鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HQ0806的分离与鉴定

为分离、鉴定鸡传染性法氏囊病病毒,通过对辽宁阜新近郊某鸡场数群15日龄左右的病鸡的临床症状、病理变化、病毒分离、纯化、动物回归、血清学检测、病毒形态观察等检测。结果显示:被检病毒效价达到10-5.8/0.2mL,在动物回归试验中其引起发病率达100%,死亡率为83%,剖检可见法氏囊呈"紫葡萄样"外观,胸腺萎缩,骨髓脂肪化等病变,表现了超强毒株的致病特点。

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒洛阳分离株VPP2基因的原核表达及鉴定

根据GenBank公布的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vv IBDV)洛阳分离株LY1的VP2基因并进行克隆,构建重组质粒p MD18-T-VP2,然后连接至原核表达载体p ET32a,将阳性质粒转化至感受态细胞Rosetta中进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示VP2基因在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达,蛋白大小约66 ku,且主要存在于细胞上清中,Western blot试验证实表达的VP2蛋白具有较好的反应原性。研究结果可为IBDV的诊断抗原及基因工程疫苗研究奠定基础。

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株GX8/99株的致病性

鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)超强毒株GX8/ 99,系 1999年从广西一自然发病鸡群采集到。用原始病鸡法氏囊悬液连续 3次人工感染SPF鸡后 ,再取其法氏囊制备悬液 ,分装 ,在 - 70℃保存。以此悬液经卵黄囊接种 10日龄SPF鸡胚 ,测定鸡胚的半数致死量 (ELD50 )。随着鸡的日龄和接种剂量的不同 ,其致死率有很大差异。对 2 8～ 30日龄SPF鸡 ,病毒接种量为 2 0 0个ELD50 时 ,感染后 7日内死亡率最高可达 73%～ 90 5 % (11/ 15和 19/ 2 1) ;感染量为 2 0个ELD50 时 ,死亡率亦可达 5 3%～ 92 % (8/ 15和 2 3/ 2 5 )。以 5 0 0个ELD50 感染 2 8～ 10 4日龄的SPF鸡 ,死亡率均在 5 5 1%～ 6 7 2 % ;甚至 113～ 12 0日龄的SPF鸡 ,感染后仍有 10 %～ 15 %致死率。但 12 8日龄的SPF鸡感染后既不引起死亡也不表现任何症状 ,但抗体全部转阳。人工接种发病死亡的鸡 ,其法氏囊的出血程度也随感染量和年龄而异。 5 0日龄鸡接种 2 0 0 0个ELD50 后 ,死亡的鸡 10 0 % (12 / 12 )法氏囊严重出血 ;而 4 0日龄鸡感染 2 0 0个ELD50 后 ,死亡鸡中仅 17% (3/ 18)发生出血。在 2、3、4周龄带有母源抗体的商品代蛋鸡 ,以 2 0 0 0个ELD50 病毒接种后 ,只引起 10 % (2 / 2 0 )、35 % (7/ 2 0 )和 35 % (7/ 2 0 )的死亡率。但在

2株鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离鉴定

用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)超强毒株 (vv IBDV) He B- lf和 He B- bd接种 SPF鸡 ,36 h后接种鸡开始发病 ,发病率为 10 0 %,死亡率为 5 0 %以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化 ,如肌肉、心脏、腺胃出血 ,法氏囊水肿或呈“紫葡萄”样外观。经血清学试验、毒力试验、鸡胚接种试验、分子生物学和电镜形态学观察均证明该两分离物为超强毒株 ,从而证明河北省鸡群中存在不同于经典 IBDV的超强毒株。

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HLJ-0504 VP5基因缺失株感染性克隆的构建及鉴定

利用体外定点突变技术,缺失vvIBDV HLJ-0504株VP5基因,通过多重PCR在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGGs的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGGHLJ0504A△ VP5HRT,将该感染性克隆与pCAGGHLJ0504BHRT共转染DF-I细胞。IFA,RT-PCR,电镜观察均显示获得重组病毒,将其命名为rHLJ0504HT△VP5。vvIBDV VP5基因缺失感染性克隆的成功构建为我们利用反向遗传操作技术快速致弱vvIBDV,构建IBD的候选疫苗株奠定了基础。

幼鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2基因的克隆和分析

利用反转录 聚合酶链反应(RT PCR),扩增并克隆传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV)SH9901VP2基因,并对其进行全序列测定 结果表明,克隆到的VP2基因序列长1 3kb;强毒株SH9901VP2片段与超强毒株OKMY高度相似;核苷酸与氨基酸同源性分别为99 26%,99 8%.

