张家口市鸡柔嫩艾美耳球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药性

为了解张家口市鸡柔嫩艾美耳球虫耐磺胺氯吡嗪钠的情况,试验选取张家口市坝下地区蔚县、宣化区和坝上地区张北县、沽源县以磺胺氯吡嗪钠作为抗球虫药的养鸡场进行球虫耐药性检测。从采集的粪便样本中进行卵囊分离,宣化区和张北县粪便样本中检出球虫卵囊,蔚县和沽源县未检出卵囊。将检出卵囊的粪便样本进行卵囊分离保存,经耐药性试验发现,宣化地区柔嫩艾美耳球虫株对磺胺氯吡嗪钠的敏感浓度为9.6mg/kg,张北县为4.8mg/kg。本次试验结果可为张家口市养鸡场防治鸡柔嫩艾美耳球虫的给药浓度提供一定数据支持,有效缓解因球虫耐药性对养鸡产业造成的危害及经济损失。

鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7蛋白的原核表达及SIgA抗体间接ELISA检测方法建立

【目的】建立检测鸡肠道黏膜柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法以期对鸡柔嫩艾美耳球虫特异性黏膜免疫水平进行评价。【方法】将鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC 2和SO 7基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体,构建EtMIC2-SO7重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。采用镍柱亲和层析法对EtMIC2-SO7重组蛋白进行纯化,用Bradford法测定蛋白浓度。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定法,确定ELISA检测抗原、待检黏膜的最佳工作浓度,通过单一变量法确定最佳待检黏膜孵育时间、封闭液种类、酶标二抗、显色液工作条件,参照ELISA抗体检测试剂盒阴阳性判定标准,以S/P≥0.4为阳性,S/P<0.4为阴性作为黏膜样品阴阳性判定标准,对ELISA检测方法的重复性、特异性、敏感性进行验证并与鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白包被ELISA板检测结果进行符合率比较。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示,获得大小约70 ku的EtMIC2-SO7重组蛋白,与预期结果相符。ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,待检黏膜最适稀释度为1∶40,待检黏膜最适孵育时间为2 h,最适封闭液为5%脱脂奶粉,最适酶标二抗稀释度为1∶100000,最适反应时间为1 h,最适显色时间为15 min;批内、批间重复性试验变异系数均<10%;与新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒特异性SIgA抗体无交叉反应性;随机选择2份阳性肠道黏膜样品进行敏感性试验,稀释浓度为1∶80时2份样品仍判定为阳性,说明该检测方法敏感性较好;将EtMIC2-SO7重组蛋白和鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白分别包被ELISA板,检测18份肠道黏膜样品,结果表明EtMIC2-SO7重组蛋白包被ELISA板与球虫全蛋白包被ELISA板符合率可达88.9%(16/18)。【结论】本研究采用原核表达系统成功表达并纯化EtMIC2-SO7重组蛋白,并将其作为ELISA包被抗原,成功建立重复性好、特异性强、敏感性高的鸡柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法,为球虫黏膜免疫疫苗评价提供了初步检测方法。

几种中草药复方制剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫的研究

研究了几种中草药制剂对抗鸡艾美耳球虫的效果,结果表明:白头翁苦参散和五草汤被认为是最有效的抗球虫药物,但这5种药物均有100%的保护率;柔嫩艾美耳球虫对这几种药物均有不同程度的耐药性,在药物预防过程中应采取轮换用药方案。

鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究

运用单卵囊分离提取技术,从绵阳某鸡场艾美虫感染粪便中获得1株纯种艾美虫卵囊,该艾美虫主要寄生在鸡盲肠,卵囊绝大多数呈宽卵圆形,无卵膜孔,有1个圆形极粒位于窄端,无内外残体,孢子囊有斯氏体,最短孢子化时间为19 h。通过随机测定200个卵囊后发现,卵囊的大小为(18.4～25.5)μm×(14.6～20.2)μm,平均大小为(21.62±2.08)μm×(18.15±1.83)μm;随机测定200个孢子囊后发现,孢子囊大小为(10.5～12.6)μm×(5.1～6.8)μm,平均大小为(11.77±0.87)μm×(6.29±0.69)μm。雏鸡在感染后5 d开始拉血便,6 d后症状加剧,鸡出现死亡。对照国内外相关文献,初步确定分离出来的艾美虫为鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。对分离虫株卵囊致病性的研究结果表明,鸡一旦感染,其体重会受到影响,严重感染则会造成大量死亡。随着卵囊感染量增多,雏鸡死亡率也随之增高,当雏鸡感染量为8.0万个卵囊时致死率高达100%,表明所分离的柔嫩艾美耳球虫绵阳株致病力很强。

间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立

为了快速检测免疫球虫后宿主血清中特异性抗体的水平,以DE-52层析纯化子孢子、裂殖子,超声裂解获取可溶性蛋白;原核表达EtMIC4-N蛋白,致敏戊二醛醛化后的红细胞,以人工免疫柔嫩艾美耳球虫后分离的血清为阳性血清,以SPF鸡分离的血清为阴性血清,建立柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验。结果显示,稀释度为1:2万鞣酸处理戊二醛醛化后的红细胞,使用100μg/mL可溶性裂殖子、子孢子蛋白或12.5μg/mL表达的重组蛋白EtMIC4-N均可以与阳性血清发生反应(可达1:1024),与鸡的阴性血清及大肠杆菌病的阳性血清无反应.与堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫阳性血清有微弱反应(不超过1:8)。试验证明,该方法具有简单、方便、快捷、灵敏等优点。

复方球立清等四种药物治疗鸡柔嫩艾美耳球虫的笼饲试验(一)

球虫病一直是危害现代家禽生产的主要问题之一.目前畜禽的球虫病主要依靠药物预防为主.然而,由于不合理使用,畜禽球虫对一些药物添加剂产生耐药性,使一些抗球虫药物的防治效果降低或无效,致使养鸡生产中球虫病还是经常发生,并造成重大的经济损失.……

复方球立清等四种药物治疗鸡柔嫩艾美耳球虫的笼饲试验(二)

鸡球虫病是危害养鸡业主要疾病之一,尽管经过几代人的努力,但是鸡球虫病依然时常发生.目前鸡球虫病主要依靠药物预防为主.然而,由于耐药性、制剂技术、原料质量及其它一些不合理用药因素,往往造成抗球虫药物药效降低.……

鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株的放松传代及其特性研究

为了进一步验证鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株经本动物(鸡)连续传代后的毒力和遗传稳定性,为虫种种子传代提供依据,试验对鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株(Etpp)用11日龄敏感鸡连续放松传代10次,其潜隐期、排卵囊高峰、卵囊产量、致病性和免疫原性均保持了早熟耐药株(Etpp)的特征,说明所选育的虫株(Etpp)在遗传上具有稳定性。

表达鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原TATA4与鸡IL-IL-2的侵入型乳酸菌构建及鉴定

为探究鸡柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)表面抗原TA4在植物乳杆菌NC8的表达情况,使用PCR扩增TA4片段,同时使用细胞因子ChIL-2作为免疫佐剂,应用猪圆环病毒2A肽(P2A)序列使抗原与免疫佐剂共表达,连接有金黄色葡萄球菌的纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)的409载体,构建两株重组侵入型乳酸菌NC8 pSIP 409-FnBPA-pgsA′-TA4和NC8 pSIP 409-FnBPA-pgsA′-TA4-IL2。使用自制多克隆抗体通过Western blot检测重组菌的蛋白表达情况。结果表明,两种侵入型目的蛋白TA4和IL-2使用多克隆抗体检测均可成功检测到蛋白表达,为后期动物试验及益生菌口服疫苗的制备奠定了基础。

