抗鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其应用研究

为制备针对鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)的单克隆抗体,以CIAV的VP2原核表达蛋白作为抗原免疫小鼠,经杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗VP2蛋白特异性抗体的细胞株,进一步经IFA筛选出特异性和灵敏度俱佳的杂交瘤细胞Mab-VP2-4株,制备的小鼠腹水效价达到1∶2000。结果显示,制备的抗VP2蛋白单克隆抗体可与多株CIAV感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应,而对EDSV、ALV、ILTV、ARV以及空白MDCC-MSB1细胞、CEF细胞等均无交叉反应,特异性良好,且应用于IFA方法时对CIAV感染的最低检出限为5 TCID 50。以该单克隆抗体对市场上10种不同来源的禽活疫苗进行病毒分离结合单克隆抗体IFA检测,同时与《中国兽药典》规定的鸡检查法进行对比检测,结果一致,均未检出CIAV污染。本研究制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性单克隆抗体,为该病特异性诊断方法的建立奠定了基础。

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21 d。感染后14 d采血测定红细胞压积,21 d统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14 d,均能引起红细胞压积显著下降;21 d时,胸腺病毒载量最高,可达10^(6.7) copies/mg。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量(100000EID_(50))出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。

鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析

为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群病原阳性鸡分离到的分离株进行VP1基因序列分析。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)和68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)和62.3%(48/77),其中,B群和S群中抗体和病原双阴性的鸡分别为23.7%(27/114)和15.6%(12/77),而抗体和病原双阳性的鸡分别高达28.1%(32/114)和46.8%(36/77);在双阳性鸡中,B群和S群分别有62.5%(20/32)和58.3%(21/36)抗体滴度在1.0×10^(4)及以上,从B群病原阳性鸡全血中分离到一株CAV(HLJ/2022株),分离株HLJ/2022第394位氨基酸为谷氨酰胺,具有强毒的分子特征;两个鸡群的环境拭子CAV阳性率为10.0%(3/30),存在于消毒前的鸡蛋表面、更衣处和鞋底。研究表明,检测鸡群的CAV抗体阳性率在62.7%以上,病原阳性率在43.0%以上,抗体滴度在1.0×104及以上CAV仍可存在,CAV流行株(HLJ/2022)具有强毒分子特征,鸡群环境中存在CAV污染,结果为CIA防控提供重要的参考意见。

一株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及致病性分析

为鉴定来自山东某种鸡场196日龄疑似鸡传染性贫血病毒(CAV)感染的2份种鸡肝脏样品的致病原,本实验利用马立克病肿瘤淋巴母细胞(MDCC-MSB1细胞)对2份肝脏样品进行病毒的分离培养与传代,每代均观察细胞是否出现细胞病变(CPE)。将传至5代的病毒液分别采用PCR和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,PCR结果显示,扩增到与CAV JL17株阳性对照一致的约600 bp的目的条带;IFA结果显示,感染分离病毒与JL17株阳性对照的细胞均出现绿色荧光,而阴性对照既未扩增到目的条带也无绿色荧光。上述结果表明分离到一株CAV,命名为SDNN2022。为分析SDNN2022株的分子特征,采用PCR扩增其VP1基因并测序,采用DNAStar软件对SDNN2022株VP1基因与GenBank登录的39株CAV参考株VP1基因序列进行同源性分析;采用Megalign分析SDNN2022株VP1的氨基酸序列,构建SDNN2022株VP1基因的进化树。VP1基因的同源性结果显示,SDNN2022株与CAV参考株的VP1基因序列的同源性为95.0%~99.8%,其中与CAV参考株JS2020-PFV的同源性最高;SDNN2022株VP1高变区的氨基酸位点(aa139~aa151)与大多数强毒株一致。但在aa89、aa92、aa411和aa417与大多数CAV参考株不同,均发生了氨基酸突变,分别为T^(89)K、G^(92)D、S^(411)T和V^(417)I,其中后两个位点的突变为本研究首次发现。SDNN2022株与CAV强毒参考株CUX-1的aa394均为谷氨酰胺,符合CAV强毒的分子特征,表明SDNN2022株为一株CAV强毒株。VP1基因的进化树结果显示,分离株SDNN2022与CAV参考株CUX-1、JS2020-PFV、CAV-JL190130等聚为一支,且与JS2020-PFV株的遗传距离最近,均属于A群,进一步表明SDNN2022株为一株强毒株。将该株病毒分别感染6胚龄SPF鸡胚和14日龄SPF雏鸡进行致病性试验,结果显示,SDNN2022株对鸡胚的致死率为30%(3/10),病死鸡胚体的肝脏黄化;该株病毒感染14日龄SPF雏鸡后7 d出现精神萎靡、呆滞、羽毛凌乱等临床症状,发病率为83.3%(5/6),但无死亡;感染后14 d,与空白对照组鸡相比,感染组鸡体重显著降低(P<0.05),胸腺明显萎缩,且胸腺指数极显著降低(P<0.01)。本研究分离到一株强毒力CAV,且对SPF鸡胚和雏鸡均具有较强的致病性,丰富了国内CAV的病毒资料,为深入研究CAV的致病机制提供了数据支持。

