鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究

本文对母鸡经鸡新城疫疫苗免疫接种后产生并富集在卵黄中的抗体IgY的提取纯化工艺条件进行了研究与优化,确定了去脂、提取抗体最佳工艺为:卵黄液用0.05mol/L,pH5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液1∶9倍稀释,搅拌15min,4℃静置10小时,抗体回收率为90%,去脂率为99%;该提取液用40%饱和度的硫酸铵盐析,得到的盐析液抗体回收率为82%,纯度达到69%。盐析液经截留分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后,截留液抗体回收率达到92%,纯度为85%。

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离纯化的研究

对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离纯化进行了研究。工艺流程为:卵黄→8倍水稀释并搅拌10min→用HCl调pH至5.2后在4℃静置2h去沉淀→在上清夜中加入95%冰乙醇(-20℃)使终浓度为60%(v/v)→4℃搅拌20min后离心(22000r/min,4℃,25min)→收集沉淀并加入0.028mol/LNaCl溶液在4℃下过滤除去脂蛋白沉淀→收集的滤液用SDS-PAGE法进行纯化得纯度为98%的lgY。用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定,效果良好,此方法能保持免疫球蛋白的活性。

鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备

目的 研究分别应用内毒素 (LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌突变株J5免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量、纯度、效价并筛选最佳免疫抗原。方法 分别应用内毒素 (LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌J5突变株作为抗原免疫 2 5周龄Leghorn鸡 ,水溶法 (WD)提取蛋黄中抗体IgY ,双紫外光测定抗体含量 ,SDS PSGE电泳检测抗体纯度 ,细菌酶联染色和ELISA检测抗体特异性、效价及筛选最佳免疫抗原。结果 3种抗内毒素IgY含量和效价分别为 14 4mg ml和 1∶12 80 0 (J5 )、10 61mg ml和 1∶12 80 0(LPS)、9 2 6mg ml和 1∶3 2 0 0 (LipidA) ,抗体纯度均为 95 %左右。结论 大肠杆菌突变株J5和内毒素 (LPS)为最佳免疫抗原 ,免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量和效价最高。

抗鸡新城疫卵黄抗体IgY的研制

产蛋母鸡经新城疫灭活抗原重复免疫后,所产生的高免卵黄中,特异性抗体的HI效价可达到12log2以上。从高免卵黄中分离提纯的特异性新城疫抗体,病毒中和试验结果表明,具有明显的中和病毒的作用,特异性病毒中和指数可达到630957以上。使用纯化后的高免卵黄抗体(IgY)安全、高效、无任何不良反应。

基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用

用抗原免疫鸡 ,从鸡卵黄中获取特异多克隆IgY抗体 ,是一条高产量、低成本的简便快速途径。IgY与哺乳动物抗体IgG相比具有许多突出的优点 ,使IgY在现代免疫学中已得到广泛应用。采用基因免疫方法制备的基因专一性IgY抗体 ,在免疫分析、寻找药靶和生物标记物、制备新抗体等方面 ,必有进一步的应用。

鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性

目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。 方法 拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后 ,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y。采用间接 ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。 结果 ELISA显示免疫后 12天开始出现特异性抗体 ,且抗体滴度逐渐升高 ,约在免疫后 6 0天左右 ,最高可达 1:10 0 0 0 0 ,此最高滴度可维持 30天 ,以后滴度逐渐降低 ,至免疫后 10 0～ 110天 ,滴度仍可维持在最高滴度的一半 ( 1:50 0 0 0 )。此抗体在 10～ 6 5℃温度范围内活性保持稳定 ;在 p H为 4～ 12范围内 ,抗体活性稳定 ;此抗体经胰蛋白酶处理 1h内 ,活性下降不明显 ,但 1h以后活性迅速下降。 结论 从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y,是可行的 ,稳定的。

孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育研究

卵黄总免疫球蛋白Y（IgV）含量可以作为鸡胚健康状态的一种标志。本试验旨在研究孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育规律。选取正常孵化的2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、21日胚龄种蛋各20个，对胚蛋、胚体、心脏、肝脏、肌胃、肠道等进行分离和称重，构建鸡胚生长模型；采集卵黄并制备卵黄总IgY样品，

抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价、高特异性的抗人胱抑素C鸡卵黄IgY抗体,并对其基本特性进行分析和鉴定。方法:以人胱抑素C为抗原免疫产蛋的罗曼鸡,采用水稀释-盐析法提取及纯化IgY抗体,采用蛋白质定量、SDS-PAGE、West ern印迹和ELISA法对IgY抗体进行分析和鉴定。结果:免疫后14 d即可从鸡冠血中检测出抗胱抑素C的特异性抗体,抗体效价在28 d达最高峰(1∶32 000),并可维持2个月以上;收集高效价时的免疫鸡蛋,制备鸡卵黄抗体IgY;还原性SDS-PAGE显示抗体IgY为相对分子质量分别为65×103和21×103的2条带,抗体纯度可达92%,得率为每个鸡蛋36.5 mg,抗体检出敏感度为15.63 ng/mL;Western印迹证明该抗体具有高度特异性。结论:制备了抗胱抑素C的高效价、高特异性IgY抗体。

