鸡传染性法氏囊炎病毒与大肠杆菌混合感染的诊治

鸡传染性法氏囊炎是一种高度接触性、急性、能引起免疫抑制的传染病。鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌引起的一种传染病,有脐炎型、肉芽肿型、气囊炎型、肝周炎型、心包炎型等。鸡传染性法氏囊炎由法氏囊病毒感染鸡并引起发病,大肠杆菌病需要选用高度敏感药物来治疗,这2种病混合感染增加了治疗难度。

鸡传染性法氏囊炎病毒的分离与提纯

取接种4周龄雏鸡的法氏囊,经匀浆,高速离心,超速离心,CsCI 密度梯度离心,可获得纯化的鸡法氏囊炎病毒(IBDV)条带。通过电子显微镜观察,说明 IBDV 呈球状,直径约60nm,无囊膜,其浮力密度为1.32g/ml。本试验所分离的病毒粒子的平均含量为957μg/ml,病毒有活力,并具有抗原的特异性。

鸡传染性法氏囊炎病毒分子生物学进展

鸡传染性法氏囊炎病毒分子生物学进展赵轶暹，黄海波，郑明（中国兽药监察所，北京１０００８１）１简介鸡传染性法氏囊炎病毒ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｕｒｓａｌＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ（ＩＢＤＶ）可引起鸡的急性传染病，感染雏鸡法氏囊组织，杀伤Ｂ淋巴细胞，其它淋巴...

“齐特”注射液对鸡传染性法氏囊炎病毒的杀灭效果及疗效试验

“齐特”注射液是一种新型的抗病毒注射液,主要用于畜禽的各种病毒性感染。本试验旨在验证不同浓度的“齐特”注射液对法氏囊炎病毒(IBDV)的杀灭效力及对鸡传染性法氏囊炎的疗效。1 试验材料1.1 试验药物“齐特”注射液,由齐鲁动物保健品厂生产,批号:970603,规格:2.5％。1.2 对照药物 病毒灵针剂,由四川广汉兽药厂生产,批号:970530,规格:10毫升:500毫克。

一株麻鸡传染性法氏囊病毒新型变异株的分离鉴定

近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行病毒鉴定,将分离毒株回归SPF鸡进行致病性试验,同时对其主要抗原基因VP2进行进化分析。结果发现,该毒株能致死鸡胚;对其VP2基因进行测序比对和进化树分析发现,其与近几年的新型变异株基因序列的进化关系较近,同源性为96.1%~99.2%;人工感染SPF鸡第7 d法氏囊即出现较为明显的萎缩,第14 d萎缩更为明显,囊体比显著小于对照组(P<0.01)。本研究分离到的麻鸡源传染性法氏囊病毒JN22株属于新型变异株,能导致SPF鸡法氏囊显著萎缩。

鸡传染性法氏囊病毒变异株的分离鉴定与致病性研究

为了分析和研究扬州地区某养殖场中鸡传染性法氏囊病毒变异株的致病性,本文选取发生鸡传染性法氏囊病的30只病鸡作为研究对象,采集病料组织,进行病毒分离鉴定和致病性研究。病鸡呈典型的临床病理症状,RT-PCR检测的琼脂糖凝胶电泳显示有一条大小为709 bp的特异性电泳条带,测序比对分析发现该鸡群中存在两种类型的变异病毒株,分别命名为IBDVYZ-1和IBDVYZ-2。琼脂扩散试验显示IBDV阳性对照毒株(BC6/85)、分离毒株IBDVYZ-1、分离毒株IBDVYZ-2三株病毒株的琼脂板样品孔均出现了明显的白色沉淀线,阴性对照却未见任何明显的沉淀线。IBDVYZ-1病毒株的ELD50为105.5/0.2 mL,IBDVYZ-2病毒株的ELD50为106.5/0.2 mL,IBDV阳性对照毒株(BC6/85)的ELD50为106.0/0.2 mL。人工接种感染SPF鸡14 d后,IBDVYZ-1病毒株的致死率为70.0%(7/10),IBDVYZ-2病毒株的致死率为100.0%(10/10),IBDV阳性对照毒株(BC6/85)的致死率为90.0%(9/10)。本研究成功分离鉴定出鸡传染性法氏囊病毒变异株,并在致病性方面展开了研究,这为今后江苏扬州地区的鸡传染性法氏囊病的科学有效防治提供参考价值。