表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。

海南省文昌鸡传染性贫血的血清学调查

为掌握海南省文昌鸡传染性贫血(CIAV)的流行情况,分别从海南省4个文昌鸡主要养殖地区海口、文昌、琼海和儋州的14个不同规模未免疫CIA疫苗的文昌鸡场采集血液样品1709份,采用ELISA检测CIAV抗体。结果显示,1709份血液样品共检出阳性样品564份,文昌鸡的CIAV抗体总阳性率为33%;4个地区的文昌鸡场均有不同程度的CIAV感染,其中儋州市文昌鸡的CIAV抗体阳性率最高,达到55%;成年文昌鸡的CIAV感染程度高于其他生长阶段鸡,抗体阳性率达到53.63%;CIAV在一年四季均有发生,以冬季高发,抗体阳性率为48.06%;不同规模文昌鸡场CIAV的感染率存在差异,以中小规模文昌鸡场的CIAV感染程度较高,抗体阳性率分别为41.48%和40.10%;在不同类型的文昌鸡群中商品代蛋鸡的CIAV抗体阳性率最高,达到62.62%。结果表明,CIAV在海南省文昌鸡养殖地区普遍存在,且在冬季、成年文昌鸡中高发,以商品代蛋鸡感染最为严重,因此,应针对性地加强对海南省文昌鸡传染性贫血的防控。

鸡传染性贫血病的危害及防控措施

鸡传染性贫血病(Infectious Anemia of Chickens,简称IA)是一种严重威胁家禽养殖业的传染病。该病以其高度传染性和致命性而闻名,给鸡的健康和生产力造成了巨大的危害。患病的鸡表现出明显的贫血症状,包括脸色苍白、食欲减退、发育迟缓等。

鸡传染性贫血病的防控措施

鸡传染性贫血病是一种病毒性、传染性疾病,致病原是鸡传染性贫血病病毒,主要症状是再生障碍性贫血,全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血,鸡肉髯、皮肤及可视黏膜苍白。该病有较强的免疫抑制作用,容易混合感染其他疾病,导致鸡死亡。目前,鸡传染性贫血病尚无有效的治疗药物,以防控为主,治疗则重点以补气血、提升免疫力为主;防控方面,需要加强免疫接种、做好卫生清洁工作等,从而降低该疾病的发病率,提升养殖经济效益。

一例蛋鸡传染性贫血与法氏囊病混合感染的诊治报告

鸡传染性贫血病(CAV)是由鸡传染性贫血病毒引起的一种鸡免疫抑制病,病鸡表现为贫血、鸡肉髯、面部皮肤及可视黏膜颜色苍白,鸡胸、腿部肌肉出血。该病具有较强的免疫抑制作用,可导致疫苗免疫失败,患有传染性贫血的鸡群很容易混合感染法氏囊病,降低鸡群的生产性能。临夏县某蛋鸡养殖场,饲养罗曼褐蛋鸡1500羽,3周龄时先出现鸡传染性贫血病例,后又继发感染鸡法氏囊病。通过诊断分析,结合各种治疗与防控措施,有效控制了病情蔓延,病鸡恢复健康。现将诊治过程报告如下。

鸡传染性贫血病的诊断与防控

鸡传染性贫血病是鸡养殖业中多发的一类传染性疾病,其传染性强、发病率高,尤其对雏鸡危害性严重,可通过种蛋垂直传播,发病后严重影响鸡的生长发育和生产性能。本病尚无特效治疗药物,加强对本病的诊断,及时淘汰病鸡,净化鸡群,同时采取有效的防控手段,是降低本病危害性的关键。本文对鸡传染性贫血病的病原、流行特点、临床特征以及诊断措施进行了简单阐述,并提出了几点防控措施,以供从业者参考。

