鸟苷酸结合蛋白α亚基变异与腹膜假黏液瘤关系的研究进展

鸟苷酸结合蛋白(guanine nucleotide-binding protein,G蛋白)是细胞信号转导的关键调控因子。G蛋白结构和功能异常是诸多疾病的常见分子病理机制。α亚基是G蛋白结构和功能中心。腹膜假黏液瘤(pseudomyxoma peritonei,PMP)是一种以黏蛋白持续分泌为主要病理特征的恶性肿瘤综合征,Gα蛋白结构、功能变异导致黏液的持续分泌,是腹膜假黏液瘤的重要分子病理机制。本文就Gα蛋白基因表达、Gα蛋白变异的结构及功能特征、Gα蛋白变异与腹膜假黏液瘤相关性的研究进展进行综述,以期探索腹膜假黏液瘤发病的分子病理学机制。

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鸟苷酸结合蛋白(guanine nucleotide-binding protein,G蛋白)是细胞信号转导的关键调控因子。G蛋白结构和功能异常是诸多疾病的常见分子病理机制。α亚基是G蛋白结构和功能中心。腹膜假黏液瘤(pseudomyxoma peritonei,PMP)是一种以黏蛋白持续分泌为主要病理特征的恶性肿瘤综合征,Gα蛋白结构、功能变异导致黏液的持续分泌,是腹膜假黏液瘤的重要分子病理机制。

鸟苷酸结合蛋白2b在牛分枝杆菌诱导巨噬细胞极化过程中的作用

旨在探究鸟苷酸结合蛋白2b (guanylate-binding protein 2b, GBP2b)对M.bovis感染的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞M1、M2型极化的调控及其介导的信号通路。通过小干扰RNA下调RAW264.7巨噬细胞内GBP2b表达,分别利用qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞表面标志物以及依赖MyD88信号通路关键蛋白表达情况;双萤光素酶报告基因检测GBP2b对NF-κB转录调控。结果表明GBP2b在M.bovis感染的巨噬细胞内高表达.下调RAW264.7巨噬细胞的GBP2b后再经M.bovis感染24 h, M1巨噬细胞表面标志物表达下调,而对M2巨噬细胞表面标志物表达无显著影响。下调GBP2b后抑制了NF-κB的转录启动,依赖MyD88信号通路相关蛋白随GBP2b的下调而下调。结果表明,GBP2b主要通过依赖MyD88信号通路促进M.bovis感染的RAW264.7巨噬细胞向M1表型极化和炎性反应,从而有助于巨噬细胞清除胞内M.bovis。

鸟苷酸结合蛋白家族在感染性疾病中调控炎症小体活化的研究进展

鸟苷酸结合蛋白(guanylate-binding proteins,GBP)是一类干扰素诱导蛋白,在应对细菌、病毒、衣原体以及寄生虫等病原体感染时,其发挥的作用存在差异,并且影响感染性疾病的发展和结局。目前,研究者发现在细菌等病原体感染引发的细胞自主免疫中,GBP蛋白通过影响炎症小体的经典和非经典活化途径调控细胞焦亡。本文对GBP家族成员结构、进化特征以及炎症小体的经典和非经典活化途径进行了介绍,综述了GBP蛋白调控炎症小体活化的相关研究进展,归纳总结了GBP蛋白影响不同病原体感染的作用机制,以期为感染性疾病的发病机制和诊疗提供新的基础研究线索。

干扰素刺激基因鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)质粒的构建及其抗汉滩病毒感染的作用

目的构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒,研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)在汉滩病毒(HTNV)感染过程中的作用。方法利用一步定向克隆(In-fusion)方法构建pCMV-GBP2-3tag6质粒,并用双酶切和测序方法进行鉴定。将构建成功的pCMV-GBP2-3tag6质粒转染A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。A549细胞转染GBP2质粒24 h后感染HTNV。实时定量PCR检测HTNV S、β干扰素(IFN-β)、黏病毒抗性蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白四肽重复序列1(IFIT1)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因mRNA表达水平,Western blot法检测GBP2和HTNV核衣壳蛋白(NP)表达,病灶形成实验检测细胞上清中HTNV滴度。结果成功构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒,并在A549细胞中成功表达GBP2蛋白;过表达GBP2对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡无影响,但是可以显著降低细胞中HTNV S基因mRNA水平和NP蛋白含量以及细胞上清中HTNV滴度,调控HTNV感染后IFN通路相关基因的表达。结论GBP2可能通过调控IFN的反应抑制HTNV感染。

