鸡减蛋综合征病毒SD-YS株的分离鉴定和免疫原性研究

为了解蛋鸡群中鸡减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV)的流行特点,筛选免疫原性良好的疫苗毒株,将山东潍坊市某养鸡场疑似EDSV感染鸡的输卵管组织进行病毒分离,对分离毒株进行血清学特异性鉴定、PCR鉴定和攻毒试验。病毒分离培养结果显示:分离株SD-YS可在易感鸭胚中增殖,血凝效价为2^(15)~2^(18),病毒含量为10^(7.7) EID50/0.1 mL。交叉血凝抑制试验结果显示:分离病毒液呈EDSV阳性。PCR鉴定结果显示:分离株SD-YS可扩增出长约2000 bp的特异性目的条带,与标准株AV127株和6株EDSV参考毒株的序列98.9%~99.4%同源。攻毒试验结果显示:SPF鸡免疫由SD-YS株制备的灭活疫苗(0.2 mL/羽)后,可获得良好的HI抗体(8.9log2),当HI抗体效价≥7log2时,免疫鸡可获得有效的攻毒保护。结果表明,分离毒株SD-YS为EDSV,具有良好免疫原性,可作为EDSV灭活疫苗的候选毒株。

鸡减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)巯基内肽酶的基因序列分析

鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇１金奇１朱雷１章金钢２殷震２侯云德１关键词鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），巯基内肽酶（Ｔｈｉｏｌ－ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ），核苷酸序列分析ＥＤＳ病毒...

鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)末端前体蛋白的基因结构分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了序列测定。同源比较分析证明：其Ｌ链含编码病毒末端前体蛋白，容量为５８０个氨基酸残基（ａａ）的开放读码框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点，如保守序列、核定位信号（Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ）。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与ＤＮＡ复制起始的机制提供了新的依据。

胶体金快速诊断方法对鸡减蛋综合征病毒的检测

选择15 nm的胶体金颗粒作为标记物,制备了鸡减蛋综合征病毒(EDSV)胶体金试纸条。该试纸条能检出浓度约为1.35μg/mL的纯化EDSV,用该试纸条检测135份临床样本,并与HA方法相比较,结果显示,二者的阳性符合率为89.8%。特异性试验结果显示,与鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)无交叉反应。表明,该试纸条用于检测EDSV具有快速、操作简便、特异性强等优点,可用于大批量抗原样本的检测。

鸡减蛋综合征病毒(EDSV)主要蛋白的结构分析

鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国株ＡＡ－２基因组全长为３２８３８ｂｐ，其编码病毒主要结构蛋白（５２／５５Ｋ、Ⅲａ、五邻体、ｐＶⅡ、ｐＶⅠ、六邻体、１００ｋ、ｐＶⅢ以及纤维蛋白等）的基因依次排列在基因组的中部，Ｅ２区编码ＤＮＡ结合蛋白、ＤＮＡ多聚酶、末端前体蛋白及ＩＶａⅡ的基因也分别排列在ＥＤＳＶ基因组的负链上。对这些蛋白的氨基酸序列进行同源性比较后发现，ＥＤＳＶ的主要蛋白与羊腺病毒（ＯＡＶ）同类物存在不同寻常的高同源性。

新型基因芯片检测禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鸡减蛋综合征病毒

建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法。从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针。使用Dr.chip系统进行芯片点样、杂交、显色、读数,优化反应条件后做灵敏度、特异性试验,然后应用于临床检验。结果显示,各病原间无交叉反应,探针可特异性识别靶基因;病原的最低浓度为4.83pg/μL,灵敏度较高;每个梯度的两个反应结果一致,重复性良好。对临床样品检验,结果同病毒分离鉴定方法一致。本研究建立的基因芯片检测方法可用于禽流感通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及NDV、EDSV的鉴别检测。

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。

PCR方法检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（Egg drop syndrome 1976EDS-76）病毒DNA序列，设计合成了1对能扩增300bpDNA片段的引物，建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应（PCR）诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性；对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）和鸡新城疫病毒（NDV）的扩增结果均为阴性。结果表明该方法特异且敏感，检测的最低病毒DNA含量达到2．5×10^-2pg，PCR检测表明，从试验感染鸡的心脏中不能检测出病毒，肝脏和肾脏只有在感染后7～15d检出，在试验感染后4～21d的子宫、血液和4～17d的脾中均能检测到病毒。

