鸡β-防御素13对尼罗罗非鱼生长和疾病抗性的影响

为探讨禽类β-防御素13(gallinacin-13,Gal-13)作为鱼用抗生素替代品的可能性,将150尾同塘同规格尼罗罗非鱼鱼种随机等分为2组:对照组喂商品罗非鱼饵料;Gal-13组在该饵料中添加100mg/kg的Gal-13。通过观测试验鱼的生长表现及其对凡隆气单胞菌BJCP-9株的抵抗力和黏附能力,并采用cell-ELISA法体外测试Gal-13对BJCP-9黏附罗非鱼肠上皮的影响。结果显示,罗非鱼饲料中添加100mg/kgGal-13可显著提高其生长表现和抗BJCP-9感染能力(P<0.05);100μg/mL的Gal-13并不能抑制BJCP-9生长,但能在体内外抑制BJCP-9对罗非鱼肠道上皮细胞的黏附。离体模拟黏附试验表明,Gal-13在25和2.5μg/mL的低浓度下有抗黏附作用(P<0.05),提示Gal-13的抗黏附作用可能是其促进动物生长和提高罗非鱼抗凡隆气单胞菌感染的机制之一,这种抗黏附作用同离子桥和/或配体-受体连接有关,同疏水性无关。

鸡β-防御素-13成熟肽的原核表达与抑菌活性分析

为表达鸡β-防御素-13(Gal-13)成熟肽并分析其抑菌活性,本研究采用RT-PCR技术从广西黄鸡肝脏中扩增Gal-13全长基因,亚克隆其成熟肽基因并构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。结果显示,Gal-13全长为312 bp,编码60个氨基酸,经Blast比对后显示其与广西黄鸡Gal-13序列同源性高达100%。SDS-PAGE和western blot分析表明重组蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,其分子量约为31 ku。抑菌试验检测结果显示,纯化后的重组蛋白对大肠杆菌BL21(DE3)和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。