膀胱癌组织中脂肪酸结合蛋白6、核苷酸还原酶M1亚基的表达及与临床病理特征的相关性

目的:探究膀胱癌(bladder cancer)组织中脂肪酸结合蛋白6(fatty acid-binding protein6,FABP6)、核苷酸还原酶M1亚基(ribonucleotide reductase regulatory subunit M1,RRM1)的表达水平及其与膀胱癌患者临床病理特征的相关性。方法:回顾性分析2020年2月-2021年12月大冶市人民医院收治的并接受手术切除的40例膀胱癌患者的临床资料。采用免疫组化法检测各组织中的FABP6和RRM1蛋白表达水平,并分析FABP6和RRM1蛋白与各项临床特征的关系。结果:膀胱癌组织中FABP6和RRM1高蛋白表达水平占比均高于癌旁正常组织(P<0.05)。FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:FABP6、RRM1在膀胱癌组织中表达水平高于癌旁正常组织,且两者均参与了膀胱癌的发生、发展进程。

鸟苷酸结合蛋白α亚基突变与毒型多结节性甲状腺肿发病的相关研究

毒性多结节性甲状腺肿（TMG）是指在多结节性甲状腺肿发病多年后继发的甲状腺功能亢进。其发病原因尚不明确，且多停留在流行病学阶段。随着分子生物学技术的不断发展，鸟苷酸结合蛋白（G蛋白）在TMG发病过程中的作用逐渐受到关注。本研究观察TMG中刺激性G蛋白α亚基的突变情况，并探讨其与TMG发病的关系。

鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟

目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。

鸟苷酸结合蛋白活性调节研究进展

G蛋白位于信号转导网络的枢纽地位 ,其活性的调节具有十分重要的意义。许多既亲水又亲脂的两性阳离子化合物如黄蜂毒素mastoparan与其相关肽、多种亲脂性化合物、一些受体家族衍生的氨基酸序列都具有激活G蛋白的性质。G蛋白拮抗剂主要包括一些变构鸟苷酸、G蛋白衍生肽类以及以舒拉明为代表的一些非肽类拮抗剂。此外 ,G蛋白信号转导调节因子 (RGS)是一类重要的和普遍存在的G蛋白效应因子 ,通过与GTP结合 ,激活Gα的GTP酶活性 ,分解GTP并抑制GDP的释放及GTP的再结合 ,调节G蛋白偶联受体信号转导的启动、强度和持续时间。鉴于G蛋白在信号转导中的重要作用 ,直接作用于G蛋白的调节剂将成为一类重要的药物 ,它们代表了一种新的治疗策略 ,具有广阔的研究与应用前景。

鸟苷酸结合蛋白与内分泌疾病

鸟苷酸结合蛋白与内分泌疾病巴建明，综述罗国春，潘长玉审校许多激素、神经递质等化学信息是通过膜受体，鸟苷酸结合蛋白（Ｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，Ｇ蛋白）、效应于（腺苷酸环化酶、磷酯酶Ｃ、乙离子通道等）组成的跨膜信息系...

鸟苷酸结合蛋白信号转导的分子机制

鸟苷酸结合蛋白,具有信号转导作用,它涉及到第二信使的控制、细胞生长的调节、离子通道的开关、嗅、视觉和其它信号转导系统等多种功能。本文简述G蛋白的类型及其信号转导的分子机制。

膜结合鸟苷酸激酶蛋白质家族的结构与功能

MAGUKs蛋白家族成员位于细胞表面 ,通过其PDZ、SH3 、GK结构域调节离子通道受体的聚集 ,构建细胞骨架 ,参与信号转导 ,调控细胞周期进程 。

鸟苷酸结合蛋白5基因在老年肺结核患者外周血单个核细胞中的表达

目的探讨鸟苷酸结合蛋白(GBP)5基因在老年肺结核患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法选择浙江金华广福肿瘤医院2015年1月至2016年12月老年初治肺结核患者80例作为肺结核组,健康体检者80例作为对照组。肺结核组给予标准化抗结核方案(2HRZE/4HR)治疗。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定外周血单个核细胞中GBP5表达量。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平。结果肺结核组外周血单个核细胞中GBP5表达量显著高于对照组(P<0.05)。肺结核组血清TNF-α、IL-6水平显著高于对照组(P<0.05)。外周血单个核细胞中GBP5诊断老年肺结核的受试者工作特征(ROC)曲线下面积AUC为0.886(95%CI:0.778～0.964,P=0.000),灵敏性为67.83%,特异性为92.75%。老年肺结核患者外周血单个核细胞中GBP5与血清TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。老年肺结核患者治疗后外周血单个核细胞中GBP5表达量明显低于治疗前(P<0.05)。结论老年肺结核患者外周血单个核细胞中GBP5表达量升高,与血清炎性细胞因子关系密切,在其诊断及疗效评估中具有重要价值。