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒 (IBDV)超强毒 L X株感染 SPF鸡免疫器官中 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒 L X株接种 2周龄 SPF雏鸡 ,在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出 IBDV抗原的存在和 CD4 + 与 CD8+ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中 ,CD4 + T淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质 ,而 CD8+ T淋巴细胞则存在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙 ,并且 CD8+ T淋巴细胞数量明显多于 CD4 + T淋巴细胞 ,在接种后 14 d仍未见 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞数量减少。脾脏中 CD4 + T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在 ,而 CD8+ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中 CD4 +和CD8+ T淋巴细胞在皮质中减少 ,但在髓质增多 ,尤其是 CD8+ T淋巴细胞数明显多于 CD4 + T淋巴细胞。盲肠扁桃体中 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞主要存在于生发中心 ,尤其是 CD8+ T淋巴细胞数比 CD4 + T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见 CD4 +和 CD8+ T淋巴细胞 ,而且 CD8+ T淋细胞更多。在这些淋巴器官中 ,病毒损伤部位出现 CD4 +和 CD8+ T淋巴细胞的迁入聚集 ,表明 T淋巴细胞可能参与 IBDV超强毒的免疫致病过程。

鸡传染性法氏囊病病毒超强株VP2基因重组新城疫病毒胚胎免疫安全性及效力试验

为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指标,按不同剂量接种18胚龄SPF鸡胚,分别于出雏后第9d、第14d和第21d采血,用微量凝集法和ELISA方法测定血清中抗NDV抗体和抗IBDV抗体水平,并于出雏后28d用NDV强毒(F48E9株)和vvIBDVGx株攻毒,评估重组疫苗的胚胎免疫效果。结果显示:按104EID50/枚剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和出雏后21d存活率,并且该免疫组雏鸡能够对NDV强毒和vvIBDV攻毒提供安全的免疫保护。

传染性法氏囊病病毒超强毒株HB-bp人工感染雏鸡的病理学观察

5周龄非免疫健康鸡人工感染传染性法氏囊病病毒超强毒株河北分离株HB-bp,3d后出现明显的临床症状,3～4d内死亡率达80%。法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体、胸腺及腺胃有病理组织学变化,各个免疫器官和组织中均含有病毒,法氏囊内病毒含量最高,其次是脾脏。而对照组未见任何异常变化。

鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察

IBDV超强毒株LX株接种 2周龄SPF雏鸡后 ,其致病性不同于经典强毒株CJ80 1株 ,它主要引起接种鸡全身性炎症反应 ,法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官中大量异嗜性白细胞、巨噬细胞浸润 ,淋巴细胞严重坏死崩解 ,胸腺皮质严重萎缩、坏死 ,骨髓中造血细胞减少、巨噬细胞和脂肪细胞增生。在接种后 14d法氏囊淋巴滤泡严重萎缩、淋巴细胞排空形成囊腺样结构 ,未见恢复正常 ,其它免疫器官形态基本恢复正常。电镜观察 ,接种后 2和4d可见胸腺淋巴细胞胞浆浓集、染色质周边化形成新月形 ,表现细胞凋亡特征 ;在法氏囊坏死淋巴细胞胞浆中可见6 0nm大小呈晶格排列或散在的病毒粒子。研究初步探明了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒的致病机理。

传染性法氏囊病病毒超强毒株HLJ-0504全基因组克隆及其新特征分析

为了解传染性法氏囊病病毒(IBDV)HLJ-0504株的分子生物学特征,本研究利用融合PCR技术获得HLJ-0504株全基因组序列。核苷酸和推导氨基酸序列遗传演化分析发现,HLJ-0504A节段位于IBDV超强毒的分枝上,而B节段则介于超强毒株和减毒株之间,形成一个独立分枝,属于一株新的自然重组病毒。VP2抗原性预测分析表明,HLJ-0504株VP2第Ⅰ亲水区中的氨基酸发生突变(D212N),该突变可能导致了HLJ-0504株抗原性发生漂变。本实验结果为深入研究IBDV的分子特征奠定了基础。

