应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体的研究

本文建立了一种同时检测NDV、IBV、ILTV和MG 4种病原体的多重PCR技术。根据NDV、IBV、ILTV和MG的基因文库 ,设计了 4对分别与NDV、IBV、ILTV和MG某段基因序列互补的引物 ,用这 4对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV、MGRVA或DNA模板进行多重PCR扩增 ,结果均同时得到了 4条特异性大小与实验设计相符的 310bp(NDV)、172 0bp(IBV)、6 47bp(ILTV)、和 732bp(MG)多重PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重PCR技术能检出 10pg的IBV、1pg的NDVRNA模板和 10pg的ILTV、1pg的MGDNA模板。

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究

用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无任何副作用;免疫10-14 d后产生免疫力;ND部分效检,攻毒100％保护,每羽份含ND效价达50-123 PD50;IB部分效检,免疫21-28 d后攻毒保护率达80％-100％,IB HI效价≥1:64;EDS76效检,免疫后21 d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80％-100％。

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株，Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔，同时设单独培养作对照，９６小时后收取尿囊液，用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价，用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明，鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用，但无抑制现象；鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时，对鸡新城疫病毒有一定抑制作用，在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰，ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２，ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２，效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。

鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感流行毒株的保护效果

为了检验鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,将鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗免疫接种21日龄SPF鸡,免疫接种后3周采血测定AI(H9)HI抗体,并用2004年—2012年分离的8株H9亚型禽流感病毒对免疫接种鸡进行攻毒试验。结果显示,试验鸡免疫接种三联灭活苗后21d,其H9 HI抗体效价可达11.88log2,可抵抗8个不同H9亚型禽流感流行毒株的攻击,总攻毒保护率达92.50%(37/40)。鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗中H9亚型禽流感毒株具有良好的免疫原性,能抵抗不同年代不同地区分离的H9亚型禽流感流行毒株的攻击。

鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗安全性及效力试验

为评价以悬浮培养制备的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)抗原液为组份之一的鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗的安全性及效力,实验室制备3批疫苗,按照《中国兽药典》附录对疫苗进行物理性状、无菌检验、安全及效力试验。结果显示3批次疫苗物理性状、无菌检验均合格;2倍剂量注射21日龄的SPF鸡,14 d后剖检注射部位未见炎症反应,疫苗吸收良好,说明疫苗安全;疫苗免疫SPF鸡后21 d,ND和IB血凝抑制(HI)抗体,IBD中和抗体均合格,攻毒实验证明,免疫鸡10/10保护,对照鸡5/5发病或死亡。表明以悬浮培养制备的IBDV抗原液生产的三联灭活疫苗安全有效。

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显。但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果。另外,25℃、2~8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求。因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2~8℃下长期保存。

鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究

将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9～10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与5000倍稀释的IBH120病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感三联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫弱毒株Lasota株、鸡传染性支气管炎病毒弱毒株M-H120和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活苗,并对其进行了物理性状、无菌情况、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准,鸡体对该疫苗3种抗原均产生了良好的免疫应答。攻毒试验结果证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击,所制备疫苗4℃放置保存12个月后其免疫效力没有下降。

鸡新城疫-传染性支气管炎-H9亚型禽流感三联灭活疫苗的制备及检验

[目的]制备鸡新城疫-传染性支气管炎-H9亚型禽流感[ND-IB-AI（H9亚型）]三联灭活疫苗。[方法]以NDV La Sota株、IBVM41株、AIV（H9亚型）WD株为毒种,分别接种鸡胚,制备NDV、IBV及AIV（H9亚型）抗原液;采用病毒超滤系统浓缩病毒抗原液,并用甲醛溶液进行灭活;将浓缩灭活后的3种抗原液按一定比例混合（1∶1∶1）,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,乳化制成ND-IB-AI（H9亚型）三联灭活疫苗;对制备的疫苗进行无菌检验和物理性状观察。[结果]共制备了3批ND-IB-AI（H9亚型）三联灭活疫苗实验室制品,经无菌检验为阴性,外观为乳白色,剂型为油包水型（W/O型）,粘度6.36.8 s,离心和37℃放置21 d均不分层。[结论]所制备3批ND-IB-AI（H9亚型）三联灭活疫苗均无细菌污染,其物理性状均能达标。

鸡新城疫和传染性支气管炎母源抗体消长动态监测

逐日采集１—２５日龄雏鸡的血清和１—２０日胚龄鸡胚的卵黄提取液、胚体浸液，应用血凝抑制试验测定鸡新城疫和传染性支气管炎（气管炎、肾型）母源抗体消长动态。结果表明，雏鸡的鸡新城疫和传染性支气管炎的母源抗体的高峰期是随着日龄的增加而降低。鸡胚中卵黄内的新城疫抗体效价１—１５日胚龄持续在１∶６４０，１６日龄抗体水平开始下降；传染性支气管炎的抗体效价１—１２日胚龄持续在１∶８０以上，１３日胚龄抗体水平开始下降。胚体浸液的母源抗体效价随着胚龄的增加而增高。１７—２０日胚龄，鸡新城疫抗体效价达１∶３２０—２５６０；１８—２０日胚龄，传染性支气管炎抗体效价达１∶８０—１２８０。

