酸激酶相关蛋白可能是慢性应激反应的相关蛋白。

慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力

目的研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响。方法应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况。应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrigel)检测体外迁移与侵袭能力的改变。反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制。结果成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株。K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果最好,利用该模型进行后续研究。台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P<0.01)。与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3%和28.6%;克隆形成抑制率分别为37.6%和34.1%。体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P<0.01)。CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降。结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关。

miRNA-24通过靶向CARMA3基因调控胃癌AGS细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测不同胃癌细胞株(AGS、MKN74、HGC27)和胃黏膜上皮GES-1细胞中miRNA-24的表达水平。建立miRNA-24过表达的AGS细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关cyclin D1、CDK2、Bcl-2、p-IκB-α/IκB-α和p-Rb/Rb蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miRNA-24可能的靶基因。结果:3株胃癌细胞中miRNA-24的表达均低于GES-1 cell。转染miRNA-24 mimic(miR-24组)48 h后AGS细胞增殖活力显著低于miR-NC组[(119.62±12.63)%vs(147.79±11.89)%,P<0.05],并出现周期阻滞,且早期和晚期细胞凋亡率明显较miR-NC组上升[早期凋亡率:(11.32±2.27)%vs(0.57±0.08)%;晚期凋亡率:(15.56±2.27)%vs(0.85±0.16)%,均P<0.05]。转染miRNA-24 mimic后,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白表达水平均较miR-NC组显著降低,p-IκB-α蛋白的表达水平较miR-NC组显著上升。共转染miRNA-24 mimic和miRNA-24可能作用靶点CARMA3基因过表达质粒的miR-24+pc DNA-CARMA3组AGS细胞CARMA3蛋白表达较miR-24组明显增加(1.74±0.09 vs 1.03±0.06,P<0.05)。miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞48 h增殖活力较miR-24组显著升高[(137.85±15.34)%vs(102.31±11.23)%,P<0.05];而miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较miR-24组显著降低[早期凋亡率:(4.24±0.56)%vs(11.32±2.27)%,P<0.05;晚期凋亡率:(6.38±0.63)%vs(15.56±2.27)%,P<0.05]。CARMA3过表达可部分逆转miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的作用。结论:miRNA-24可通过靶向CARMA3基因抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡。

加权重基因共表达网络分析识别慢性肾脏病足细胞损伤关键节点基因MAGI2

目的通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)识别慢性肾脏病(CKD)足细胞损伤相关的基因模块与关键基因。方法从基因表达综合数据库(GEO)中下载包含足细胞损伤体外模型及CKD患者肾小球组份的表达谱GSE66107、GSE93798、GSE30528、GSE32591 4个数据集。利用R软件包做数据预处理并选取错误发现率(FDR)<0.05及差异倍数≥1.5作为差异表达基因(DEG);结合数据集GSE993395(133例CKD患者肾小球样本)用WGCNA进行模块化分析并对模块内基因进行功能注释(GO),根据GO结果和含有文献报道的足细胞标准基因(PSG)情况确定足细胞损伤相关模块,根据模块内基因连接度(Kwithin)挑选枢纽(hub)基因;利用Cytoscape软件及插件Cluego构建足细胞损伤相关模块基因的加权共表达网络。结果 4个数据集共得到趋势一致的DEG 7 957个,其中15个DEG在4个数据集中均有差异(co DEG)。GSE993395中包含的4 031个DEG被用于WGCNA分析;最终得到12个基因模块,其中green模块包含最多的co DEG和PSG,进一步通过Kwithin发现其中同时作为co DEG和PSG的MAGI2基因是其hub基因之一。结论WGCNA表达网络分析方法是一个高效的系统生物学方法,应用该方法发现CKD时关键节点基因MAGI2在足细胞损伤中可能起到重要作用。

CARMA3调控NF-κB信号通路激活的研究进展

含半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白3(caspase recruitment domain and membrane-associated guanylate kinase-like domain protein 3,CARMA3)属于CARMA家族,是一个新型的骨架蛋白。CARMA3通过调控NF-κB信号通路的激活,影响细胞的周期进程、增殖和信号转导,从而影响癌症的发生和细胞应答。论文介绍了NF-κB信号通路的激活过程、G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)的配体、DNA损伤和感染可激活CARMA3介导的NF-κB信号通路、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的活性水平受CARMA3介导的NF-κB信号通路的影响、A20负调控CARMA3介导的NF-κB信号通路,以及CARMA3与癌症发生的关联,旨在为基于NF-κB信号通路的细胞周期进程、增殖和细胞应答方面的研究提供参考。