胃癌组织中鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ、神经纤毛蛋白2的表达变化及其意义

目的观察胃癌组织中鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)和神经纤毛蛋白2(NRP2)的表达变化,并分析COUP-TFⅡ、NRP2表达与胃癌临床病理参数的关系。方法收集手术切除的新鲜胃癌组织及其癌旁正常胃黏膜组织各60例,采用Western blotting法和免疫组化法检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中的COUPTFⅡ、NRP2,分析COUP-TFⅡ、NRP2表达与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2阳性表达率分别为70.0%、78.3%,正常胃黏膜组织中COUP-TFⅡ、NRP2阳性表达率分别为30.0%、21.7%。胃癌组织、正常胃黏膜组织中COUP-TFⅡ相对表达量分别为0.84±0.22、0.68±0.34,NRP2相对表达量分别为0.86±0.17、0.58±0.22,胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2相对表达量均高于正常胃黏膜组织(P均<0.05)。胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2表达呈正相关关系(r=0.263,P<0.05)。浸润深度为T_3、T_4的胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2阳性表达率高于浸润深度T_1、T_2的胃癌组织(P均<0.05);中低分化胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2阳性表达率高于高分化胃癌组织(P均<0.05);有淋巴结转移的胃癌组织中COUP-TFⅡ、NRP2阳性表达率高于无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05)。结论 COUP-TFⅡ、NRP2在胃癌组织中高表达,并与胃癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关,二者可能协同参与了胃癌的发生和发展。

鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的:检测鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)在人胃癌组织中的表达,并探讨其临床意义及其影响胃癌发生、发展的可能分子机制。方法:收集66例手术切除的胃癌组织和相对应的癌旁非肿瘤组织标本,采用免疫组织化学法检测标本中COUP-TFⅡ和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达,分析COUP-TFⅡ与患者临床病理特征及预后之间的关系,以及COUP-TFⅡ与其潜在靶基因MMP-2的相关性。结果:COUP-TFⅡ蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为65.2%(43/66)和19.7%(13/66),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。COUP-TFⅡ蛋白的表达与胃癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。COUP-TFⅡ蛋白阳性表达的患者术后平均生存时间比阴性表达者短,分别为(26.8±2.6)个月和(36.4±3.0)个月(χ2=4.118,P=0.042)。MMP-2蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为78.8%(52/66)和34.8%(23/66),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。COUP-TFⅡ与MMP-2蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.310,P=0.011)。结论:COUP-TFⅡ蛋白与胃癌的发生、发展、侵袭、转移以及不良预后密切相关,推测可能是通过调控MMP-2的表达而发挥作用。

鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ的功能及其在肿瘤中的作用

鸡卵清蛋白上游启动子转录因子（COUP-TF）Ⅱ是一种转录调节因子,在器官发育和血管生成的过程中起着重要的作用,近几年来发现它能调节多个信号通路来控制多种肿瘤细胞生长和血管生成及淋巴管的生成,且被证实与多种肿瘤的发生和转移有至关重要的作用^（[1]）。本文研究其在非腺癌膀胱癌中的表达,并重点对COUP-TFⅡ的表达、功能调节及其在相关肿瘤中的作用进行综述。

鸡卵白蛋白上游启动子转录因子对胚眼发育的调控作用

鸡卵白蛋白上游启动子转录因子（COUP-TFs）是类固醇/甲状腺激素受体超家族中的一类孤核受体,包括COUP-TF Ⅰ和COUP-TFⅡ2个亚型.COUP-TFs在胚胎发育、器官形成、神经系统形成和细胞分化中起着至关重要的作用.许多研究表明COUP-TFs也参与胚眼的发育,COUP-TFs基因突变由于可导致眼组织缺损、小眼球、视神经萎缩、眼发育迟缓、斜视、弱视等表型形成而备受关注.然而COUP-TFs对胚眼发育的调控机制目前尚不明确.就COUP-TFs的来源、分子结构、分类和生物学功能、COUP-TFs调控靶基因转录的作用机制以及对胚眼发育的影响及其作用机制进行综述.

鸡卵白蛋白上游启动子转录因子Ⅱ在肾脏疾病中的作用与机制

鸡卵白蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(chicken ovalbumin upstream promoter transcription factorⅡ,COUP-TFⅡ)作为类固醇/甲状腺激素受体超家族的成员之一,目前尚未发现其配体,因此又被称作孤儿受体。COUP-TFⅡ参与多种组织器官发育及分化、调节代谢、调节血管及淋巴管形成;而在不同肿瘤中具有致癌或抑制肿瘤增殖及转移的作用。COUP-TFⅡ在肾脏组织中主要分布于肾小球、远端小管、集合管、Bowman囊,参与肾脏发育及多种肾脏疾病的发生与进展。本综述主要阐述COUP-TFⅡ在肾脏发育、肾肿瘤、急性肾损伤及肾纤维化中的研究进展。

COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控

目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。

缺氧诱导因子诱导转录因子COUP-TFⅡ转录激活

目的探讨缺氧对孤核受体鸡卵清蛋白上游启动子转录因子(COUP-TF)Ⅱ的影响及分子机制。方法利用ConTra v2(http://bioit2.irc.ugent.be/contra/v3/)分析COUP-TFⅡ启动子和调控区;创建野生型(WT)COUP-TFⅡ-Luc报告载体,使用荧光素酶实验检测缺氧对COUP-TFⅡ启动子的影响;qRT-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹检测缺氧诱导因子(HIF)-1α或HIF-2α对COUP-TFⅡ的影响;使用染色质免疫沉淀分析(ChIP)检测HIF-1α或HIF-2α与COUP-TFⅡHRE的相互作用;构建小鼠后肢缺血模型,使用免疫组化检测缺氧对COUP-TFⅡ影响。结果COUP-TFⅡ与HIF-1α/HIF-2α存在一致的缺氧反应元件(HRE);荧光素酶实验显示HRE是缺氧诱导COUP-TFⅡ表达的关键;缺氧可以诱导COUP-TFⅡ表达增加;HIF-1α和HIF-2α可诱导COUP-TFⅡ启动子的激活并与HRE发生相互作用;在体内实验中缺氧可诱导COUP-TFⅡ表达增加。结论HIF-1α、HIF-2α可诱导COUP-TFⅡ启动子的转录激活,促进新生血管分化。

