猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用

旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。

意大利蜜蜂防御素-2蛋白序列分析及表达特性研究

【目的】对意大利蜜蜂(Apis mellifera)防御素-2蛋白(Defensin-2,Def-2)进行蛋白序列分析和表达特性研究,以期为意大利蜜蜂防御素基因的免疫防御机制、发育和代谢途径研究提供理论基础。【方法】利用生物信息学在线网站及软件对Def-2蛋白进行预测分析,并采用实时荧光定量PCR对意大利蜜蜂不同发育时期(幼虫期、蛹期及1、5、10、15、20、25和30 d成年期工蜂)的基因相对表达量进行检测分析。【结果】意大利蜜蜂防御素-2基因(Def-2)编码104个氨基酸残基,相对分子量为11858.90 Da,理论等电点(pI)为8.54,为两性不稳定蛋白。该蛋白N-末端有一段含21个氨基酸的信号肽,存在1个跨膜结构域,亚细胞主要定位于内质网、液泡和高尔基体,无糖基化位点,存在15个磷酸化位点,其二级结构以无规卷曲(54.81%)为主、延伸链(28.85%)分布较多,α-螺旋(16.35%)分布较少,蛋白序列高度保守,与Def-1、GB44032-PA、Dl-2、Imd等蛋白存在基因互作关系,具有防御蛋白样结构域(DEFL),结构域采用以半胱氨酸稳定的α/β支架为特征的结构,亲缘关系与小蜜蜂极为相近。Def-2基因在意大利蜜蜂不同发育时期的表达水平存在差异且随日龄增大而升高,30 d的相对表达量显著高于其他日龄(P<0.05)。【结论】意大利蜜蜂Def-2蛋白属于两性不稳定蛋白,参与细胞间信号传输并维持细胞正常形态;蛋白序列高度保守,亲缘关系与小蜜蜂最近,且该基因在30 d成年期工蜂中高丰度表达,推测其可能调节免疫基因转运而影响蜜蜂的免疫识别过程。

血清β-防御素-2、维生素E联合超敏C反应蛋白对急性下呼吸道感染患儿的诊断价值

目的 探讨血清β-防御素-2(hBD-2)、维生素E联合超敏C反应蛋白(hs-CRP)对急性下呼吸道感染的诊断价值。方法 以2021年1月至2022年4月在安徽省合肥市第八人民医院确诊治疗的86例急性下呼吸道感染患儿作为病例组,根据检测结果将86例急性下呼吸道感染患儿分为病毒性感染组(55例)和细菌性感染组(31例),另选择同期34例健康体检者为对照组。检测三组患儿血清hBD-2、维生素E及hs-CRP表达,应用Pearson相关性分析血清hBD-2、维生素E及hs-CRP表达与急性下呼吸道感染的相关性,最后通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积评价血清hBD-2、维生素E及hs-CRP表达对细菌性感染的诊断价值。结果 病例组患儿血清hBD-2和hs-CRP水平明显高于对照组,而维生素E水平明显低于对照组(P<0.05);细菌性感染组患儿血清hBD-2和hs-CRP水平明显高于病毒性感染组,而维生素E水平显著低于病毒性感染组(P<0.05)。相关性结果显示,观察组患儿血清hBD-2和hs-CRP与细菌性感染的发生呈正相关(P<0.001),而维生素E则与细菌性感染的发生呈负相关(P<0.001)。ROC结果显示,血清hBD-2、维生素E及hs-CRP并联联合预测细菌性感染发生的灵敏度=90.32%,特异度=94.55%,表明诊断结果具有较高的真实性;而Kappa=0.853,表明诊断结果与实际结果高度一致,具有临床应用价值。结论 血清hBD-2、维生素E、hs-CRP均可对小儿急性下呼吸道感染疾病的临床鉴别诊断提供较好的辅助诊断价值,三者并联联合试验,诊断结果与实际结果高度一致,具有临床应用价值。