鸡减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端结构的分析

从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）弱毒株（ＡＡ－２），其基因组全长约为３３ｋｂ。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解ＥＤＳＶ全基因组，构建了以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ（ＫＳ＋）为载体的右末端片段的克隆（约４．２ｋｂ），对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长４１８３个碱基对（ｂｐ），位于基因组右末端８７．３ｍ．ｕ．－１００ｍ．ｕ．。结果显示，该片段与哺乳动物腺病毒右末端Ｅ４区结构不同，与禽Ⅰ型腺病毒代表株ＣＥＬＯ右末端片段亦无同源性。本文为深入了解ＥＤＳＶ基因组结构特点。

不同免疫增效剂对鸡减蛋综合征免疫效果的影响

为了验证不同免疫增效剂对鸡减蛋综合征(EDS76)免疫效果的影响,试验以鸡减蛋综合征抗体效价为指示,比较不同免疫增效剂的免疫效果。每只鸡皮下注射EDS76灭活油乳剂疫苗,再将试验鸡随机分成4个试验组和1个对照组,试验组分别给予鸡转移因子、黄芪、左旋咪唑、灵芝粉4种药品,对照组给予等量的生理盐水。在免疫后的1,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24天分别采血,采用血凝抑制试验(HI)测定EDS76抗体效价。结果表明:鸡转移因子组在第14天时抗体效价出现极显著差异,且一直保持增长趋势;黄芪组在第18天时抗体效价出现极显著差异,且一直保持高水平状态;左旋咪唑组只在第20天时抗体效价出现显著变化;灵芝粉组在第12天时抗体效价出现显著变化,并一直保持高水平状态。说明鸡转移因子的增效作用最强可优先使用,黄芪和灵芝粉次之,左旋咪唑酌情使用。

鸡减蛋综合征诊断抗原与超免疫血清的研制

将鸡减蛋综合征 (EDS)种毒AV 12 7、AV HS 1接种鸭胚 ,孵育 12 0h后 ,收取尿囊液测定其血凝 (HA)效价 ,加体积分数 0 .2 %甲醛灭活作为诊断抗原 ;将病毒对鸡、兔进行 3次免疫 ,当抗体效价达到 2 9以上时分离血清 ,制备成超免疫血清。试验证明 ,该EDS诊断抗原和超免疫血清具有特异性强、敏感性高等特点 ,可用于感染鸡群的疫情调查、免疫鸡群的抗体水平监测、EDS的预防、治疗和对减蛋综合征病毒 (EDSV)进行深入研究。

不同方法提纯鸡减蛋综合征病毒的比较

通过相关系数的计算与显著性检验，结合病毒蛋白浓度的大小，同时进行电镜观察，证实了由鸭胚增殖的ＥＤＳ病毒采用６０％饱和度的硫酸铵或１０％聚乙二醇（ＭＷ６０００）沉淀法初提后，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析法提纯的效果优于ＤＥＡＥ５２纤维素色谱法。

鸡减蛋综合征的症状及预防措施

鸡减蛋综合征是20世纪70年代后期发现的由减蛋综合征病毒(EDSV)引起的世界性的商品蛋鸡和母鸡产蛋下降的病毒性疾病。其主要病征是产蛋量骤然下降、蛋壳异常、蛋体畸形、蛋质低劣。该病在世界范围内的发生和流行给养鸡业带来了巨大的经济损失。文章从对鸡减蛋综合征的症状和预防措施等方面进行阐述与分析,以为科学防治该病提供参考。

鸡减蛋综合征的诊断与防制措施

鸡减蛋综合征（EDS-76）亦称鸡产蛋下降综合征,是由禽类腺病毒引起的产蛋鸡和种母鸡以产蛋率下降为特征的一种急性病毒性传染病。该病在规模化和集约化程度较高的鸡场经常发生,传播迅速,危害性非常大,严重影响了蛋鸡产业的发展,给养鸡企业及养鸡户造成了巨大的经济损失。本文从该病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断、治疗及防制措施等方面进行阐述,以供读者参考。一、流行病学该病除鸡易感以外,鹅、鸭、野鸡、

