鸡传染性支气管病毒ZZ2004株致SPF感染鸡小肠损伤的病理与超微病变研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株引起鸡生长缓慢的发病机理,本实验将100只7日龄SPF雏鸡平均分为两组。实验组经口服病毒进行感染,对照组口服生理盐水,通过临床检查、病理学检查及超微病变观察进行研究。病理解剖学检查表明,实验组鸡各肠段有不同程度卡他性出血性炎性变化。病理组织学显示,小肠绒毛变短,上皮细胞脱落,固有层内炎性细胞增多。扫描电镜观察表明,肠绒毛的游离端常断裂,固有层裸露,在肠上皮细胞之间有大量杯状细胞的开口,并见大块状的分泌物渗出。透射电镜检查显示,残存的肠上皮细胞的微绒毛严重破坏;粗面内质网脱颗粒,滑面内质网明显扩张,呈囊状或泡状,在内质网中出现大量病毒颗粒;核周隙扩张,在核质中能够检出成熟的病毒颗粒。本研究结果表明:IBV ZZ2004株可以在肠上皮细胞中增殖,引起肠的吸收上皮和肠绒毛的一系列退行性病变,从而导致感染鸡代谢障碍,生长缓慢。

滑液囊支原体与鸡传染性支气管炎病毒共感染对SPF鸡的致病性研究

为比较滑液囊支原体(MS)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)共感染对SPF鸡的致病性,本研究将144只28日龄SPF鸡随机均分为阴性对照组、MS感染组、IBV-M41感染组、IBV-M41+MS共感染组、IBV-QX感染组、IBV-QX+MS共感染组共6组,采用50μL/只剂量按相应分组点眼感染MS (106CCU50)、IBV(105EID50),阴性对照组以50μL/只点眼KM2培养基(左眼)和PBS (右眼)。感染后每天观察临床症状,在感染后7 d、14 d、21 d和28 d每组随机剖检6只鸡,观察气囊炎和气囊损伤评分,并采集气管进行病原再分离,其中MS经支原体液体培养基培养后进行PCR鉴定,IBV接种SPF鸡胚后进行RT-PCR鉴定。此外,各组鸡气管均经10%甲醛固定后进行粘膜厚度检测以及病理损伤评分。结果显示:除阴性对照组和MS感染组,其他组鸡在感染后4 d均出现一过性呼吸道症状。剖检结果显示MS感染组鸡在感染后21 d出现气囊炎,28 d仍可见气囊炎;而IBV-M41感染组和IBV-QX感染组鸡在感染后7 d或14 d出现气囊炎,且气囊炎的发生率均未超过50%。感染后14 d IBV-QX+MS共感染组鸡气囊炎发生率达100%(6/6),直至21 d并且大部分鸡气囊炎可持续至感染后28 d (5/6),而IBV-M41+MS共感染组鸡气囊炎仅可持续至感染后21 d,且气囊炎的发生率最高在感染后14 d (5/6)。IBV-QX+MS共感染组鸡平均气囊损伤评分在感染后14 d、21d和28 d均极显著高于单一感染组(P<0.001),而IBV-M41+MS共感染组鸡仅在感染后14 d极显著高于单一感染组(P<0.001)。病原再分离结果显示,各感染组鸡均在气管中再分离到MS(感染后28 d内)或IBV(感染后7 d内)。病理损伤检测结果显示,共感染组鸡较各单一感染组鸡气管粘膜增厚持续时间更长以及病理损伤更为严重。IBV-M41+MS共感染组鸡在感染后14 d平均气管粘膜厚度显著低于IBV-QX+MS共感染组(P<0.05),而在感染后21 d极显著低于IBV-QX+MS共感染组(P<0.001),其余各组鸡在感染后14 d和21 d均极显著低于IBV-QX+MS共感染组鸡(P<0.001)。IBV M41+MS共感染组鸡最早14 d出现气管病变,而IBV QX+MS共感染组鸡在共感染后7 d就可见气管病理损伤,且共感染组鸡的平均气管损伤评分均极显著高于单一MS或IBV感染组(P<0.01或P<0.001)。上述结果证实MS和IBV共感染较单一感染对28日龄SPF鸡的致病性更强,IBV M41或QX株与MS共感染对SPF鸡的致病性存在差异,本研究为临床IB和MS的防控提供科学参考依据。