肺结核患者血清甲壳质酶蛋白40、β-防御素-2水平及其对肺结核的诊断价值

目的探索肺结核患者血清甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)、β-防御素-2(human beta defensin 2,HBD-2)水平及其对肺结核的诊断价值。方法选取2021年6月—2023年6月山东省立医院收治的86例肺结核患者为肺结核组,根据痰涂片结果分为活动性肺结核组(n=50)和非活动性肺结核组(n=36),另选取86例来自我院体检中心的健康受试者作为对照组。检测所有受试者血清中YKL-40、HBD-2水平并分析肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的相关性;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清中YKL-40、HBD-2水平对肺结核及活动性肺结核的诊断价值。结果肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于对照组(P均<0.05);活动性肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于非活动性肺结核组(P均<0.05)。肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的水平呈正相关(r=0.601)。YKL-40、HBD-2及2者联合诊断肺结核的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.895、0.922、0.962,2者联合诊断优于单独诊断;YKL-40、HBD-2及2者联合诊断活动性肺结核的AUC分别为0.891、0.881、0.959,2者联合诊断优于单独诊断。结论肺结核患者血清YKL-40、HBD-2水平显著升高,且随病情加重而升高,2者对肺结核及活动性肺结核的具有一定的诊断价值。

25-羟基维生素D、人β防御素-2及胰岛素样生长因子1水平与痤疮患者疾病严重程度的关系

目的探讨外周血25-羟基维生素D[25(OH)D]、人β防御素-2(HBD-2)及胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平与痤疮患者疾病严重程度的相关性。方法选取128例寻常痤疮患者纳入痤疮组,另选取128例健康体检者纳入对照组。检测2组外周血25(OH)D、HBD-2及IGF-1水平。分析外周血25(OH)D、HBD-2及IGF-1水平与痤疮患者疾病严重程度的关系。分析痤疮患者外周血25(OH)D、HBD-2和IGF-1水平间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估25(OH)D、HBD-2和IGF-1水平对重度痤疮的诊断价值。结果痤疮组外周血25(OH)D水平低于对照组,IGF-1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组HBD-2水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。痤疮组中,随着患者疾病严重程度加重,其外周血25(OH)D水平依次降低,IGF-1水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。痤疮患者外周血25(OH)D水平与IGF-1水平、疾病严重程度呈负相关(r=-0.509、-0.586,P<0.05),IGF-1水平与疾病严重程度呈正相关(r=0.547,P<0.05),HBD-2水平与25(OH)D、IGF-1水平及疾病严重程度均无关(P>0.05)。外周血25(OH)D水平、IGF-1水平评估重度痤疮的敏感度分别为94.12%、61.26%,特异度分别为70.59%、77.48%,二者联合评估重度痤疮的敏感度为90.91%,特异度为71.43%。结论痤疮患者外周血25(OH)D水平降低,IGF-1水平升高,且其与疾病严重程度有关。25(OH)D、IGF-1水平联合评估重度痤疮的效能较好。

鸡β-防御素-1对鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用

本文旨在研究鸡β-防御素-1(AvBD1)对鸡IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用。通过基因工程技术,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2。14日龄岭南黄肉鸡随机分成5组,分别免疫PBS、空质粒载体pcDNA3.1(+)、重组质粒pcDNA3.1(+)-VP2、重组质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcD-NA3.1(+)-VP2联合免疫、IBD弱毒苗。收集免疫后不同时期的外周血血清样本,用ELISA方法检测血清中IB-DV VP2特异性抗体水平,通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量。结果表明,联合免疫组(即pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2共同免疫)VP2特异性抗体水平显著高于其他组;单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组VP2特异性抗体水平与免疫IBD弱毒苗组相当,显著高于PBS组与空质粒载体pcD-NA3.1(+)组。在二免后第7天,联合免疫组外周血中CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量也显著高于单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组,其它时间无显著性差异。IBDV攻毒后的保护率也是联合免疫组高于单独免疫pcDNA3.1(+)-VP2组。这些结果表明,鸡AvBD1可以作为一种免疫佐剂用于增强IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫力。