鸡卵黄免疫球蛋白Y的性质

用ＥＬＩＳＡ技术研究了鸡卵黄免疫球蛋白Ｙ（ＩｇＹ）对温度、酸碱度、胃蛋白酶、胰蛋白酶及反复冻融的稳定性。结果表明：ＩｇＹ具有良好的热稳定性，对酸碱具有一定的耐受力，对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力（ｐＨ＞４）。对胰蛋白酶非常敏感，经１ｈ酶解处理，ＩｇＹ的结合活性完全丧失。ＩｇＹ具有很好的耐反复冻融的特性，即使经过５次反复冻融，其抗原结合活性也几乎未受损失。

抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备

目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果 母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论 本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157∶H7抗体的制备与特性研究

目的：研究制备特异性抗E.coli O157：H7鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）及酶标记抗体（IgY-HRP）的工艺条件。方法：分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡，水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY，再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记，各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果：可获得纯度为79．6％～85．3％的IgY，提取率74％～77％；过碘酸钠氧化法标记效果较好，IgY-HRP（1mg／ml）最高效价640。结论：免疫制备IgY方法可行，过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。

抗大肠杆菌O157鸡卵黄抗体的初步研究

目的以煮沸15min灭活后的大肠杆菌O157为抗原,分4次免疫产蛋鸡,获取高免卵黄。经水稀释法去脂、超滤、盐析等粗分离,DEAESephadexA-50离子交换层析纯化,得到产物IgY为电泳单点纯,且仍保持效价在1∶104以上。从分离纯化过程中的跟踪检测表明,其卵黄制备的IgY抗体产量多、效价高、特异性强,可进一步用于大肠杆菌感染的检测研究。

鸡卵黄免疫球蛋白分离纯化方法的研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)用于免疫学检测有许多优点,要求对IgY在去脂后进行纯化。作者在本文中就已建立的IgY分离纯化方法(离子交换色谱、疏水作用色谱、嗜硫色谱和亲和色谱等)作了综述。

卵黄抗体IgY在猪生产中的应用

卵黄抗体(YolkImmunoglobulin,IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。

四种鸡卵黄免疫球蛋白纯化方法的研究

本文比较了分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的四种方法(即水稀释法,聚乙二醇法,葡聚糖硫酸盐法和黄原胶法)。包括IgY产量,纯度,活性,简便性及扩大生产规模的潜力。试验表明:水稀释法(DS)产量最高,然后依次为葡聚糖硫酸盐法(DS),黄原胶法(Xan),聚乙二醇法(PEG);同时发现水稀释法简便、快速、高效,适用于工业化生产。

卵黄抗体IgY用于诊断和治疗的研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白（eggyolk immunoglobulin）又称IgY或卵黄抗体，是用特异性抗原注射未经免疫的产蛋母鸡后．母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中，成为蛋黄中唯一存在的抗体。近年来卵黄抗体逐渐引起人们的注意，而且得到越来越广泛的应用．主要与其生物学的优势及其制备简单，保存方便等优点有关。

水稀释法分离鸡卵黄免疫球蛋白的研究

本研究详细探讨了水稀释法分离鸡卵黄免疫球蛋白(ImmunoglobulinofYolk:IgY)的主要工艺条件,当蛋黄液的稀释倍数为6、pH5.2时,IgY的提取率和纯度分别是6.73mgIgY/ml蛋黄、14.66%。比较了水稀释法和聚乙二醇法分离IgY的效果。结果表明,水稀释法更适合于大规模分离食品级IgY。

抗弓形虫特异性鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白 ( yolkimmunoglobulin ,IgY)抗体 ,为弓形虫病防治的研究探索新的方法和途径 ;方法 用提纯的弓形虫RH株抗原免疫育龄种鸡 ,获取大量含高效价IgY的卵黄 ,经水稀释法初步纯化浓缩后 ,用ELISA检定其免疫学活性 ,应用SDS -PAGE分析、鉴定IgY的分子基础 ;结果 获得ELISA效价为 1× 10 7的抗弓形虫IgY抗体 ,经SDS -PAGE分析 ,出现 1条蛋白带 ,其分子量大小根据电泳迁移率计算 ,初步鉴定为 4 6kDa用弓形虫抗原免疫Lyh ern种鸡制备的IgY抗体效价高、特异性强 ;水稀释法初步提纯获得的IgY抗体分子量为 4 6kDa,为在弓形虫病的特异性免疫学诊断、预防和治疗中的应用奠定基础。

抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白耐酸碱性的研究

在pH2～12不同酸碱度环境中37℃保温0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h后对抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的中和效价、分子结构变化及其耐酸耐碱性进行了测定。结果显示,在pH2～9范围内,37℃保温至4h,抗轮状病毒IgY的中和效价无明显变化,SDS-PAGE非还原性电泳图中未出现降解带;pH≥10时,37℃保温至1h,中和抗体效价即开始下降,电泳图中出现降解带,pH达11、12时处理1h以上样品则全部降解,生物活性丢失。提示抗轮状病毒IgY的耐酸性较耐碱性强,能耐受正常人体消化道内酸碱度。为制备成口服制剂提供试验依据。