鸡减蛋综合征病毒基因组提取方法的比较

分别采取PEG-6000沉淀法、酶直接消化法和超速离心法浓缩、纯化减蛋综合征病毒,并提取基因组DNA。结果表明:上述三种方法对1.5mL鸭胚尿囊液(HA≥14(log_2))提取的DNA量分别为148.4,189.2和210.4μg;其OD(260)/OD_(280)值分别为1.702,1.635,1.738,均在1.6～1.8之间,完全符合要求的纯度;经电泳显示,三种方法提取的DNA图谱也完全一致。提示,在无超速离心机的条件下,酶直接消化法和PEG-6000沉淀法提取的EDSV基因组DNA在纯度和数量方面,完全可以满足分子生物学的研究需要,且利用PEG-6000沉淀法,在时间、设备和试剂方面更为节简,可作为一般实验室操作时的首选方法。

鸡减蛋综合征油乳剂灭活苗的研制

采用鸡减蛋综合征(EDS76)K-11株细胞毒为种毒,通过鸭胚连续盲传5代,使其扩增,收获尿囊液作为基础种子毒。基础种子毒在非免疫健康鸭胚上增殖动态的试验结果表明,EDS76病毒在羊水、尿囊膜(包含羊膜)、尿囊液中含量较高,增殖动态趋于一致;接种病毒后120h为最佳收毒时间,突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法,使收获的病毒材料由原来的每胚5.2ml增加到每胚49.4ml,显著降低了研究费用和制苗成本。确定了0.1%甲醛在20℃条件下48h灭活病毒为最佳灭活方法。成功地研制出尿囊膜、羊膜、羊水、尿囊液四元材料混合的EDS76油乳剂灭活疫苗。此疫苗在甘肃省推广试用80万羽份,安全可靠,免疫持续期长,能有效地预防和控制EDS76的发生和流行。

鸡减蛋综合征灭活抗原不同保存方式的分析比较

为比较不同保存方式对鸡减蛋综合征灭活抗原的影响,采用禽腺病毒京911株(CVCC AV70)经尿囊腔接种易感鸭胚,收获感染鸭胚液,经β-丙内酯灭活后,对该抗原的保存条件及其稳定性等方面进行优化。冻干抗原与未冻干抗原在相同温度下,冻干抗原HA效价下降较慢。冻干抗原在2~8℃和-15℃以下保存,HA效价没有明显差异。因此,生产的鸡减蛋综合征灭活抗原要在冻干后保存在2~8℃最佳。保存条件的优化不仅可以减少经济损失,而且还有助于更好的控制禽腺病毒疫情的暴发。

鸡减蛋综合征病毒DNA的基因文库构建和酶切位点分析

腺病毒载体已经成为基因工程疫苗及癌症、遗传病基因治疗的重要工具。腺病毒可分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒,禽腺病毒包括20多个血清型,分别归属于三个群:Ⅰ群为传统的禽腺病毒(FAV),Ⅱ群包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)等,Ⅲ群禽腺病毒为减蛋综合征病毒(EDSV)。这些病毒广泛地存在于多种禽类的呼吸道、消化道,大多呈显性或不显性感染。以禽类腺病毒为载体表达禽类重要病原的保护性抗原基因,构建多价(联)活载体基因工程疫苗。

鸡减蛋综合征的综合防制

鸡减蛋综合征（EDS-76）是一种由腺病毒引起的病毒性传染病，其主要特点是产蛋量骤然下降，蛋壳异常，蛋体畸形，蛋质低劣。鸡减蛋综合征（EDS-76）最早是由VanEck于1976年首先报道该病在荷兰发生，1977年分离到EDS-76病原体（病毒）。该病可使鸡群产蛋率下降10％～50％，蛋的破损率可达38％～40％，无壳蛋，软壳蛋达15％，给养鸡业带来严重的经济损失，被列入鸡四大病毒性传染病之一。

缓释复方免疫增强剂对鸡减蛋综合征疫苗免疫增强效果研究

中医药之博大精深，即便是我们拥有更先进的现代技术和装备，也未必能完全了解透彻。黄芪，党参，蒲公英，白术，淫羊藿，女贞子，猪苓，茯苓，甘草、黄芩，蜂胶，玉米花粉等提取物多被冠以多糖而在畜牧业广泛应用，往往收到意外的功效。本文作者从具有免疫增强作用的中草药中提取出有效活性成分，与化学药物免疫增强剂结合，制备出缓释复方免疫增强剂，与鸡EDS-76疫苗配合使用，对鸡免疫增强效果进行研究，表明缓释复方免疫增强剂能够增强鸡体液免疫功能。