NDV F与ChIL-18融合基因“自杀性”质粒的构建

根据GeneBank公布的鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株F基因和鸡源性白细胞介素18(ChIL-18)基因序列分别设计特异性引物,且在鸡NDV F基因引物上游引入BamHⅠ位点、下游引入SalⅠ位点,在Ch IL-18基因引物上游引入SalⅠ位点、下游引入HindⅢ、BamHⅠ位点。以鸡新城疫病毒Lasota株RNA为模板RT-PCR扩增其F基因,将F基因插入pMD18-T的BamHⅠ与SalⅠ位点中。同时扩增上游带有SalⅠ位点、下游带有HindⅢ、BamHⅠ位点的ChIL-18基因,并将其插入到含有F基因的pMD18-T质粒的SalⅠ、HindⅢ位点之间,从而使NDV F基因与ChIL-18基因形成具有一个完整阅读框的融合基因,然后将融合基因片段定向克隆到pSFV单一启动子(CMV)下游,构建成F-ChIL-18融合基因重组"自杀性"质粒pSFV-F-ChIL-18。