中草药微生态制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫防控效果的研究

为探究中草药微生态制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫预防效果,将200只1日龄白羽肉鸡随机分成5组,分别为中草药微生态制剂组、磺胺药组、地克珠利组、不感染不用药组、感染不用药组。将各种药物按照有效添加量与饲料混合,中草药微生态制剂组的有效添加量为2g/kg,地克珠利组的有效添加量为1g/5kg,持续添加20d后,用柔嫩艾美耳球虫分离株孢子化卵囊感染鸡,再持续添加8d,磺胺药组的有效添加量为2g/kg,在感染球虫后持续使用3d,检测抗球虫指数、细胞因子水平、肠道病理变化等指标评价其抗球虫效果。结果显示:相较于磺胺、地克珠利,中草药微生态制剂能够降低鸡的死亡率,抗球虫指数能达到176.57,显著提高了IFN-γ、IL-2、IgG、SIgA表达水平,降低盲肠病变损伤程度,说明该中草药微生态制剂可有效防控鸡球虫病。

鸡柔嫩艾美耳球虫丝氨酸羟甲基转移酶DNA疫苗免疫保护效果研究

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的原虫病。为了检验pVAX-DNA疫苗的保护效果,采用大提质粒和纯化质粒的方法大量制备目的基因疫苗。试验设为4组,分别为:感染非免疫组、非感染非免疫组、pVAX-丝氨酸羟甲基转移酶DNA组、pVAX空质粒组,14日龄首免,21日龄二免,28日龄攻虫5×104/只,35日龄扑杀鸡只后通过相对增重率、鸡只死亡率、克盲肠卵囊值(OPG)、盲肠病变计分等指标,综合计算疫苗抗球虫指数(ACI),进而判断疫苗的保护效果。结果表明:该疫苗ACI值为146.99,具有一定的的免疫保护效果。

紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析

为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5%紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术(SSH)筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因。结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因(Unigenes),其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配。为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用。本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考。

鸡柔嫩艾美耳球虫裂殖子体外培养的形态学观察

鸡球虫病是由艾美耳属的柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella）等多种球虫混合或单独感染鸡肠道而引起的一种肠道细胞内寄生性原虫病。鸡球虫子孢子和第二代裂殖子阶段对宿主的病理损害最为突出，虫体抗原性最强。因此，对球虫第二代裂殖子的研究是球虫病研究的一个重要组成部分，是研究球虫分子生物学、免疫学、生物化学、细胞培养和抗药性的基础。笔者试验用柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊口服感染15日龄经检测球虫感染为阴性的雏鸡，感染120h后剖杀取出盲肠，依次通过机械研磨、酶消化和裂解红细胞、离心洗涤、抽滤、离心浓缩等方法成功获得大量纯化的裂殖子，对裂殖子进行体外培养，通过染色镜检观察不同培养时间虫体的形态学变化，尝试能否用此方法进行球虫耐药性测定试验，现将试验和观察结果报道如下。

二氧化氯对鸡柔嫩艾美耳球虫病的防治效果研究

为了探究二氧化氯(ClO_(2))对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)的防治效果,试验使用1.2,0.6,0.12,0.06,0.012 g/L的ClO_(2)水溶液和2.5%的K_(2)Cr_(2)O_(7)溶液(空白对照)孵育E.tenella,在培养第15,20,25,30小时统计E.tenella孢子化率。另外,使用1.2,0.6,0.3,0.15 g/L ClO_(2)水溶液按体重1 mL/kg直接灌服雏鸡,观察鸡群的死亡情况及肠道的损伤情况。另使鸡群内服浓度为0.24 g/L的ClO_(2)水溶液及1.0×10^(5)个E.tenella GD株孢子化卵囊,观察ClO_(2)的抗球虫效果,统计抗球虫指数(ACI)。结果表明:用0.12~1.2 g/L的ClO_(2)水溶液培养15~30 h,E.tenella孢子形态发生变化,孢子化率均为0;雏鸡内服浓度为1.2,0.6,0.3,0.15 g/L的ClO_(2)水溶液后均未见死亡且肠道组织均无损伤;感染E.tenella的鸡只内服浓度为0.24 g/L的ClO_(2)水溶液后,其ACI值为163.00,即ClO_(2)为中效抗球虫药,具有一定的抗球虫效果。说明高浓度的ClO_(2)水溶液长时间作用对E.tenella卵囊有明显的抑杀效果,且效果稳定,直接内服ClO_(2)水溶液有明显的抗E.tenella作用,且无毒、安全。

