抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的 观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法 应用白色念珠菌作为抗原免疫 2 5周龄Leghorn鸡 ,通过改良水溶法 (WD)提取蛋黄中抗体IgY ,双紫外光测定抗体含量 ,SDS PAGE电泳检测抗体纯度 ,Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源 ,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果 抗体含量 13mg/ml蛋黄液 ,抗体纯度达到 95 % ,Westernblot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性 ,其具有良好的热稳定性。结论 鸡蛋黄内含有丰富的抗体 ,通过WD水溶提取法可得到高产量 ,高纯度的特异性抗体IgY ,证明其来源于鸡血清中的IgG 。

重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白制备的鸡卵黄抗体的效力评价

为探索以重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白为免疫原制备鸡卵黄抗体的可行性,本研究利用基因工程技术,在大肠杆菌中高效表达重组K88ab和K99蛋白。分别以重组蛋白和提取的天然菌毛为免疫原制备抗K88ab和K99菌毛的鸡卵黄抗体,并对抗体效价、特异性以及抗体的预防和治疗效果进行了检测和比较。试管凝集反应结果显示,以重组蛋白为免疫原制备的鸡卵黄抗体效价最高可达1∶2 560,与用天然菌毛为免疫原制备的鸡卵黄抗体的效价基本一致。该抗体分别与K88ab+和K99+大肠杆菌发生特异性凝集,并能分别有效抑制K88ab+和K99+大肠杆菌对新生仔猪肠上皮细胞的吸附。临床应用结果显示,本实验制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为100%,保护率为91%;治疗有效率为100%,治愈率为87%。实验结果表明该卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢具有良好的预防和治疗效果。

特异性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7内毒素鸡卵黄抗体的制备

目的:比较研究LPS和O-SP的免疫原性,制备出特异性抗内毒素(LPS)鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,IgY),用于对E.coliO157:H7的免疫预防及检测。方法:分别用灭活E.coliO157:H7菌体、不同浓度内毒素(LPS)及O-特异性多糖链(O-SP)与不完全弗氏佐剂充分乳化后作抗原免疫临产蛋母鸡,以水稀释法从卵黄中提取抗体,阴离子交换色谱法实现对抗体的纯化,间接ELISA及双向免疫扩散检测抗体产生效价与活性。结果与结论:所制内毒素(LPS)和O-SP均有较好的免疫原性,刺激鸡体后可产生高效价抗体,灭活菌体、600μg/mlLPS、1200μg/mlLPS、2000μg/mlLPS、O-SP抗体产生效价最高可分别达1:32000、1:28000、1:32000、1:12000、1:40000。结合离子交换色谱,用0.185mol/L的离子强度可实现一步洗脱纯化抗体,制备出高纯度、高活性、特异性强的鸡卵黄免疫球蛋白IgY,为大肠杆菌O157:H7的感染防治提供了可靠的保证,在此实验基础之上可进一步探讨应用特异性IgY对大肠杆菌O157:H7的检测。

鸡卵黄抗体在防治家畜疾病中的应用

随着中国加入WTO,我国畜牧养殖业迎来了一个巨大的发展机遇.我们应该看到,尽管我国的肉、蛋、奶产品在国际市场上具有较大的价格优势,但因存在药物残留等问题,其市场前景并不乐观.

鸡卵黄抗体Fab′的制备及鉴定

目的鸡卵黄抗体(immunoglobulin Y,IgY)的活性片段Fab′免疫原性低,可口服用于预防胃肠道感染。文中制备并鉴定IgY Fab′片段。方法采用胃蛋白酶水解法制备Fab′,对酶与IgY混和质量比、pH值、酶解时间进行优化;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及Western blot对酶解产物进行鉴定。结果胃蛋白酶∶IgY的质量比为1∶40,缓冲液pH4.2,酶解时间9 h的条件下,可得到无pFc片段的特异性抗体Fab′片段。结论获得制备IgY Fab′的最佳条件,得到的Fab′产量高、纯度高,特异性强,是规模化制备特异性Fab′片段的良好的实验方法。

鸡卵黄抗体(IgY)的性质、提纯及应用于寄生虫学的研究

免疫学IgY技术是近几年发展起来的一种新的生物技术领域及医药研究中的热点技术。本文简要综述鸡卵黄抗体（IgY）的特性、提纯及应用于寄生虫病免疫诊断及免疫治疗等方面,以开拓寄生虫病防治。弓形虫病（toxoplas mosis）危害严重,感染方式多种多样，常规检测方法包括免疫学检测、分子生物学检测及病原学检测等。病原学培养和动物接种操作复杂，却是弓形虫检测的金标准。