重组鸭β-防御素-2对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果研究

试验旨在研究重组鸭β-防御素-2（DAvBD2）对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果。经测定多重耐药性大肠杆菌对15日龄黄羽肉鸡的最小致死量为4×10~8cfu/m L。将100只15日龄黄羽肉鸡随机分为5组,每组20只。A组作为健康对照组,不攻毒,也不用给药;B组作为攻毒对照组,多重耐药性大肠杆菌攻毒,但不给药;C、D、E三组为治疗组,多重耐药性大肠杆菌攻毒2 h后,分别肌内注射200、250、300μg的重组DAvBD2,连用3 d。结果显示：最小致死量多重耐药性大肠杆菌攻毒后,B组死亡率是100%;C组死亡率70%、存活率30%、治愈率为20%;D组死亡率10%、存活率90%、治愈率70%;E组死亡率为0、存活率100%、治愈率80%。电镜观察发现,多重耐药性大肠杆菌经重组DAvBD2作用后,大肠杆菌细胞外膜外翻、凹凸不平、起泡,甚至出现孔洞,导致菌体内容物外泄。表明重组DAvBD2对感染多重耐药性大肠杆菌的雏鸡有较好的治疗效果,在临床治疗有很好的应用价值。

鸡β防御素Gal-2基因的克隆及序列分析

为了研究不同品种或品系鸡β防御素Gal-2基因，试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物，采用RT—PCR技术从宝万斯尼拉、罗曼粉、山地乌骨鸡、大恒优质肉鸡配套系A、B骨髓细胞中扩增出Gal-2基因，经PCR和酶切鉴定后测序，并采用DNAStar软件进行生物信息学分析。结果表明：成功克隆出5个品种（品系）Gal-2基因，5个编码区核苷酸序列同源性为100％。与GenBank中鸡β防御素Gal-2编码区核苷酸序列同源性为97．4％-100％，说明鸡B防御素Gal-2尽管高度保守，但不同地方品种间仍然存在遗传多样性。

重组鸭β-防御素-2对人工感染沙门氏菌雏鸡治疗效果研究

为了研究重组鸭β-防御素-2(DAv BD2)对感染沙门氏菌雏鸡的治疗效果,试验选取15日龄健康肉鸡进行沙门氏菌攻毒保护试验,分为3组,每组20只肉鸡,第1组为最小致死剂量沙门氏菌感染后,注射PBS液体;第2组为最小致死剂量沙门氏菌感染后,注射最适剂量重组DAv BD2;第3组为无沙门氏菌感染组,但注射最适剂量重组DAv BD2。结果表明:沙门氏菌对15日龄肉鸡的最小致死剂量为4×108cfu/m L,重组DAv BD2治疗的最适剂量为300μg/(只·d)。第1组发病率与死亡率都是100%;第2组发病率100%,死亡率20%,治愈率70%;第3组100%不发病。说明重组DAv BD2对肉鸡感染沙门氏菌病有较好的保护和治愈效果。

基于“肠道菌群调控β-防御素2”探究败酱草对IBD肠纤维化大鼠的作用机制

目的:探究败酱草提取物通过肠道菌群变化调控β-防御素2对炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)肠纤维化的治疗作用及可能机制。方法:选取36只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为正常对照组(Normal)、模型组(Model)、柳氮磺胺吡啶阳性对照组(SASP)、败酱草高(PS-H,3.2 g·kg-1)、中(PS-M,2.2 g·kg-1)、低剂量组(PS-L,1.1 g·kg-1),除Normal组给予等体积生理盐水灌肠外,其他各组大鼠均给予2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS)的50%乙醇溶液灌肠以诱导炎症性肠病肠纤维化发生。造模后次日起连续灌胃给药7 d, 1次·d-1,Normal组和Model组给予等体积生理盐水。观察大鼠一般行为情况;革兰氏染色观察肠道粪便菌群的变化;HE染色检测结肠组织病理学改变;Masson染色观察结肠组织纤维化情况;免疫组化检测结肠组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、转化生长因子-β(transforming growth factor β,TGF-β)蛋白表达,ELISA法检测结肠组织中β-防御素2、白细胞介素-13(interleukin-13)的表达。结果:与Normal组相比,Model组大鼠结肠病理损伤严重,胶原纤维蓝染增多,提示肠纤维化模型成功。与Model组相比,PS给药组能显著改善IBD肠纤维化大鼠的病理损伤及纤维化程度,下调α-SMA,TGF-β蛋白的异常高表达(P<0.05),降低β-防御素2的表达水平(P<0.05),升高IL-13表达水平(P<0.05),改善肠道菌群紊乱现象。结论:败酱草可能通过调节肠道菌群降低β-防御素2表达进而缓解IBD肠纤维化的疾病进程。

鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建

鸡β-防御素是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal-2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM-TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM-T-Gal-2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL-c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL-c2x-Gal-2重组质粒。

鸡β-防御素-2(Gal-2)基因在大肠杆菌中的融合表达与纯化

本试验通过优化基因工程菌pMAL-c2X-Gal-2-TB1的表达条件,找到使融合蛋白表达量达到最大的最佳表达条件,后采用Amylose树脂预装柱对可溶性目的蛋白分离、纯化和FactorXa因子酶切,为了得到Gal-2,再次过柱纯化,每一步产物用SDS-PAGE方法检测。结果融合蛋白的分子量约为50KD,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的36%;纯化后的融合蛋白纯度达90%以上,且经再次纯化得到纯度较高的Gal-2。

社区获得性肺炎患者血清HBD-1、SAA、sIL-2R水平变化及指导病情分级的意义

目的检测社区获得性肺炎(CAP)患者血清防御素-1(HBD-1)、淀粉样蛋白A(SAA)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平变化,并分析其对病情分级的指导意义。方法选取2021年7月至2023年8月在该院收治的85例CAP患者(CAP组),根据肺炎严重度指数(PSI)将其分为低风险组(34例)、中风险组(41例)和高风险组(10例),另取85例健康成人作为对照组。比较CAP组和对照组血清HBD-1、SAA和sIL-2R水平,比较PSI不同风险分组血清HBD-1、SAA和sIL-2R水平;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析HBD-1、SAA、sIL-2R水平对CAP患者的诊断价值;采用Spearman相关性分析CAP患者PSI值和血清HBD-1、SAA、sIL-2R水平之间的关系。结果CAP患者血清HBD-1、SAA和sIL-2R水平均高于对照组,其中PSI评分不同分组血清HBD-1、SAA和sIL-2R水平由高到低为高风险组>中风险组>低风险组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清HBD-1[曲线下面积(AUC)=0.739]、SAA(AUC=0.773)、sIL-2R(AUC=0.730)水平对CAP患者具有良好的诊断价值(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清HBD-1水平[相关系数(r)=0.304]、SAA(r=0.498)和sIL-2R(r=0.435)水平与PSI评分呈正相关(P<0.05)。结论血清HBD-1、SAA、sIL-2R水平对CAP患者的病情分级具有较好的指导意义。

pBD-2对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用

为了研究猪β-防御素-2(porcinβ-defensin2,pBD-2)对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用,试验将36只1月龄昆明小鼠随机分为空白对照组、热应激组和热应激+pBD-2组,每组12只。空白对照组和热应激组每天每只小鼠按体重10μL/g以灌胃的方式给予生理盐水,热应激+pBD-2组每天每只小鼠按体重0.01μg/g以灌胃的方式给予pBD-2。灌胃后将热应激组和热应激+pBD-2组放入40℃温箱热应激处理1 h,取出后与空白对照组一起放置于室温下进行饲养。按照相同的方式共处理28 d,并于第28天处理后断颈处死。每天灌胃前观察各组的行为,记录采食量并称重,试验结束后计算各组平均日采食量和平均日增重,并对小鼠进行剖检,分别取十二指肠、空肠、回肠组织进行石蜡切片制作和H.E.染色,比较各组肠绒毛高度与隐窝深度比值和单位面积内杯状细胞数目,并采用免疫组织化学技术对紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-3和Occludin进行检测与相对表达量分析。结果表明:试验期间,空白对照组无异样行为;热应激组探索行为增加,焦虑好动;热应激+pBD-2组比热应激组安静。热应激组平均日采食量显著高于热应激+pBD-2组和空白对照组(P<0.05),而热应激+pBD-2组和空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重差异不显著(P>0.05)。空白对照组肠道健康、无红肿,肠道内容物适中;热应激组肠道表面充血、红肿,肠道内容物较多;热应激+pBD-2组肠道无红肿现象,肠道内容物较少。热应激组十二指肠、空肠、回肠绒毛高度与隐窝深度比值均显著低于空白对照组和热应激+pBD-2组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。热应激+pBD-2组十二指肠和空肠单位面积内杯状细胞数量显著高于空白对照组和热应激组(P<0.05),空白对照组显著高于热应激组(P<0.05);热应激+pBD-2组回肠单位面积内杯状细胞数量显著高于热应激组(P<0.05)且与空白对照组间差异不显著(P>0.05),热应激组与空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组十二指肠、空肠和回肠中ZO-1蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠和空肠中Claudin-3蛋白的相对表达量显著高于热应激组和热应激+pBD-2组(P<0.05),热应激+pBD-2组显著高于热应激组(P<0.05);各组回肠中Claudin-3蛋白的相对表达量差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组,但热应激+pBD-2组与空白对照组、热应激组均差异不显著(P>0.05);空白对照组和热应激+pBD-2组空肠和回肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),但空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。说明热应激处理会影响小鼠的消化吸收功能和小肠形态结构,降低小鼠小肠中紧密连接蛋白的表达量,而pBD-2对热应激造成的上述影响具有较好的修复作用。

