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蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响
被引量:
2
1
作者
万学瑞
杨润霞
+2 位作者
王川
刘桂林
吴润
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期985-992,共8页
为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处...
为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处理以抑制CK2,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因mRNA转录。结果显示,DF-1-PrP、DF-1-SiRNA-3和DF-1细胞的PRNP基因mRNA转录量随着米托蒽醌浓度的增加均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在同一米托蒽醌浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于DF-1细胞,总凋亡率均低于DF-1细胞;DF-1-SiRNA-3细胞则相反。表明ChPrP^C的高表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,而ChPrP^C的低表达则相反;CK2在ChPrP^C介导DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中具有重要的作用。本研究结果为进一步阐明ChPrP^C生理功能的分子机制奠定基础。
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关键词
蛋白
激酶2
鸡朊蛋白
DF-1细胞系
米托蒽醌
凋亡
下载PDF
职称材料
PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响
被引量:
2
2
作者
万学瑞
朱曼玲
+3 位作者
杨润霞
刘桂林
刘磊
吴润
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1844-1850,共7页
为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100...
为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100、200nmol·L-1渥曼青霉素处理以抑制PI3K/Akt信号通路,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因转录量。结果显示,随着渥曼青霉素浓度的增加,DF-1-PrP、DF-1-NC和DF-1细胞的PRNP基因转录量均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在低于100nmol·L-1的同一渥曼青霉素浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于对照组,而总凋亡率均低于对照组。本研究表明ChPrPC的过量表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,在以上过程中,PI3K/Akt信号通路可能具有重要的作用,渥曼青霉素能有效阻断这一通路,但PI3K/Akt信号通路并不是ChPrPC调节细胞凋亡的唯一途径。
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关键词
PI3K/AKT
鸡朊蛋白
DF-1细胞系
渥曼青霉素
凋亡
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职称材料
鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达
被引量:
1
3
作者
张天亮
吴润
+5 位作者
杨润霞
魏姣
万学瑞
刘霞
刘磊
张小丽
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期734-739,共6页
为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白(ChPrP),根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G+C含量等特点对目的基因PrP(25~248)进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目...
为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白(ChPrP),根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G+C含量等特点对目的基因PrP(25~248)进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目的片段,之后将两种目的片段分别连接于pPIC9K表达载体并转化至毕赤酵母GS115中,经PCR,选择培养基MM、MD方法鉴定表型后以甲醇进行诱导获得目的蛋白,最后以SDS-PAGE检测蛋白表达。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,成功构建了真核表达重组载体pPIC9K-PrP(25~248),并在毕赤酵母GS115中获得鸡朊蛋白,其与未经密码子优化的目的蛋白相比,具有更高的表达量。本研究通过毕赤酵母表达系统成功获得了鸡朊蛋白,为后续研究奠定了基础,也通过密码子优化前后蛋白表达量比对,再一次证实毕赤酵母具有较高的密码子偏好性。
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关键词
鸡朊蛋白
PPIC9K
毕赤酵母GS115
真核表达
原文传递
题名
蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响
被引量:
2
1
作者
万学瑞
杨润霞
王川
刘桂林
吴润
机构
甘肃农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期985-992,共8页
基金
国家自然科学基金(31160510)
甘肃农业大学动物医学院教研产学支持计划(JYCX-KX009)
文摘
为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处理以抑制CK2,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因mRNA转录。结果显示,DF-1-PrP、DF-1-SiRNA-3和DF-1细胞的PRNP基因mRNA转录量随着米托蒽醌浓度的增加均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在同一米托蒽醌浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于DF-1细胞,总凋亡率均低于DF-1细胞;DF-1-SiRNA-3细胞则相反。表明ChPrP^C的高表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,而ChPrP^C的低表达则相反;CK2在ChPrP^C介导DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中具有重要的作用。本研究结果为进一步阐明ChPrP^C生理功能的分子机制奠定基础。
关键词
蛋白
激酶2
鸡朊蛋白
DF-1细胞系
米托蒽醌
凋亡
Keywords
casein kinase 2 · chicken PrPc · DF-1 cells
mitoxantrone
apoptosis
分类号
S831.1 [农业科学—畜牧学]
S852.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响
被引量:
2
2
作者
万学瑞
朱曼玲
杨润霞
刘桂林
刘磊
吴润
机构
甘肃农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1844-1850,共7页
基金
国家自然科学基金(31160510)
甘肃省自然科学研究基金计划项目(1107RJZA198)
甘肃农业大学动物医学院教研产学支持计划(JYCX-KX009)
文摘
为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100、200nmol·L-1渥曼青霉素处理以抑制PI3K/Akt信号通路,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因转录量。结果显示,随着渥曼青霉素浓度的增加,DF-1-PrP、DF-1-NC和DF-1细胞的PRNP基因转录量均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在低于100nmol·L-1的同一渥曼青霉素浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于对照组,而总凋亡率均低于对照组。本研究表明ChPrPC的过量表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,在以上过程中,PI3K/Akt信号通路可能具有重要的作用,渥曼青霉素能有效阻断这一通路,但PI3K/Akt信号通路并不是ChPrPC调节细胞凋亡的唯一途径。
关键词
PI3K/AKT
鸡朊蛋白
DF-1细胞系
渥曼青霉素
凋亡
Keywords
PI3K/Akt
chicken PrPC
DF-1 cells
wortmannin
apoptosis
分类号
S852.3 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达
被引量:
1
3
作者
张天亮
吴润
杨润霞
魏姣
万学瑞
刘霞
刘磊
张小丽
机构
甘肃农业大学动物医学学院
甘肃农业大学生命科学技术学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期734-739,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31160510)
甘肃省自然科学研究基金计划项目(1107RJZA198)
文摘
为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白(ChPrP),根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G+C含量等特点对目的基因PrP(25~248)进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目的片段,之后将两种目的片段分别连接于pPIC9K表达载体并转化至毕赤酵母GS115中,经PCR,选择培养基MM、MD方法鉴定表型后以甲醇进行诱导获得目的蛋白,最后以SDS-PAGE检测蛋白表达。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,成功构建了真核表达重组载体pPIC9K-PrP(25~248),并在毕赤酵母GS115中获得鸡朊蛋白,其与未经密码子优化的目的蛋白相比,具有更高的表达量。本研究通过毕赤酵母表达系统成功获得了鸡朊蛋白,为后续研究奠定了基础,也通过密码子优化前后蛋白表达量比对,再一次证实毕赤酵母具有较高的密码子偏好性。
关键词
鸡朊蛋白
PPIC9K
毕赤酵母GS115
真核表达
Keywords
chicken prion protein(PrP)
pPIC9K
Pichia pastoris GS115
eukaryotic expression
分类号
S852.659.7 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响
万学瑞
杨润霞
王川
刘桂林
吴润
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
下载PDF
职称材料
2
PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响
万学瑞
朱曼玲
杨润霞
刘桂林
刘磊
吴润
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
下载PDF
职称材料
3
鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达
张天亮
吴润
杨润霞
魏姣
万学瑞
刘霞
刘磊
张小丽
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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