传染性法氏囊病病毒超强毒株F9811VP_2基因的克隆及序列分析

根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .5kb的基因片段 ,采用平端连接法将此基因片段克隆至p UC1 1 9质粒的 Sma 位点上。经核苷酸序列测定 ,并与国内外其他 vv IBDV VP2 基因序列进行比较分析 ,发现 F981 1与 OKYM在 VP2 基因上有 1 8个核苷酸不同 ,但在氨基酸序列上仅 2 1 2位存在差异 ,从而从分子生物学角度证明 F981 1为 vv IBDV。对 1 4 3～ 3 82氨基酸区域所作系统进化树分析表明 ,F981 1、G92 0 1与OKYM、UK661、HK4 6相近 ,而 F950 2、G93 0 3与 OKYM、U K661、HK4 6较远 ,说明我国存在许多不同的vv

传染性法氏囊病病毒上海超强毒株VP2-4-3基因真核表达质粒的构建与表达

应用Long and Accurate—PCR(LA-PCR)技术,扩增克隆了鸡传染性法氏囊病病毒上海超强毒(wIB-DV)的VP2—4—3基因。应用粘性末端连接策略,将VP2-4-3基因克隆人真核表达载体pALTER-MAX。经酶切鉴定,表明VP2-4-3基因为正向插入,位于CMV启动子下游。该真核表达质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,经特异性抗IBDV抗体的免疫荧光检测,发现在细胞内有特异蛋白表达。

传染性法氏囊病病毒超强毒株河北分离株HB-bp的生物学特性

将分离毒HB -bp与STC(Ⅰ型)、CJ801(Ⅰ型)标准毒株比较 ,分析了其病原性、形态结构、理化特性、血凝活性、血清型、抗原特异性及结构蛋白分析。结果表明 ,HB -bp的病毒基因组有两个特征性片段 ,电泳后呈现两个条带 ,在SDS -PAGE中出现5条病毒特异蛋白带 ,在形态学、密度、理化特性、血凝性上与标准IBD毒株相似 ,具有较好的抗原性。血清中和试验测定该毒株为血清Ⅰ型毒株 ,鸡胚接种传代培养可引起鸡胚规律性死亡 ,致病力试验具有超强毒株的高致病性和高死亡率的特征 ,表明本分离株为超强毒株。

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白研究进展

鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的一种急性、高度接触性传染病，主要危害3～6周龄的雏鸡。该病于1957年首次发现于美国Gumboro地区。50年来，IBD一直威胁着养禽业的发展。免疫抑制、抗原变异，特别是超强毒株（vvIBDV）的出现，使得该病的防控形势更加严峻。国际兽疫局（OIE）已将IBD列为“影响社会经济的重要疾病”。

鸡传染性法氏囊病病毒BJQ902株在DF-1细胞系上增殖工艺研究

试验旨在通过DF-1细胞增殖获得高效价的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）抗原。通过病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度5个培养条件的筛选和优化,对IBDV BJQ902株在DF-1细胞上的增殖工艺进行了研究。结果表明,IBDV BJQ902株在DF-1细胞上最佳增殖条件为：在37℃条件下培养,接毒量在0.01%～0.1%之间,接种时间为细胞传代后生长48～72h,维持液血清浓度为1%～2%,收毒时间为病毒接种后60～72h。在此培养条件下增殖病毒毒价在108.3～108.7 TCID50/0.1mL之间。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒强毒株的培育

用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株 IBV-D971株接种 1日龄 SPF鸡 ,连续传 1 0代后 ,培育出了腺胃病变型鸡传染性支气管炎强毒株 IBV-D971 J株。 IBV-D971 J1 0 对 SPF鸡胚的致病力为 1 0 - 6 .45ELD5 0 /0 .2 m L,对 1日龄 SPF鸡的致病力为 1 0 - 1 .5 LD5 0 /1 m L。从死亡鸡的心、肝、脾、肺、肾、腺胃、肌胃、法氏囊等均能分离到 IBV,IBV-D971 J1 0 不含鸡新城疫、禽流感、鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊炎、网状内皮组织增殖病等外源病毒。对 SPF鸡可引起典型的腺胃炎、肌胃炎。

反向遗传学技术在鸡传染性法氏囊病病毒研究中的应用进展

反向遗传学技术是研究鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的一种新手段,从"基因-性状"层面对基因突变、节段重排等生物学特性的改变进行解读,可突破常规的对IBDV从"性状-基因"进行研究的局限性。本文主要对IBDV反向遗传操作系统的建立及其在IBDV细胞嗜性、毒力分子基础、致病机制及致弱机理等重要生物特性中的应用进行综述。