博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果试验

为了探究植物提取物博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的预防效果,本试验通过建立鸡柔嫩艾美耳球虫感染模型,进行预防给药,再采用计算抗球虫指数和测定血清中部分生化指标的试验方法,综合探究博落回散对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的预防效果。试验结果表明,博落回散200 mg/kg、400 mg/kg、800 mg/kg和1600 mg/kg添饲预防鸡球虫病效果不明显,其中800 mg/kg组的综合表现优于其余各组。

鸡柔嫩艾美尔球虫基因重组疫苗的研究现状

鸡球虫病是鸡主要的寄生虫病,柔嫩艾美耳球虫是毒力最强的球虫病病原,给养鸡业造成巨大的经济损失,防治该病的疫苗有强毒苗、弱毒苗和基因工程苗。由于活疫苗有自身无法克服的缺点,基因工程疫苗受到极大重视,特别是重组表达亚单位疫苗和重组DNA疫苗,论文对这两种基因重组疫苗的研究现状进行综述。

肉鸡盲肠球虫病原体的分离鉴定及致病性研究

运用单卵囊分离提取技术,从吉林发生球虫病的鸡场收集粪便及病死鸡中获得1株纯种艾美尔球虫卵囊,卵囊绝大多数呈宽卵圆形,无卵膜孔,有1个圆形极粒位于窄端,无内外残体,孢子囊有斯氏体,最短孢子化时间为19 h.通过随机测定200个卵囊,平均大小为（21.62±2.08）μm×（18.15±1.83）μm;随机测定200个孢子囊平均大小为（11.77±0.87）μm× （6.29±0.69）μm.雏鸡在感染后5 d开始拉血便,6 d后症状加剧,鸡出现死亡.对照国内外相关文献,鉴定为鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）.对分离虫株卵囊致病性的研究结果表明,鸡一旦感染,其体重会受到影响,严重感染则会造成大量死亡.随着卵囊感染量增多,雏鸡死亡率也随之增高,当雏鸡感染量为8.0万个卵囊时致死率高达100%,表明所分离的柔嫩艾美耳球虫吉林株致病力很强.

3味中草药复方制剂对柔嫩艾美耳球虫的预防效果试验

为了探究常山、槟榔和甘草3味中草药制成的复方制剂预防柔嫩艾美耳球虫感染鸡的效果,试验通过建立鸡柔嫩艾美耳球虫感染模型,将复方制剂按0.25g/kg、0.5g/kg、1g/kg和2g/kg4个剂量组对感染鸡只进行饲喂。通过存活率、相对增重率、盲肠病变、卵囊值以及抗球虫指数等指标来评价复方制剂预防鸡感染柔嫩艾美耳球虫的效果。试验结果显示,复方制剂中高剂量组的效果为161,抗球虫药效达到中等,复方制剂低剂量组、中剂量组和高剂量组的药效分别为149、152和153,均达到了抗球虫的标准。

GSNO对E.tenella内LDH、G-6-PD、ACO和SOD活性的影响

亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊的孢子生殖具有不可逆地抑制作用,但其作用机理尚不清楚。本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳来分析GSNO对E.tenella卵囊内与糖代谢有关的乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、乌头酸酶(ACO)以及GSNO对卵囊内与抗氧化有关的超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,电泳后经特异染色显示酶活性。结果表明:GSNO处理的未孢子化与孢子化卵囊中均有LDH、G-6-PD、ACO及SOD活性,这提示外源性NO对球虫孢子生殖的抑制并没有灭活卵囊中LDH、G-6-PD、ACO和SOD的活性或NO对这些酶的作用是可逆的。