鸡传染性贫血病的诊断方法与防控

鸡传染性贫血病是以家禽发生再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎缩为主要临床特征的典型禽类免疫抑制疾病,发病具有普遍性、隐匿性及广泛性等特点,既可垂直传播,又可水平传播,由于该病严重损伤免疫系统,导致临床可见其与多种禽类疾病发生混合感染,从而加剧病鸡死亡率,严重损害养鸡业的经济效益。由于目前国内尚未有商品化的鸡传染性贫血病疫苗,因此主要通过掌握该病的流行病学特点、发病特点、剖检特征、诊断方法等,以疫苗接种、净化种群等为主要防控措施,做到早期预防,从而快速有效控制疫情蔓延,降低该病造成的经济损失。

白羽肉鸡圆圈病毒3型与鸡传染性贫血病毒混合感染的诊断

2011年以前,圆圈病毒属(GyVs)仅有一个成员(鸡传染性贫血病毒),2011年以后研究人员不断检测出10种类似于鸡传染性贫血病毒基因结构的病毒。2016年以来国际病毒分类委员会将该病毒属重新分类,把圆圈病毒属从圆环病毒科划分到指环病毒科。

我国部分地区祖代鸡群鸡传染性贫血的血清学调查与分析

为了解祖代鸡群中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的感染情况,研究采集18个省(市)未免疫CIAV疫苗的44个祖代种鸡场4847份血清样品,采用ELISA方法对CIAV抗体进行检测,通过比较群间、空间、阳性场的抗体滴度,解析祖代鸡群CIAV感染状况。结果显示:祖代鸡群中CIAV感染较普遍,场阳性率为97.7%,个体阳性率为66.0%;不同生产用途、来源的种鸡群均有感染,且分布范围广泛;43个抗体阳性场中,有1个种鸡场抗体滴度高且变异系数小,42个种鸡场抗体滴度低或抗体滴度较高但离散程度大,有发生垂直传播的风险。结果表明,我国祖代鸡群中CIAV抗体阳性率较高,存在向父母代场垂直传播CIAV的风险。

湖北荆州地区鸡传染性贫血病病毒的流行病学调查及致病性分析

为了调查鸡传染性贫血病病毒(CAV)在肉鸡群中的流行情况及CAV毒株的致病性,于2021年在湖北荆州地区收集鸡肝样品224份,采用PCR方法进行检测,并对CAV的全基因扩增片段克隆测序,用生物信息学软件对测序结果进行遗传进化及分子特征分析;通过动物回归试验探究分离毒株JZ2118的致病性。结果显示,18份样品为CAV阳性,CAV阳性率为8.04%。CAV全基因序列与CAV VP1氨基酸序列的遗传进化树分组基本相同,说明CAV的遗传进化主要与VP1蛋白氨基酸的突变有关;1日龄SPF鸡感染JZ2118毒株14 d后致死率高达82.6%,在体重、病毒载量、血常规检测与病理组织切片等方面都具有显著性变化,表明JZ2118分离株是具有较强致病性的强毒株。

感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)雏鸡免疫器官抗体生成细胞的动态变化

对１日龄雏鸡感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）后免疫器官法氏囊、脾脏和胸腺的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ抗体生成细胞数量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡法氏囊、脾脏和胸腺的３种抗体生成细胞数量均程度不同地低于未感染对照雏鸡，其中法氏囊的ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体生成细胞和ＩｇＡ抗体生成细胞分别在感染后７～３５ｄ和１４～３５ｄ明显减少；脾脏红髓、白髓和淋巴小结的ＩｇＧ抗体生成细胞分别于７～３５ｄ、１４～３５ｄ和１４～２１ｄ明显减少，ＩｇＭ抗体生成细胞分别在７～４２ｄ、２８～３５ｄ和１４ｄ时明显减少，ＩｇＡ抗体生成细胞仅在红髓中（７～２８ｄ）明显减少；胸腺髓质的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ抗体生成细胞分别在１４～２８ｄ、７～２１ｄ和２１ｄ时明显减少。结果表明，ＣＩＡＶ感染雏鸡免疫器官的体液免疫功能明显降低。