抗鸡传染性支气管炎病毒中药的筛选

【目的】对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行抗病毒中药的筛选,并验证其治疗效果,为临床用药提供一定参考。【方法】采用鸡胚培养法,通过预防和治疗2个角度对24味单一中药、6种市售复方中药进行抗IBV的有效成分或方剂筛选试验,即在SPF鸡胚中先注射中药2 h后再接种病毒和先接种病毒2 h后再注射中药。使用SPSS 20.0软件对鸡胚重量进行方差分析,利用实时荧光定量PCR法辅助判定治疗效果。【结果】对鸡胚净重进行方差分析显示,桔梗组与阳性对照组差异显著(P<0.05),与阴性对照组差异不显著(P>0.05),表明预防和治疗均有效果。实时荧光定量PCR检测鸡胚尿囊液病毒滴度结果显示,桔梗、鱼腥草、宣肺败毒方、绞股蓝、蒲公英、甘草对IBV增殖均有抑制作用,其中桔梗抑制效果最佳。【结论】桔梗对IBV有显著的预防及抑制效果,结果为深入研究桔梗作用机理提供了依据。

鸡传染性支气管炎病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为获得鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)N蛋白的单克隆抗体,通过原核表达IBVN蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。经ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆获得3株杂交瘤细胞株,命名为1#、18#、19#,并进行了抗体亚类的鉴定、Western-blot和IFA检测。结果显示:制备的3株单克隆抗体亚型均为IgG1,Western-blot和IFA试验结果表明单克隆抗体均能与IBV发生特异性反应而与其他禽病常见病毒均无交叉反应。本研究成功制备了IBV单克隆抗体,为进一步建立IBV检测方法和深入研究IBV的生物学特性奠定了基础。

鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位DNA疫苗构建及其免疫原性研究

试验旨在设计和构建基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白和鹦鹉热衣原体(Cps)主要外膜蛋白(MOMP)的抗原多表位DNA疫苗,并分析其免疫原性。研究利用免疫信息学方法筛选出IBV S1蛋白和Cps MOMP蛋白的优势抗原表位,设计多表位基因M,并利用多种生物信息学软件对其进行预测分析;将M基因、S1和MOMP串联基因分别连接至真核表达载体pEGFP-N1并转染至DF-1细胞,利用Western blot检测目标蛋白的表达情况。将上述重组质粒肌内注射7日龄雏鸡,四免后检测免疫鸡血清中特异性抗体IgG、细胞因子及T淋巴细胞含量。结果显示:构建的表位蛋白结构稳定、免疫原性较好且无副作用;重组质粒pEGFP-M和pEGFP-S1-MOMP与预期大小相符;与pEGFP-N1组和PBS组相比,四免后,pEGFP-M免疫组鸡血清中抗IBV IgG和抗Cps IgG抗体水平极显著升高(P<0.01),与pEGFP-S1-MOMP组相当;pEGFP-M组鸡血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,T淋巴细胞抗原CD3+、CD4+和CD8+含量均极显著高于pEGFP-N1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,构建的多表位DNA疫苗pEGFP-M能够激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为研制同时预防鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位疫苗奠定基础。

GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒的病原特性分析

为了解GI-19型(QX型)鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的病原特性,筛选6株GI-19型IBV进行EID_(50)测定以及鸡胚致病力和雏鸡致病性试验,并应用高通量测序技术进行基因组测序,分析病毒基因组和主要结构蛋白编码基因生物特性。结果显示:IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株对鸡胚有致病性,导致鸡胚表现胚体蜷缩、矮小等典型病变特征,经SPF鸡胚传代至第5代,表现较为稳定的EID_(50)(10^(-5.33)/0.1 mL),但其对雏鸡无致病性;IBV/Chicken/Sichuan/C1452/2021分离株对鸡胚没有致病性,但将其接种1日龄雏鸡,可导致雏鸡出现33.33%(5/15)的发病率,引起的典型病变为雏鸡肾脏尿酸盐沉积。对6株GI-19型IBV分离株的基因组和主要结构蛋白编码基因进行系统进化分析和生物特性分析,发现IBV/Chicken/Hubei/S1402/2021分离株与其他分离株存在明显差异,且在1a和1b基因区域存在重组现象。结果表明:我国流行的部分IBV毒株对鸡胚和雏鸡的致病性存在差异;IBV毒株S1基因的变异可能会影响其致病力,而N基因的变异可能会影响其感染细胞的能力。本研究分析了部分GI-19型IBV毒株的病原学特征,为揭示IBV的致病机理和免疫机制奠定了基础,为制定鸡传染性支气管炎防控策略提供了依据。

鸡传染性支气管炎诊治要点

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种通过接触传染的病毒性疾病,出现气管内啰音、咳嗽以及打喷嚏等症状,是一种对养鸡业危害较严重的疾病。一、病原特性鸡传染性支气管炎病毒属于一种冠状病毒,具有多个血清型,易产生多个新毒株,从而使不同血清型毒株间没有或是可能仅有极少部分交互免疫的保护力。

鸡传染性支气管炎病毒遗传演化最新研究进展

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种分布范围广泛、传染性较强,能对家禽养殖业造成重大经济损害的二类动物疫病。同其他RNA病毒一样,遗传变异方面为独特的套式转录方式,在复制过程中病毒基因组的不连续性和RNA聚合酶校对不完全性,致使碱基在复制过程中易发生替换、缺失和插入,进一步造成了该病毒高突变性的特征。近年来多个研究表明,IBV产生变异株的主要原因并不是点突变,而是滥用疫苗、盲目免疫所造成的基因重组,在自然选择以及外部高强度免疫压力的双重影响下,促使IBV不断演化变异产生新的强毒株。着重论述了近年来IBV在全球各地的流行状况,深入分析了IBV遗传演化发生原因,为该病的疫苗防控提供可靠的数据支撑。

鸡传染性支气管炎病毒反向遗传技术研究进展

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)感染引起的鸡的一种急性、高度接触性传染性病。IBV基因组非常容易发生突变和重组,给该病防控带来巨大困难,因此高效疫苗和有效药物的研发非常重要。反向遗传技术是研究RNA病毒的重要技术。通过反向遗传技术可以在DNA分子水平定向改造病毒序列,对病毒的基因功能、致病机制以及新型疫苗进行研究。论文对构建IBV操作系统的策略、利用反向遗传技术研究IBV基因结构和功能、研发新型疫苗以及开发病毒载体的最新进展进行综述,为IBV及其他冠状病毒相关研究提供参考。

鸡传染性支气管炎病毒感染HD11细胞的转录组分析

旨在探究感染早期宿主细胞的天然免疫应答和抗病毒反应,本研究将鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette株感染鸡巨噬细胞HD11,2 h后提取细胞总RNA反转录成cDNA,采用Illumina进行转录组高通量测序。结果显示,感染组筛选出1363个上调基因,653个下调基因。通过对差异表达基因GO和KEGG分析发现,IBV感染HD11细胞早期,差异表达基因大多与免疫反应、抗病毒作用有关,富集到的信号通路主要集中在细胞因子和细胞因子受体之间的相互作用、病毒蛋白与细胞因子或细胞因子受体之间的相互作用、TNF信号通路、MAPK信号通路等。随机挑选10个与免疫反应、抗病毒相关基因进行RT-qPCR验证,结果与转录组测序分析一致。本研究为进一步探究IBV致病机制和感染早期宿主细胞免疫反应奠定了基础。

鸡传染性支气管炎病毒血清学和分子生物学检测技术研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)是一种致病性较强的病毒,不仅严重损害鸡的呼吸道,还会对其他器官造成影响,早发现、早治疗是防治该病出现大规模传播的重要手段。为了更好地防治该病,研究者们一直致力于建立快速准确的检测技术,特别是在血清和分子水平上。对传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)实验室检测技术的相关研究和优缺点进行了综述。在实际检测过程中,应结合具体情况,选择正确的方法,确保测试结果的准确性。