静脉表型分子COUP-TFⅡ表达降低对血管内皮细胞衰老的影响

目的:观察静脉表型分子鸡卵清蛋白上游启动子转录因子Ⅱ(COUP-TFⅡ)表达对血管内皮细胞衰老的影响和分子机制。方法:通过RT-qPCR检测比较人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中COUP-TFⅡ的表达情况。使用10^(-5)mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导HUVEC衰老,通过COUP-TFⅡ特异性小干扰RNA(siCOUP-TFⅡ)转染HUVEC使其COUP-TFⅡ的表达降低,利用β-半乳糖苷酶染色、Western blot、CCK-8、细胞计数等方法分别观察siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的血管内皮细胞衰老及增殖的影响,通过Western blot检测Akt信号分子的表达变化。结果:与HCAEC相比,HUVEC中COUP-TFⅡ呈显著高表达;用siCOUP-TFⅡ抑制HUVEC的COUP-TFⅡ表达时,能显著促进AngⅡ诱导的内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖和p-Akt蛋白水平;加入Akt激动剂SC79(4 mg/L)能够部分逆转siCOUP-TFⅡ对AngⅡ诱导的HUVEC衰老和增殖的影响。结论:COUP-TFⅡ表达降低可促进血管内皮细胞衰老并抑制内皮细胞增殖,其机制可能与调节Akt信号有关。

加味三棱丸抗子宫内膜异位症内膜细胞雌二醇生成机制的研究

目的:探讨加味三棱丸(SLW)抗子宫内膜异位症内膜雌激素生成的作用机制。方法:以SLW含药血清作用于体外培养的内异症在位内膜细胞,RT-PCR检测子宫肌瘤组、给予SLW含药血清前后内异症组类固醇类产生因子-1(steroidgenic factor-1,SF-1)、小鸡卵清蛋白上游启动转录因子(chicken ovalbumin upstream-transcription factor,COUP-TF),17-β-羟甾类脱氢酶1(17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1,17-β-HSD 1)和17-β-羟甾类脱氢酶2(17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 2,17-β-HSD 2)mRNA的表达。Western blot检测上述各组SF-1和COUP-TF蛋白的表达。结果:子宫肌瘤对照组SF-1,17-β-HSD 1 mRNA及SF-1蛋白的表达明显低于内异症内膜组,而COUP-TF,17-β-HSD 2 mRNA及COUP-TF蛋白的表达明显高于内异症在位内膜组,差异有极显著性(P<0.01)。以内异症在位内膜为对照,给予对照组SLW 5.0,2.5 g.kg-1.d-1大鼠含药血清(体积分数为0.1)作用48 h后,COUP-TF mRNA和蛋白、17-β-HSD 2 mRNA的表达明显高于对照组,而SF-1 mRNA和蛋白、17-β-HSD 1 mRNA的表达明显低于对照组,差异有显著性或极显著性(P<0.05或P<0.01)。SLW 1.25 g.kg-1.d-1组COUP-TF mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,SF-1蛋白和17-β-HSD 1 mRNA表达明显低于对照组(P<0.01),而SF-1,17-β-HSD 2 mRNA的表达却无明显改变。结论:加味三棱丸可降低子宫内膜异位症在位内膜细胞分泌雌二醇的水平,与其抑制SF-1和17-β-HSD 1,增强COUP-TF和17-β-HSD 2的表达密切相关。

黄芪甲苷抑制COUP-TFII表达对成骨细胞分化的影响及相关分子机制研究

目的:探究黄芪甲苷对小鼠成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞分化的影响及相关分子机制。方法:取小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1经复苏后进行培养,再以成骨细胞分化培养基诱导分化后,应用倒置显微镜、茜素红染色等方法鉴定成骨细胞分化;取对数生长期的MC3T3-E1细胞,构建shRNA COUP-TFII的质粒载体,以慢病毒载体成功转染至MC3T3-E1的细胞,作为阳性对照组;取正常对数生长期细胞根据培养基中所加黄芪甲苷的浓度分为:空白对照组(0μg/ml)、黄芪甲苷低剂量组(25μg/ml)、中剂量组(50μg/ml)、高剂量组(100μg/ml);采用ALP活性检测和钙结节染色法评估黄芪甲苷对成骨细胞分化能力的影响;以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法测定黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞中COUP-TFII基因及蛋白表达的影响。结果:MC3T3-E1细胞培养18天后,细胞重叠生长,经茜红素染色可见大小形态不一的钙结节沉积;阳性对照组及黄芪甲苷处理组MC3T3-E1细胞中ALP活性及钙化结节程度均显著高于空白对照组,黄芪甲苷处理组间对比差异有统计学意义(P<0.05),阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组无显著性差异(P>0.05);阳性对照组及黄芪甲苷处理组COUP-TFII基因及蛋白表达水平均显著低于空白对照组(P<0.05),黄芪甲苷处理组间对比差异有统计学意义(P<0.05),阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组无显著性差异(P>0.05)。结论:黄芪甲苷能够通过抑制COUP-TFII表达,促进成骨细胞的分化。