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究

目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。

人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的 :原核表达人肝再生磷酸酯酶 2 (PRL 2 )与谷胱甘肽S转移酶 (GST)和 6个串联组氨酸 (6×His)的融合蛋白 ,并制备GST PRL 2特异性鸡卵黄抗体。方法 :将人PRL 2cDNA的全长蛋白编码序列 ,克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pET2 1a中 ,在大肠杆菌BL2 1中诱导表达融合蛋白。用Glu tathioneSepharose 4B和Ni NTAagarose亲和柱分别纯化目的蛋白。以纯化的GST PRL 2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体 ,应用 6×His PRL 2对抗体进行亲和层析纯化 ,纯化产物用Westernblot进行分析。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST PRL 2和 6×HisPRL 2融合蛋白。以GST PRL 2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL 2的多克隆抗体 ,Westernblot证实 ,经 6×HisPRL 2亲和层析纯化的抗体 ,能够识别 6×His PRL 2和GST PRL 2融合蛋白 ,但不同GST蛋白起反应 ,表明具有较高的特异性。结论 :利用原核表达的人PRL 2融合蛋白制备的抗PRL 2多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究PRL

鸡卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻中的应用

仔猪大肠杆菌性腹泻病的致病过程主要与产肠毒 素型大肠杆菌菌毛 介导的粘附作用和产肠毒素密切相关。用禽菌毛抗原免疫产蛋母鸡制备卵黄抗体，在初 生仔猪和断奶仔猪的人工感染实验中，口服卵黄抗体能降低腹泻程度和仔猪的死亡率；在商 业性猪场的实验表明卵黄抗体能降低提前断奶仔猪的腹泻发生率，并且有利于仔猪的增重。 鸡卵黄抗体是仔猪大肠杆菌性腹泻病的一种新的防治方法。本文就国内外用鸡卵黄抗体防治 仔猪大肠杆菌腹泻的研究概况作了简要介绍。

鸡卵黄抗体

抗体（免疫球蛋白,Ig）是指机体受到外来抗原物质刺激后,B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。卵黄抗体（Immunoglobulin ofyolk,IgY）是指经特定抗原免疫后的产蛋鸡可产生相应的特异性抗体,产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用,

特异性抗镰刀菌感染鸡卵黄抗体的制备及其抗镰刀菌作用

目的制备特异性抗镰刀菌鸡卵黄抗体(IgY)并检测其对温度和pH的耐受性及抗真菌作用。方法取22周龄莱杭母鸡18只,采用随机数表法将其随机分为阴性对照组和实验组,每组9只。制备灭活镰刀菌丝悬液,将菌丝浓度2×107菌落形成单位(CFU)/ml的菌悬液与弗氏完全佐剂等体积混合充分乳化后,对实验组莱杭母鸡进行免疫,每只鸡注射1 ml,2周后换为弗氏不完全佐剂加强免疫。在免疫后的第5~16周每周收集卵黄,用硫酸铵盐析法制备IgY,将得到的蛋白溶液放入冻干机中制作成冻干粉,4℃保存。以质量分数0.9%氯化钠溶液代替菌悬液按照同样方式进行阴性对照组莱杭母鸡的注射,以制备非特异性抗体作为实验中的阴性对照。采用考马斯亮蓝法测定特异性IgY蛋白浓度,采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其效价。将1×105 CFU/ml和1×103 CFU/ml镰刀菌悬液与不同浓度IgY及磷酸盐缓冲液(PBS)混合培养4 d后测定吸光度(A)值,用PBS及非特异性IgY与镰刀菌悬液共孵育作为空白对照组及阴性IgY组,绘制抗镰刀菌IgY的抑菌曲线。用pH 7.4的PBS将特异性IgY溶液稀释至0.02 mg/ml,分别在30、40、50、60、70、80和90℃水浴中孵育30 min后冷却至室温;此外,用pH值为l、2、3、4、5、6、7、8、9、l0、11和12的PBS将特异性IgY溶液稀释至0.02 mg/ml,4℃下放置1 h,均采用间接ELISA法测定抗体活性,评估IgY对不同温度和pH的耐受性。取SPF级8周龄雌性C57BL/6小鼠12只,采用随机数表法将其分为PBS对照组和特异性IgY治疗组,每组6只。用镰刀菌感染小鼠右眼角膜,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,建模后1 d,特异性IgY治疗组用200 mg/ml特异性抗镰刀菌IgY点眼,PBS对照组用PBS点眼,于感染后1、3和5 d在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜,根据炎症评分表对真菌性角膜炎的严重程度进行评分。结果免疫后第5~16周的IgY蛋白质量浓度分别为1.57、2.89、24.98、25.09、23.89、25.78、21.57、21.37、18.98、15.78、14.67和12.67 mg/ml。特异性抗镰刀菌IgY的效价从第5周开始升高,第7周时达到最高效价,为1∶10000,可维持至免疫后12周,12周后抗体效价逐渐下降。抑菌曲线显示,与空白对照组和阴性IgY组相比,特异性IgY治疗组镰刀菌生长缓慢。抗体效价高于1∶10000的特异性IgY在60℃以下具有较好的热稳定性;在pH 4~6具有最高活性,在pH 3~9的免疫活性能够保持在70%以上,随着pH值的进一步降低或升高,其活性迅速降低。镰刀菌感染后1、3和5 d,PBS对照组角膜炎症评分分别为3.50±0.55、7.33±0.82和4.00±0.63,特异性IgY治疗组角膜炎症评分分别为3.33±0.82、4.17±0.75和2.50±0.55。2个组不同时间点炎症评分总体比较,差异均有统计学意义(F_(分组)=247.35,P<0.05;F_(时间)=23.19,P<0.05),其中镰刀菌感染后3 d和5 d,与PBS对照组相比,特异性IgY治疗组小鼠真菌性角膜炎炎症评分降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论用硫酸铵盐析法可成功制备高效价特异性抗镰刀菌IgY,其稳定性高,对温度和酸碱度均有一定的耐受性,可以在小鼠的真菌性角膜炎模型中减轻角膜溃疡的严重程度,降低炎症评分。