我国鸡传染性支气管炎病毒LD3/01/07的分离鉴定

将我国黑龙江省某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的濒死病鸡肾脏组织加PBS缓冲液后研磨 ,- 70℃ / 37℃反复冻融三次 ,离心并进行无菌过滤后接种 10日龄SPF鸡胚。 72小时取尿囊液进行电镜观察并用 1%胰酶处理 ,观察对鸡红细胞的凝集情况。结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒粒子 ,而且用胰酶处理过的尿囊液能够凝集SPF鸡的红细胞 ,初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒 (InfectiousBronchitisVirus ,IBV)。将该病毒尿囊液在 10日龄SPF鸡胚上连续传 8代 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态特征、病毒在鸡胚中的增殖动态以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究。结果表明 :该毒株的第一代尿囊液中病毒的滴度很高 ,可达到 8log2 ,且胚体表现轻度出血 ,但实质器官未见肉眼可见的病变 ;第二代病毒即可致胚体严重病变 ;病毒在鸡胚中随着接种病毒后时间的延长 ,其滴度逐渐增高 ;经 1%胰酶处理后的各代病毒尿囊液可凝集鸡红细胞。鸡胚的第三代病毒尿囊液 (命名为LD3/ 0 1/0 7)分别接种 1日龄和 30日龄的SPF鸡 ,发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性 ,对 1日龄接种鸡和同笼饲养的对照鸡致病力高 ,发病率和致死率均为 10 0 % ,(接种和同居感染各 4只 ,均死亡 ) ,30日龄接种和同居感?

鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与初步应用

鸡支气管炎的大规模暴发和流行将导致养殖场雏鸡死淘率增加,产蛋鸡产蛋品质下降,产蛋量不足。要想最大化降低鸡传染性支气管炎暴发,基层兽医技术人员应该加大检测效率,快速、精准地检测阳性病例,便于后续消杀与净化,最大程度减少感染源,切断传染途径。基于此,总结荧光RT-PCR检测方法的建立与应用,旨在进一步提高鸡传染性支气管炎病毒的检出时效性和精准度。

鸡传染性支气管炎的防治分析

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的一种严重的呼吸道传染病,具有高度接触性和急性的特点,传染率能够达到80%以上。当鸡感染了传染性支气管炎之后,会出现打喷嚏、咳嗽等症状,伴有卡他性炎症等现象,发病后鸡几乎停止生长,死亡率超过30%,是常见的重大疾病之一。

鸡传染性支气管炎病毒广西流行株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,应用RT-PCR方法对2004-2007年的7株广西IBV分离株的纤突蛋白S1基因、核(N)蛋白和膜(M)蛋白基因进行扩增、克隆、测序和同源性比较及系统进化分析。结果显示广西IBV分离株S1基因存在广泛的基因点突变,部分毒株出现基因插入和缺失,分离株之间氨基酸同源性为74.2%～98.7%;N基因无插入和缺失,但存在基因点突变,分离株之间氨基酸同源性为91.7%～99.3%;M基因存在点突变和插入现象,分离株之间氨基酸同源性为90.7%～98.2%。以疫苗株H120为参照,广西IBV分离株的S1、N和M基因都出现了变异,其中S1基因变异程度最大。7株广西IBV在S1、N和M基因氨基酸序列系统进化树中分别集中在2、3和3个基因群中,其中4株的S1、N和M基因分型结果不一致。结果表明广西IBV分离株的S1、N和M基因已发生变异,广西IBV存在广泛的基因突变、缺失或插入现象。研究的结果提示流行株的遗传变异可能是目前影响疫苗免疫效果的主要原因。