鸡传染性法氏囊病毒接种鸡胚成纤维细胞工艺优化

鸡传染性法氏囊病是一种急性、高度接触性传染病,主要侵害幼龄鸡。传染性法氏囊病灭活疫苗通常采用强毒接种鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒的培养。本试验采用细胞培养转瓶培养CEF方法接种病毒对转瓶内细胞接种密度、种毒接种量及收获病毒时间进行了优化,筛选出传染性法氏囊病毒培养的最佳工艺参数(转瓶),为扩大生产稳定的鸡传染性法氏囊病灭活疫苗奠定了基础。

甘草酸二钾体外抗鸡传染性法氏囊炎病毒的作用机制

利用鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养系统,通过观察细胞病变(CPE)和用MTT法测定细胞活力这两种方法来评价甘草酸二钾体外抑制鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)对CEF的感染作用,并通过甘草酸二钾对病毒复制、吸附的阻断作用测定试验及直接灭活病毒测定试验,初步探讨了甘草酸二钾的抗病毒机制。结果显示,甘草酸二钾在安全浓度范围内对病毒感染细胞的抑制率达到70%以上,EC50为663.2±268.4μg/mL,SI>4.52;在阻断病毒复制、直接灭活病毒的试验中,甘草酸二钾显示了较强的抗病毒能力,但在阻断病毒吸附试验中却没有作用,推测其抗病毒机制可能是干扰了病毒的复制和直接使病毒灭活。提示,甘草酸二钾能够作为预防及治疗传染性法氏囊炎的药物或先导化合物。

MDV-1 VP22增强鸡传染性法氏囊炎病毒VP2DNA免疫作用

马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)被膜成分中的VP22具有蛋白转导功能.将鸡传染性法氏囊炎病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2与MDV-VP22同时插入pcDNA3.1构建融合蛋白表达载体,在COS-1细胞中进行暂态表达.结果表明:VP22并不能促进VP2向周围未转染细胞转导,即VP22对VP2没有明显的蛋白转导作用,相反,VP2影响VP22在细胞内的正常定位.然而,通过小鼠股四头肌免疫注射PEI包裹的裸质粒DNA进行DNA免疫,以间接ELISA测定VP2抗体效价,FACS检测T细胞亚类.发现,虽然VP22没有明显促进VP2的体液免疫应答,但脾脏淋巴细胞分群结果表明,VP22-VP2融合蛋白表达载体免疫组和VP2质粒免疫组的CD3+T细胞数量显著高于eGFP-VP2组和对照组(P<0.05),融合蛋白表达载体免疫组小鼠CD8+/CD4+T细胞的比例与VP2质粒免疫组相比,明显增强(P<0.05),与对照组相比差异极显著(P<0.01).这表明VP22对VP2的特异性细胞免疫反应具有一定增强作用.

重组质粒载体介导的miRNA对鸡传染性法氏囊炎病毒复制的抑制作用

为探索vp2特异miRNA在鸡传染性法氏囊炎病毒（IBDV）复制中的作用,采用RT-PCR法扩增IBDV结构蛋白基因vp2,构建pVP2-GFP;据序列测定结果用Genscript软件设计5条vp2特异miRNA,分别插入pRFPRNAiC中构建miVP2表达载体;将这些载体与pVP2-GFP共转染鸡胚成纤维细胞,通过荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效miRNA的筛选;有效miVP2转染DF-1细胞,之后感染IBDV,半定量RT-PCR法检测特异性miVP2的表达,TCID50测定miRNA对IBDV的抑制效率。结果显示,成功表达的miVP2对VP2的抑制效率为59.7%~78.5%;miVP2A和miVP2E对病毒的抑制效率为76%~82%,抑制时间至少达120h。表明,筛选获得了能抑制IBDV复制的miVP2A和miVP2E。