血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1在急性下呼吸道感染患儿中的表达水平及对其病情预测的研究

目的 观察急性下呼吸道感染患儿血清β-防御素-2(hBD-2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平,并分析3项指标对其病情检测的意义。方法 纳入2020年10月至2022年10月该院80例急性下呼吸道感染患儿为急性期组,另选取该院同期60例缓解期下呼吸道感染患儿为缓解期组,所有患儿入院时均接受血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1检测,对比急性期组与缓解期组患儿血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平。依据临床肺部感染评分(CPIS)将急性期组患儿分为轻症组和重症组,对比轻症组和重症组临床资料及实验室指标,分析血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平与急性下呼吸道感染患儿病情的相关性,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析3项指标对患儿病情的预测价值。结果 急性期组血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);经CPIS评分结果显示,80例急性下呼吸道感染患儿CPIS评分为(5.83±1.92)分,其中重症32例(40.00%),轻症48例(60.00%);经Pearson相关性分析,结果显示,CPIS评分与血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平呈正相关(r=0.337、0.325、0.386,P=0.002、0.003、<0.001);重症组血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平高于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析发现,血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平是急性下呼吸道感染患儿病情加重的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制ROC曲线,血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平对重症急性下呼吸道感染具有一定预测价值,曲线下面积(AUC)分别为0.728、0.769、0.786,联合检测预测价值更高(AUC=0.830)。结论 急性下呼吸道感染患儿血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平升高,3项指标水平与患儿病情严重程度密切相关,可用于预测重症急性下呼吸道感染。

血清TIM-4、HBD2表达水平与肺炎支原体肺炎儿童病情的相关性研究

目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)和难治性MPP组(n=43),另选取同期140例健康体检儿童为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TIM-4和HBD2水平;收集患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归分析发生难治性MPP的影响因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TIM-4和HBD2水平对难治性MPP的诊断价值。结果普通MPP组和难治性MPP组在发热时间、住院时间、阿奇霉素治疗时间、中性粒细胞百分比、白细胞计数、反复呼吸道感染、肺外并发症方面比较差异具有统计学意义(t/χ^(2)值介于2.195~21.265,P<0.05);与对照组相比,研究组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=34.527、40.646,P<0.001);与普通MPP组相比,难治性MPP组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=12.410、15.316,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,血清TIM-4水平(OR=1.423,95%CI:1.140~1.776)、HBD2水平(OR=1.436,95%CI:1.162~1.775)、发热时间(OR=1.349,95%CI:1.056~1.724)、中性粒细胞百分比(OR=1.334,95%CI:1.032~1.725)、反复呼吸道感染(OR=1.521,95%CI:1.245~1.858)和肺外并发症(OR=1.432,95%CI:1.152~1.780)均是发生难治性MPP的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清TIM-4水平单独诊断难治性MPP发生的曲线下面积(AUC)为0.845(95%CI:0.774~0.900),灵敏度、特异度分别为69.77%、85.86%;血清HBD2水平单独诊断难治性MPP发生的AUC为0.815(95%CI:0.742~0.875),灵敏度、特异度分别为74.42%、82.83%;二者联合诊断难治性MPP发生的AUC为0.908(95%CI:0.848~0.950),灵敏度、特异度分别为90.70%、81.82%,显著高于血清TIM-4水平单独诊断(Z=2.047,P=0.040)和血清HBD2水平单独诊断(Z=2.443,P=0.015)。结论血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原体肺炎儿童中表达升高,且二者水平对难治性肺炎支原体肺炎具有一定诊断价值。