鸡传染性贫血病毒抑制干扰素的研究进展

鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)为目前已知的指环病毒科(Anelloviridae)环病毒属(Gyrovirus)的唯一成员。CIAV直径为19~26.5 nm,无囊膜,由12个五边喇叭状的衣壳体组成二十面体结构的衣壳。CIAV对高温和化学试剂有较强抵抗力,100℃下处理15 min才能完全失活,对氯仿、乙醚和丙酮等试剂的处理也很不敏感~([1])。CIAV基因组是单链共价环状DNA,全长约2.3 kb,编码3个病毒蛋白;VP1为衣壳蛋白,是病毒颗粒中唯一的蛋白质~([3]);VP2具有多种功能,对病毒颗粒的形成至关重要~([4]);VP3在体内外可引起细胞凋亡~([2])。

2021年中国部分地区鸡传染性贫血病毒VP1基因遗传变异分析

为全面了解鸡传染性贫血病毒(CIAV)在我国的流行情况和VP1基因遗传变异情况,研究对2021年全国25个省市421份疑似CIAV或其他病原感染的临床样本进行鉴定。结果显示,共有64份临床样本的VP1基因PCR鉴定为阳性,序列对分析发现有59株VP1基因位于基因A型分支,5株VP1基因位于基因C型分支,氨基酸位点分析发现第394位氨基酸为谷氨酰胺(Q),与3-1株、CAV-10株等高致病性CIAV一致,且第75、89、125、139、141、144位氨基酸位点也出现了不同程度的变异。研究表明目前我国鸡群流行的CIAV以A型为主,且VP1基因存在变异,结果为了解CIAV在我国的变异情况及传染性贫血防控提供了数据参考。

鸡传染性贫血的研究

近年来,家禽养殖业高速发展,而疫病频发是全球家禽业面临的主要挑战。在各种鸡疫病暴发报告中,鸡传染性贫血的流行报告十分频繁,被认为是新发疫病。鸡传染性贫血又被称为贫血-皮炎综合征和蓝翅病,会导致再生障碍性贫血和胸腺萎缩。鸡是许多传染性病原体的宿主,这些病原体可通过受污染的蛋和肉传播给人类。

3株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定、VP1基因遗传进化分析及致病性评价

为了解国内鸡场鸡传染性贫血(CIA)的流行状况和鸡传染性贫血病毒(CIAV)的遗传变异规律,以期对CIA的传播流行和预警防控提供技术支持。本试验对2020年在3个省份疑似发生CIA的3个规模鸡场采集10份组织脏器样品,应用鸡胚进行病毒的分离培养,并对培养物进行CIAV PCR检测,进而对CIAV阳性样本进行VP 1基因扩增和测序,应用Lasergene和MEGA 6.0软件,对获得的所有分离毒株结构蛋白VP 1基因序列与GenBank中CIAV参考毒株进行比对,构建系统发育进化树,同时对分离的CIAV毒株进行动物回归试验,评价其对鸡的致病性。结果显示,10份样品中3份为CIAV阳性,共分离到3株CIAV,分别命名为202006-NX-4-2、202006-SD-2-1和202006-JX-016。VP 1基因相似性分析显示,3株CIAV分离株核苷酸相似性介于97.7%~99.6%,且均与国内分离株具有较高同源性;氨基酸序列分析显示,3株CIAV分离株毒力相关位点均与国内强毒株GD-101株一致。遗传进化分析结果显示,3株分离株属于同一进化分支(Ⅱ分支),202006-SD-2-1株和202006-JX-016株与JL15120株进化关系最近,202006-NX-4-2株则与以国内强毒株GD-101株为代表的其他Ⅱ分支参考株进化关系最近。动物回归试验结果显示,3株CIAV均能够引起1日龄鸡发生严重的淋巴器官萎缩、骨髓黄化,为典型的高致病性病毒株特征。本试验结果为当前国内CIAV的流行、毒株的遗传变异分析及相关疫苗研发提供了参考依据。

一例鸡传染性贫血和法氏囊病混合感染的诊断

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性的传染病;鸡传染性贫血病(CAV)是由鸡传染性贫血病毒引起的,病鸡表现为贫血、骨髓黄染、免疫机能受损。IBD和CAV均可直接导致病鸡死亡、鸡群生产性能降低,还可导致鸡群免疫抑制。