鸡传染性法氏囊病的分析诊断和防控

传染性法氏囊病是一种急性、高度接触性、发病率高的病毒性传染病,这种疾病不仅导致鸡的生产性能下降,还可引发免疫抑制和缺陷,加大了鸡的淘汰率,给养殖场(户)带来较大的经济损失,危害性极强。因此,对疾病进行鉴别与诊断,做好疫病的防控工作。1鸡传染性法氏囊病的分析1.1法氏囊病毒的基本特征法氏囊病毒是一种引起鸡法氏囊病变的病原体,因其具有强烈的传染性也被叫做传染性法氏囊病毒。

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP 2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒(HVT)活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。

一株鸡传染性法氏囊病毒变异株的鉴定与致病性

近日,在福建省南平市某鸡场发现一株新的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)流行株,并将其命名为IBDV-FJ02.为了明晰IBDV-FJ02株遗传变异情况和临床致病特征,进行了A节段基因组序列和特征性氨基酸位点的分析、基于A节段和B节段的新型基因型分类以及对无特定病原体(SPF)鸡致病性的研究,旨在为鸡传染性法氏囊病的防治提供依据.结果显示:IBDV-FJ02株A节段核苷酸序列与早期变异株E的同源性最高,达95.6%,与中国变异株SHG558在同一分支上;IBDV-FJ02株VP2-4-3蛋白氨基酸序列第222位氨基酸为T,第249位为K,第318位为D,参考变异株中仅GLS、E与其一致,位点N^(213)、T^(222)、K^(249)、 D^(318)、E^(323)均符合变异株的特征.根据新型基因型分类方案,显示IBDV-FJ02株属于A2dB1基因型,即IBDV新型变异株类群.致病性测定结果显示:IBDV-FJ02株感染3周龄SPF鸡并不会导致感染鸡只死亡,在感染后21 d内,主要引起鸡只法氏囊的严重萎缩和脾脏的轻微肿大.上述结果表明,IBDV-FJ02株是一种IBDV新型变异株,具有明显的IBDV变异株致病特点.

鸡传染性法氏囊炎的流行特点及诊治

鸡传染性法氏囊炎是由传染性法氏囊炎病毒感染所引起,该病主要症状表现为鸡自啄肛门、腹泻、饮水增加,还容易继发感染其他疾病,增加鸡群死亡率,为养殖户带来重大经济损失。目前,传染性法氏囊炎以预防为主,治疗为辅,对其流行特点以及诊治方法进行分析,以期能够更好地防治该病。

十一株鸡传染性法氏囊炎病毒VP2全基因序列的特征分析

为了研究不同地区传染性法氏囊炎病毒(IBDV)毒株的流行特点及遗传变异规律,应用RT-PCR方法对11株IBDV分离株的VP2全基因进行了扩增、克隆,测序后与参考毒株进行核苷酸及其推导氨基酸序列的同源性比对,并绘制遗传进化树。结果表明,其中的9个分离株与国内外IBDV超强毒的核苷酸与氨基酸序列的同源性比较高,并且与超强毒株VP2高变区内的特征性氨基酸相符合,据此可推测近三年流行的毒株以超强毒株为主;分离株CK/SD/GM0911第299位的超强毒株特征性氨基酸由S变为N;分离株CK/SD/LY0810与中等毒力疫苗株2512同属于进化树中的一个分支,并具有相同的特征性氨基酸,两者的核苷酸序列同源性为99.5%,推测CK/SD/LY0810株为中等强毒力毒株。