鸡卵黄抗体

经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体，有研究证实，产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用，使其不断储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体。与哺乳动物来源的IgG比较，卵黄抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高．同时具有特异性高、稳定性较好等优点，在疾病诊断、防治等诸多方面得到了广泛的应用．是当今生物科学研究领域的一大热点。

鸡卵黄抗体技术在5种草莓病毒快速检测中的应用

利用生物信息学技术对草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓斑驳病毒(SMV)及草莓皱缩病毒(SCV)等5种病毒抗原表位进行预测,将预测的抗原肽段及串联表位肽段的DNA片段在大肠埃希氏菌(Escherichia)BL21(DE3)进行原核表达,并将纯化后的抗原表位肽免疫京红一号产蛋鸡.从免疫蛋鸡卵黄中分离卵黄抗体(IgY),并对其进行抗体活性、效价及灵敏度的分析.结果表明,预测到的优势抗原表位肽段分别位于5种草莓病毒外壳蛋白氨基酸序列的27-38、49-82、288-314、62-75、218-238位.5种优势抗原表位肽及其串联抗原表位肽(5S)均能在Escherichia BL21(DE3)中成功表达.5S免疫蛋鸡产生的IgY对于5种草莓病毒均具有较强的免疫活性,抗体滴度为1∶1600,检测灵敏度为10ng.本研究制备的串联抗原表位重组蛋白能诱导蛋鸡产生具有较强免疫活性的IgY抗体,可用于SMYEV、SMV及SCV等5种草莓病毒的同时检测.

鸡卵黄抗体及其在动物疾病防治中的应用

近年来,抗生素残留与耐药性问题在畜牧养殖中日益凸显,寻找有效的抗生素替代物成为当前研究的热点。鸡卵黄抗体(IgY)具有化学性质稳定、产量高、成本低、特异性强且无任何毒副作用的优势,并且能给多种胃肠道、非肠道疾病提供有效的被动免疫保护,是一种极具潜力的抗生素替代品。基于此,该文就IgY的理化特性、作用机理、在动物疾病防治中的应用现状以及通过包被来提高口服IgY利用效果的研究加以阐述,以期为IgY产品升级和开发更加高效的复合型IgY制剂提供思路。

抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究

目的 制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体 (YolkImmunoglobulin ,IgY) ,研究其对肠出血性大肠杆菌 (EHEL)O15 7∶H7的被动保护作用。方法 采用EHECO15 7∶H7933菌株制备抗原 ,免疫SPF莱杭鸡 ,用脱脂和盐析的方法 ,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体 ,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到 1∶2 0 0 0 0 0以上 ,SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现IgY抗体对动物的毒性作用 ,被动保护实验结果表明 ,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。 结论 (1)通过常规免疫技术 ,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。 (2 )脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。 (3)建立了EHECO15 7∶H7的乳鼠肠道感染模型。 (4)

鸡卵黄抗体及其在肉鸡生产中的应用

卵黄抗体（immunoglobulin of egg yolk,IgY）又称卵黄免疫球蛋白（Egg yolk immunoglobulin）,是特异性抗原刺激禽类后,由机体内B淋巴细胞产生并移行至卵黄中的特异性抗体,大多数为IgG。目前研究最多、应用最广范的是鸡IgY。

鸡卵黄抗体制备的C-反应蛋白试剂测定人血清CRP的研究

目的研究鸡卵黄抗体制备的C-反应蛋白(CRP)检测试剂测定人血清CRP能否满足临床的要求。方法对临床2986例样本进行精密度、灵敏度、偏倚、干扰试验等研究,并用其中189例样本与进口德赛试剂进行比对分析。结果用鸡卵黄抗体制备的CRP试剂,当血清中胆红素≤701.1μmol/L、血红蛋白浓度≤10g/L、甘油三酯浓度≤14mmol/L、类风湿因子含量≤700u/L时没有观察到干扰,试剂批内精密度为3.40～4.74%,天间精密度为4.03～6.55%,试剂至少可稳定半年,与进口的德赛试剂进行比对试验,具有良好的相关性(γ=0.988),y=0.985x+0.01mg/L。结论采用鸡卵黄抗体制备的CRP试剂测定人血清C-反应蛋白特异性好、准确度高、精密度好,能够满足临床检测的需要,可广泛应用于各级医疗机构。