2008—2012年山东省鸡传染性支气管炎病毒遗传演化分析和致病性研究

本研究目的在于进一步明确山东省鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的流行病学和遗传演化规律。自2008—2012年从山东省发病鸡群中分离鉴定了20株IBV,并对其S1、N和M基因进行序列测定分析。在此基础上,选择3个代表性IBV流行株进行了致病性评价。结果显示:根据S1基因绘制的遗传进化树显示,20个IBV分离株和参考株形成4个进化分支。18个IBV分离株属于以QXIBV为代表的基因Ⅰ型,CK/CH/SD09/005和SDIB781/2012两个分离株与参考株形成独立的进化分支———基因Ⅳ型,与其它3个基因型IBV相似性仅为65.1%~67.1%。N基因和M基因序列分析结果显示,基因Ⅳ型分离株CK/CH/SD09/005和SDIB781/2012 N和M基因相似性仅为86.7%和87.9%,而SDIB781/2012 N和M基因分别与QX基因型分离株SDIB764/2012和SDIB702/2012 100%相似,表明2个基因型IBV流行株之间发生了基因重组。致病性试验结果显示,QX基因型分离株SDZB0808、SDIB821/2012和基因Ⅳ型分离株CK/CH/SD09/005对18日龄SPF鸡的致死率为60%~70%,病死鸡主要表现肾肿大和大量白色尿酸盐沉积于心、肾等器官表面,临床症状和病理变化基本一致。研究结果显示,山东省近年来IBV流行株优势基因型为QX,同时出现新型IBV流行株,2个基因型IBV均属于肾型传支。2个基因型IBV流行株之间通过基因重组不断进化,提示必须对IBV进行持续性的流行病学监测。

应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体的研究

本文建立了一种同时检测NDV、IBV、ILTV和MG 4种病原体的多重PCR技术。根据NDV、IBV、ILTV和MG的基因文库 ,设计了 4对分别与NDV、IBV、ILTV和MG某段基因序列互补的引物 ,用这 4对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV、MGRVA或DNA模板进行多重PCR扩增 ,结果均同时得到了 4条特异性大小与实验设计相符的 310bp(NDV)、172 0bp(IBV)、6 47bp(ILTV)、和 732bp(MG)多重PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重PCR技术能检出 10pg的IBV、1pg的NDVRNA模板和 10pg的ILTV、1pg的MGDNA模板。

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBVBeaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT-PCR,成功地扩增出IBVH株S1基因。扩增产物经BstYⅠ、HaeⅢ和PstⅠ酶切分析,结果表明,IBVH株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBVH株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM-T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97.27%。将IBVH株S1基因亚克隆到pPICZ-A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS-PAGE实验证实了IBVH株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测,证实了表达产物的抗原特异性。

鸡传染性支气管炎病毒研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。由于IBV基因组的RNA酶缺乏严密的校正功能,容易发生变异,使该病毒的基因型、血清型复杂,给该病的防控带来很大的困难,从而给养殖业造成了重大经济损失。从2003年起对IBV的分子生物学方面的研究也成了热点,寻找防控此病的有效措施。论文概述了近年来在IBV的基因组、结构蛋白、分子诊断及反向遗传学技术等方面的研究进展,为IBV的研究和防控提供参考。

鸡传染性支气管炎病毒基因型与血清型相关性初步研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因型与血清型之间的相关性,本研究以国内不同地区的17株IBV分离株、2株疫苗株(M41、W93)和1株强毒株(X株)为研究对象,经RT-PCR扩增获得20株IBV的S1基因并进行测序。将其分别与GenBank中的20株国内外参考IBV株的S1基因进行序列比较,绘制S1基因系统进化树。结果表明:这20株IBV与20株参考病毒株可分为3个基因型:LX4型、Mass型和X型,其中本研究中绝大多数IBV株属于LX4型。根据这一基因分型结果,从这3个基因型中分别选取差异性较大的6株IBV,即X型的X株,Mass型中的M41、W93、333-3株,LX4型中的DC07-1、333-7株,将其分别免疫SPF鸡制备高免血清,进行血清交叉中和试验,计算IBV各病毒株间抗原性的相关系数(R)。结果表明:6株IBV经血清交叉中和试验可分为3个血清型:333-3、M41、W93株为同一血清型,DC07-1、333-7株为同一血清型,X株为另外一个血清型。以上结果表明:IBV的基因分型与血清分型相一致。这为目前IBV的分型提供一定的参考依据,对今后鸡传染性支气管炎的防控具有一定的意义。