放养鸡感染传染性法氏囊病病毒继发细菌感染而致关节炎的诊断

2017年12月,桂林某养殖公司放养的广西龙胜凤鸡连续多批次出现单侧或者双侧跛行、站立不稳、食欲减退、羽毛蓬乱等症状,共造成鸡群20%的发病率和1%~2%的死亡率。剖检发现病变主要发生在鸡跗关节以下,从跗关节沿肌腱向下剪开,可见淡黄色清亮液体流出,法氏囊萎缩。无菌取鸡的病变关节处液体及其组织分别进行细菌和支原体的分离培养,并用其法氏囊组织研磨液进行传染性法氏囊病病毒的RT-PCR检测。结果分离到大肠杆菌和葡萄球菌,支原体分离检测呈阴性,传染性法氏囊病病毒检测呈阳性。根据鸡群发病情况、临床症状、剖检病变和实验室病原检测结果确诊该鸡群为传染性法氏囊病病毒感染后引起机体免疫抑制而继发的细菌性关节炎。

鸡白细胞介素2增强传染性法氏囊病病毒多聚蛋白DNA疫苗免疫原性的研究

鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d后二免 ,二免后 3d攻击标准强毒株。结果表明共注射鸡IL 2质粒能明显增强DNA疫苗对强毒攻击 ,保护率达 80 % ;能增强DNA疫苗诱导的中和抗体效价 (P <0 0 5 ) ;能显著促进鸡胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应 (P <0 0 5 )。这些结果提示鸡IL 2能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫原性 ,是一种优良的禽类DNA疫苗佐剂。

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株GX8/99株的致病性

鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)超强毒株GX8/ 99,系 1999年从广西一自然发病鸡群采集到。用原始病鸡法氏囊悬液连续 3次人工感染SPF鸡后 ,再取其法氏囊制备悬液 ,分装 ,在 - 70℃保存。以此悬液经卵黄囊接种 10日龄SPF鸡胚 ,测定鸡胚的半数致死量 (ELD50 )。随着鸡的日龄和接种剂量的不同 ,其致死率有很大差异。对 2 8～ 30日龄SPF鸡 ,病毒接种量为 2 0 0个ELD50 时 ,感染后 7日内死亡率最高可达 73%～ 90 5 % (11/ 15和 19/ 2 1) ;感染量为 2 0个ELD50 时 ,死亡率亦可达 5 3%～ 92 % (8/ 15和 2 3/ 2 5 )。以 5 0 0个ELD50 感染 2 8～ 10 4日龄的SPF鸡 ,死亡率均在 5 5 1%～ 6 7 2 % ;甚至 113～ 12 0日龄的SPF鸡 ,感染后仍有 10 %～ 15 %致死率。但 12 8日龄的SPF鸡感染后既不引起死亡也不表现任何症状 ,但抗体全部转阳。人工接种发病死亡的鸡 ,其法氏囊的出血程度也随感染量和年龄而异。 5 0日龄鸡接种 2 0 0 0个ELD50 后 ,死亡的鸡 10 0 % (12 / 12 )法氏囊严重出血 ;而 4 0日龄鸡感染 2 0 0个ELD50 后 ,死亡鸡中仅 17% (3/ 18)发生出血。在 2、3、4周龄带有母源抗体的商品代蛋鸡 ,以 2 0 0 0个ELD50 病毒接种后 ,只引起 10 % (2 / 2 0 )、35 % (7/ 2 0 )和 35 % (7/ 2 0 )的死亡率。但在

中药粗提物对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染细胞能力的影响

将黄芪、连翘等八味中药的粗提物与鸡传染性法氏囊病病毒以三种顺序 (先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入 )加入至培养 2 4 h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)上 ,观察其对病毒感染细胞能力的影响。结果表明 ,在细胞安全浓度范围内 ,仅黄芪粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时抑制 IB-DV病毒感染 。

鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究

将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性.重组ZJ111/pCI-IL-2菌能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P<0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础.