鸡新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联油乳剂苗的研制及应用

用新城疫病毒 (克隆H88株。)、传染性支气管炎病毒 (JP株和H52 株 )和减蛋综合征病毒 (H91株 )分别接种于鸡胚和鸭胚 ,并收取其含毒鸡、鸭胚尿囊液 ,用一定浓度甲醛溶液灭活 ,按一定比例混匀 ,以 7号白油为佐剂制成鸡新城疫 (ND)_传染性支气管炎 (IB)_减蛋综合征 (EDS76)三联油乳剂灭活苗 (三联苗 )。三联苗免疫 30日龄雏鸡 ,免疫后 7天产生免疫应答 ,免疫后2 1天保护率达 10 0 %。疫苗在 4℃～ 8℃保存期为 12个月 ,10℃～ 2 5℃保存期为 6个月 ,该疫苗在全省不同地区鸡群应用 40 0余万羽份 ,取得满意效果。

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(肾型)、鸡产蛋下降综合症三联灭活苗的研制

采用NDLaSota株、IB肾型株和EDS76株接种鸡胚、鸭胚 ,收集尿囊液 ,加甲醛溶液灭活后 ,按一定比例与油相混合 ,制成油包水型油乳剂灭活苗。用 3～ 6周龄易感雏鸡进行安全性试验、免疫效力试验 ,注射部位吸收良好 ,免疫 3～ 4周后 ,ND和IB的保护率均可达到 70 %以上。鸡产蛋下降综合症的HI抗体可达到 7log2以上 。

鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(H9N2)三联灭活疫苗的安全性研究

为证实鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(新支流)三联灭活油乳疫苗的安全性,通过颈部皮下注射接种14日龄来航鸡,每日测定鸡的体重,连续监测28 d,用t检验分析对照组和免疫组体重之间的差异显著性。试验结果表明,免疫接种组和空白对照组体重差异不显著,所制备的新支流三联疫苗不影响鸡的生长性能,对鸡安全。

鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗的研究及应用

用分离、鉴定、筛选出的病毒株 ,研制成鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗。通过实验室免疫效力、安全性、免疫期、保存期和攻毒试验 ,该疫苗强毒攻击保护率为10 0 % ,免疫期 2 0 0d以上 ,保存期在 4 50d以上 ,经大范围应用 ,免疫效果良好。

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感-产蛋下降综合征四联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫LaSota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准;鸡体对该疫苗4种抗原均产生了良好的免疫应答;攻毒试验证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击;所制备疫苗于2～8℃保存12个月后,其免疫效力没有下降。

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征三联灭活疫苗最小免疫剂量的研究

采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所制备的ND-IB-EDS三联灭活疫苗,分别以0.1,0.2,0.3,0.5mL/只的剂量免疫3周龄SPF鸡,免后3周测定ND及EDSHI抗体,然后用NDV强毒北京株攻毒;另外,首免用H120活苗免疫SPF鸡,二免分别用0.1～0.5mL/只三联苗,并测定2次免疫后IBHI抗体。试验结果表明,0.1mL/只的免疫剂量就可产生较好的免疫效果,因此,确定该疫苗的最小免疫剂量为0.1mL/只。

乌鸡转移因子对鸡新城疫Ⅱ系鸡传染性支气管炎H_(120)二联活疫苗协同作用的初步观察

乌鸡转移因子对鸡新城疫Ⅱ系鸡传染性支气管炎Ｈ１２０二联活疫苗协同作用的初步观察日穆德玛赛音朝克图潘乌恩宝音葵花（内蒙古农牧学院，呼和浩特０１００１８）通过前期的研究，我们对乌鸡转移因子（ＢｌａｃｋｂｏｎｅＣｈｉｃｋｅｎ’ｓＴｒａｎｓｆｅｒＦａｃｔｏｒ...

鸡新城疫 传染性支气管炎 减蛋综合征 传染性脑脊髓炎四联灭活疫苗传染性支气管炎部分效力试验研究

采用《进口兽药质量标准》中传染性支气管炎灭活疫苗效力检验方法，对ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗IB部分进行了效力检验。先用IBH120活疫苗作基础免疫，免疫后3～4周采血，然后用四联苗加强免疫，四联苗免疫后3～4周采血，将二次血清分别作IBHI试验。结果显示，IBH120活疫苗免后3～4周，其IBHI效价为3．6～4．610g2（1：12—1：24），用四联苗加强免疫3～4周后，IBHI达6．2—8．610g2（1：74～1：388），四联苗免后的IBm抗体滴度比免前提高了4．9～26倍，均大于3倍的标准。试验证明，该方法用于四联苗内IB部分效力检验是可行的。

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡痘三联弱毒苗的免疫试验

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡痘三联弱毒苗的免疫试验韦家槐，施万球（广西农业大学）鸡新城疫、鸡传染性支气管炎，鸡痘三种疫苗过去是分别接种不同的鸡胚，制成单苗，分三次免疫鸡来预防的，因这三种苗的弱毒在鸡胚内、鸡体内有互相干扰作用，引起增殖受阻。本三联苗...

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗的生产工艺改进

调整鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗半成品生产的生产工艺，使鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒在一枚鸡胚内繁殖，收获48-96h死胚以及96h活胚的尿囊液，同时检验两种病毒的病毒含量（EID50），结果表明两病毒含量均达到了《中华人民共和国兽用生物制品规程》（2000版）的要求。应用该生产工艺可提高种蛋的利用率，降低生产成本。