鸟苷酸结合蛋白4在多种肿瘤中的作用及分子机制研究进展

恶性肿瘤是严重影响人类健康的一大顽疾,其发病率和死亡率在全球逐年增长。近年来,靶向基因治疗肿瘤的研究已取得较大突破。其中,鸟苷酸结合蛋白4(GTPBP4)是最新发现的一种肿瘤相关基因,定位于细胞核,可表达为具有GTP水解酶活性的蛋白质,并与细胞生物核糖体合成、细胞增殖等生物学过程息息相关。研究发现GTPBP4过表达的恶性肿瘤患者往往预后较差,沉默GTPBP4基因则可降低肿瘤细胞的侵袭、迁移及增殖等能力。本文主要对GTPBP4在多种肿瘤发生、发展过程中的功能及分子机制作一综述,以期为进一步研究和运用GTPBP4靶向治疗肿瘤提供理论参考。

家蚕质型多角体病毒的三磷酸核苷酸结合蛋白

为探讨家蚕细胞质型多角体病毒 (BmCPV)结构蛋白的构造及其功能 ,采用α 3 2 P标记的鸟嘌呤三磷酸核苷酸、腺嘌呤三磷酸核苷酸、胞嘧啶三磷酸核苷酸和尿嘧啶三磷酸核苷酸与病毒粒子共浴的方法进行了研究。结果证明VP3能够与鸟嘌呤三磷酸核苷酸和尿嘧啶三磷酸核苷酸结合 ,暗示了VP3是BmCPV的三磷酸核苷酸结合蛋白 ,推测其在BmCPV核酸RNA形成mGpppAmpGp帽子结构中起作用 ,具有RNA鸟苷酰转移酶功能。

水稻瘤矮病病毒和矮缩病病毒的核苷酸结合蛋白和核酸结合蛋白及其结合能力分析

采用α 32 P标记的三磷酸核苷酸与病毒粒子共浴的方法及Northwestern分子杂交方法 ,研究证明了RGDV结构蛋白中 ,P1蛋白可能是依赖于RNA的RNA聚合酶 ,P5蛋白可能具有RNA鸟苷酰转移酶功能 ,P6蛋白可能是核酸结合蛋白 ,是RGDV复制包装中的关键蛋白。与RGDV结构蛋白具有相同生物功能的RDV的核酸结合蛋白与核酸的结合能力最强 ,依赖于RNA的RNA聚合酶与核酸的结合能力次之 ,RNA鸟苷酰转移酶与核酸的结合能力最弱。结果暗示了可以根据与核酸的结合能力 ,辅助判断RDV或RGDV这 3个结构蛋白的生物功能。

鸟苷酸结合蛋白5在结直肠癌中抑制细胞增殖、侵袭和迁移的作用及机制

目的探究鸟苷酸结合蛋白5(GBP5)在结直肠癌(CRC)细胞中的生物学功能及潜在分子机制。方法选取空军军医大学第一附属医院2021年2月至2021年3月手术切除的15对CRC和癌旁组织作为研究对象,利用荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测CRC组织中GBP5表达水平。使用慢病毒转染获得敲低和过表达GBP5的细胞,采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)实验、平板克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验验证GBP5在CRC细胞中的作用。采取转录组测序技术结合生物信息学分析GBP5抑制CRC细胞恶性进展的潜在机制。两组间计量资料比较采用t检验,多组间比较采用方差分析。结果GBP5在部分CRC组织中表达水平显著低于配对正常组织(1#:0.09±0.01比1.00±0.40,t=3.992;2#:0.29±0.20比1.00±0.23,t=3.882;3#:0.12±0.02)比(1.00±0.44,t=3.493;15#:0.11±0.04比1.00±0.18,t=8.265,均P<0.05);GBP5高表达组患者的生存率更高(Log rank P<0.05)。LV-shGBP5组EdU阳性和S期细胞比例高于对照组[(49.9±7.5)%比(82.8±9.6)%,t=4.673,P<0.05;(38.9±2.7)%比(49.1±1.8)%,t=5.441,P<0.05];LV-shGBP5组形成的细胞集落数、侵袭和迁移细胞数高于对照组[(437.33±24.58)个比(737.00±124.94)个,t=4.076,P<0.05;(103.00±7.94)个比(172.00±6.92)个,t=11.34,P<0.05;(329.33±103.25)个比(898.33±133.38)个,t=5.843,P<0.05];LV-shGBP5组凋亡率低于对照组[(4.98±0.07)%比(2.11±0.11)%,t=39.23,P<0.05]。LV-GBP5组EdU阳性和S期细胞比例低于对照组[(67.4±9.8)%比(27.6±12.3)%,t=4.377,P<0.05;(54.9±1.7)%比(49.3±2.7)%,t=3.100,P<0.05];LV-GBP5组形成的细胞集落数和侵袭和迁移细胞数低于对照组[(1299.67±173.28)个比(991.00±6.56)个,t=3.083,P<0.05;(113.67±19.86)个比(57.33±16.62)个,t=3.768,P<0.05;(279.66±15.57)个比(132.67±63.31)个,t=3.905,P<0.05];LV-GBP5组凋亡率高于对照组[(3.70±0.15)%比(4.65±0.25)%,t=5.689,P<0.05]。结论GBP5在CRC中表达降低,过表达GBP5可抑制CRC细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡。