大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总 RNA,以 P1 5′→ 3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和 P2 5′→ 3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物 ,采用 RT- PCR技术扩增得到一 c DNA片段 ,经核苷酸序列测定 ,并根据其推导的氨基酸序列与人 β-防御素 - 2和大鼠 β-防御素 - 1进行同源性比较 ,结果显示 ,该 c DNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性 (其成熟肽与 h BD- 2的同一性为 5 0 % ,相似性为 32 % ) ,均含 6个典型的半胱氨酸 ,这表明所克隆的 c DNA为大鼠 β-防御素 - 2亚类 ,因此命名为 r BD- 2。大鼠 β-防御素 - 2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强 ,与人 h BD- 2的表达相似 ,能够被诱导表达。以上结果提示 ,β-防御素 - 2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到 r BD2 - His融合蛋白基因 m RNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β-防御素 - 2 p BK- CMV- r BD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p BK-CMV- r BD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率 (n(8,p(0 .0 1)。本研究表明 β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能 ,可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。

人β-防御素-2基因表达及其抗菌活性

目的获得人β-防御素-2(humanβ-defensin-2,hBD2)基因并构建其真核表达载体,转染小鼠纤维母细胞(L929),检测其表达,观察hBD2的体外抗菌活性。方法采用逆转录(RT)-PCR方法从人宫颈癌组织获取人β-防御素-2基因,然后进行克隆扩增,重组真核表达载体pCAGG-hBD2,通过磷酸钙共沉淀法将pCAGG-hBD2导入L929细胞,并用RT-PCR法检测hBD2的表达,用Kirby-Bauer纸片扩散法检测其抗菌活性。结果RT-PCR凝胶电泳及测序分析的结果显示,所克隆的hBD2基因序列正确,并成功构建了真核表达载体pCAGG-hBD2。Kirby-Bauer纸片法显示,hBD2对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有明显的杀灭效应。结论转染pCAGG-hBD2的L929细胞能高效表达hBD2,其对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有杀灭作用。

牙周基础治疗前后慢性牙周炎患者龈沟液中β-防御素2及白细胞介素-1β表达水平的变化研究

目的:探讨慢性牙周炎患者牙周基础治疗前、后龈沟液(GCF)中β-防御素2(HBD-2)及其与白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平的关系。方法:选择慢性牙周炎患者10例为慢性牙周炎组,按纳入标准选取20位点分别在牙周基础治疗前及治疗后1个月分别收集GCF并记录临床指标。以牙周健康者12例的24位点GCF为健康对照组。GCF采集后记录采集点出血指数(BI)和探诊深度(PD)。采用酶联免疫吸附法测定GCF中HBD-2及IL-1β含量。结果:健康对照组GCF中HBD-2表达水平高于慢性牙周炎组(P<0.05);慢性牙周炎组牙周基础治疗前、后HBD-2表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。牙周基础治疗前,慢性牙周炎组IL-1β的表达水平高于健康对照组(P<0.001),慢性牙周炎组牙周基础治疗后IL-1β表达水平低于治疗前。牙周基础治疗后,BI、PD均较治疗前小(P<0.001)。与HBD-2、IL-1β表达水平无关(P>0.05)。结论:慢性牙周炎患者牙周基础治疗后GCF中IL-1β的表达水平较治疗前低,GCF中HBD-2在牙周基础治疗前、后表达水平无差异;与GCF中的HBD-2、IL-1β表达水平无关。