鸟苷酸结合蛋白5在牛分枝杆菌诱导巨噬细胞极化过程中的作用

【背景】牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)是重要的人畜共患病原体,严重危害公共卫生安全。巨噬细胞是牛分枝杆菌感染的主要效应细胞,M1型巨噬细胞极化对于宿主免疫防御M. bovis感染至关重要。【目的】探讨鸟苷酸结合蛋白5(guanylate-binding protein 5, GBP5)对M. bovis感染的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞M1、M2型极化的影响,以及GBP5在M. bovis感染中的作用。【方法】通过前期转录组学数据分析筛选出差异基因GBP5,通过体内、体外验证M. bovis感染后的GBP5的表达水平。小干扰RNA下调细胞内GBP5表达,分别利用RT-q PCR、Western blotting和流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞表面标志物表达变化;平板菌落计数法检测GBP5对M. bovis在巨噬细胞中复制的影响;双荧光素酶报告基因试验检测GBP5对信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)转录调控;Western blotting检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)抑制后STAT3的磷酸化情况。【结果】GBP5在M. bovis感染的RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠组织中表达增加;下调GBP5后细胞内细菌CFU在感染后不同时间点均显著增加,ROS释放减少,M1型巨噬细胞表面标志物表达减少,但是对M2型巨噬细胞无显著影响;下调GBP5后抑制了STAT3的转录启动。ROS的产生抑制了STAT3的磷酸化。【结论】GBP5促进ROS的产生,调控ROS/STAT3通路,促进巨噬细胞向M1型极化,从而抑制细胞内牛分枝杆菌的存活。

人鸟苷酸结合蛋白5基因启动子核心调控区域的鉴定及其转录活性分析

目的构建人鸟苷酸结合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因启动子不同长度截短片段的荧光素酶报告基因质粒,通过分析启动子不同截短片段的转录活性,确定其核心调控区域。方法PCR扩增GBP5基因启动子序列,将启动子序列截短为5个不同长度的片段,连接至载体pGL3-basic,构建重组质粒pGL3-GBP5-11/21/31/41/51。将各重组质粒转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性;利用JASPAR软件预测GBP5启动子区域的转录因子结合位点,依据预测结果选取靶向核心调控区域的阴阳转录因子1(Yin-Yang transcription factor 1,YY1)进行转录调控活性验证;PCR扩增YY1的CDS序列,构建过表达质粒pIRES2-EGFP-YY1;将pIRES2-EGFP-YY1、pGL3-GBP5-21(-1623~+47 bp)质粒与内参质粒pRL-CMV共转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性,分析转录因子YY1对GBP5启动子活性的调控作用。结果菌落PCR、双酶切鉴定证明人GBP5基因启动子报告基因质粒构建正确;JASPAR软件预测GBP5启动子区域存在STAT1、YY1、Foxp3等多个转录因子结合位点;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3-GBP5-21(-1623~+47 bp)启动子活性最高,而pGL3-GBP5-41(-520~+47 bp)启动子活性明显降低,提示GBP5启动子核心区域位于5’UTR上游-1623~-520 bp区域;过表达YY1能明显激活GBP5启动子活性,调控GBP5表达。结论人GBP5基因启动子的核心调控区域位于GBP5启动子5’UTR上游-1623~-520 bp区域,该区域存在转录因子YY1结合位点,YY1过表达能显著影响GBP5启动子活性。

鸟苷酸结合蛋白5在肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是人类死亡主要的原因之一。鸟苷酸结合蛋白5(GBP5)属于干扰素γ诱导的大型鸟苷三磷酸酶超家族,参与多种病理生理过程。越来越多的研究表明GBP5参与肿瘤的恶性进展。文章主要对GBP5的生物学特性及其在肿瘤中的表达、调控和功能进行综述,以期为肿瘤的诊疗提供理论依据。