鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究

【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性.

重组鸡白细胞介素18对不同基因型新城疫病毒HN基因表达蛋白免疫活性的影响

白细胞介素18（IL-18）是被广泛研究的细胞因子佐剂之一。研究选择了IL-18作为纯化蛋白多肽的佐剂，观察其对多肽疫苗的免疫应答作用，从而为研制新型的多肽疫苗奠定一定的理论基础。

人工分子伴侣辅助鸡白细胞介素18重组蛋白的复性

目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达产物主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性。复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性。结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带。利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42·54%复性率。鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用。结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率。其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础。

白细胞介素-33在痛风中的作用研究进展

痛风是由单钠尿酸盐晶体在关节和关节周围组织中沉积引发的炎症性疾病。白细胞介素(IL)-33是IL-1家族成员之一,当组织受损时以警报素的形式释放,与ST2受体结合发挥免疫调节功能。综述近年来IL-33在痛风中的作用研究进展,发现IL-33可通过影响免疫细胞的募集,调控炎症因子的释放参与痛风的发病过程,表现出双向免疫调节作用,既能加重炎症反应,又有助于炎症缓解。

老年抑郁症患者血清脑源性神经生长因子、P物质和白细胞介素-18的表达及意义

目的检测抑郁症老年患者血清中脑源性神经生长因子(BDNF)、P物质(SP)和白细胞介素(IL)-18的表达,分析其相关性及临床意义。方法 59例确诊为抑郁症的老年人为观察组,经体检证实无明显器质性疾病和精神疾病的成年人血清标本24例为对照组。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清BDNF、SP和IL-18表达量。结果观察组血清中BDNF表达明显低于对照组,血清SP和IL-18表达明显高于对照组(P<0.05)。观察组BDNF、SP和IL-18表达与发病时间、病变严重程度及是否首发密切相关。相关分析显示观察组SP和IL-18表达呈正相关。结论抑郁症老年患者血清中BDNF、SP和IL-18的表达异常,与病变的形成和进展密切相关,SP和IL-18之间可能有一定的协同作用。

中性粒细胞与淋巴细胞比值和白细胞介素-18与急诊输尿管结石患者发生尿源性脓毒症的相关性

目的分析急诊输尿管结石患者中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)和白细胞介素-18(IL-18)与急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症的相关性。方法采用回顾性病例对照研究方法,将2018年1月至2021年12月北京大学国际医院急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症的45例患者纳入脓毒症组,另将同期45例急诊输尿管结石术后未并发尿源性脓毒症患者纳入非脓毒症组。所有患者均接受输尿管镜碎石术治疗,入院时患者均接受NLR和IL-18检查。统计患者基线资料,分析NLR、IL-18与急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症的相关性。结果脓毒症组鹿角型结石患者占比高于非脓毒症组,差异有统计学意义(22.22%vs.4.44%,P<0.05);脓毒症组NLR(11.13±3.05 vs.8.75±2.39)、IL-18(μg/L:95.42±15.35 vs.79.69±12.57)、血白细胞计数(WBC)(×109/L:16.88±4.57 vs.14.39±4.85)和C-反应蛋白(CRP)(mg/L:105.43±15.57 vs.97.84±11.34)水平高于非脓毒症组,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析显示,鹿角型结石和NLR、IL-18、血WBC高表达是急诊输尿管结石患者术后并发脓毒症的危险因素(OR=17.126、1.428、1.096、1.162、1.041,P<0.05);ROC曲线显示,NLR和IL-18单独及联合预测急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症的AUC分别为0.760、0.784、0.814,有一定预测价值,其中联合预测价值最高;NLR和IL-18与急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症的关联强度呈线性剂量反应关系(P<0.05);NLR和IL-18与急诊输尿管结石术后并发尿源性脓毒症呈正相关,特别是当血清NLR>9.740、血清IL-18>84.50μg/L时,急诊输尿管结石患者术后并发尿源性脓毒症风险随血清NLR和IL-18升高而升高。结论急诊输尿管结石患者血清NLR和IL-18与术后并发尿源性脓毒症密切相关。

鸡白细胞介素18成熟蛋白全长基因的克隆与序列测定

根据已发表的鸡白细胞介素 18(IL- 18)成熟蛋白的 c DNA序列 ,设计 1对特异性引物 ,应用 RT- PCR从脂多糖(L PS)刺激 10 h活化的 MDCC- MSB1细胞中克隆到编码鸡 IL - 18成熟活性蛋白的完整基因片段 ,其大小为 5 10 bp。经序列测定证实 ,所获得的 c DNA基因序列与文献报道的结果完全一致 ,从而为进一步研究鸡 IL- 18的基因表达、生物学活性以及应用奠定了基础。

鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备

将编码鸡白细胞介素 - 18(interleukin- 18,IL- 18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体 p PROEXTMHT中 ,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌 DH5α并用 IPTG于 37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体蛋白的 30 %。 SDS- PAGE和 Western blot分析显示 ,表达的鸡 IL-18融合蛋白相对分子质量约为 2 30 0 0。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IL- 18融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射豚鼠 ,制备豚鼠抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡 IL- 18融合蛋白 ,并制备了抗鸡 IL- 18多克隆抗血清 ,为下一阶段关于鸡 IL -

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。

白细胞介素18和鸡白细胞介素18

白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 18具有多种生物学功能 ,它不仅可以增强 Th1型免疫反应 ,而且在 Th2型免疫反应中也发挥一定的作用。人类医学研究证明 IL- 18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力。在集约化畜禽养殖业中 ,包括白细胞介素 18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂 ,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型治疗剂。鸡 IL- 18基因是最近才被发现的 ,由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能 ,因而鸡 IL- 18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。

海兰鸡白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

通过RT-PCR方法从用植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出海兰鸡白细胞介素18(IL-18)成熟蛋白基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy Vector载体上,DNA序列测定表明,克隆得到的海兰鸡ChIL-18 cDNA基因全序列包括终止密码子在内其编码区大小为510 bp,编码169个氨基酸多肽.将该基因片段克隆到原核表达载体pQE30构建重组质粒pQE30-ChIL-18,转化大肠杆菌M15,并用IPTG诱导.重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为19 000的重组蛋白.

实验性鸡葡萄球菌性关节炎的发病机制——血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和类风湿因子的动态变化

8周龄健康肉鸡 6 0只随机分成 2组 ;其中试验组 4 5只 ,对照组 15只。试验组每只鸡经关节腔注射鸡源致病性金黄色葡萄球菌 2 .5× 10 9CFU,复制鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型 ,研究血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 6 (IL- 6 )、类风湿因子 (RF)的动态变化。结果表明 :接种后鸡血清中 RF水平自第 1天开始明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,第 2 8天达到峰值 5 .5。血清中 TNF-α的含量与对照组相比 ,在接种后第 3、5天差异显著 (P<0 .0 5 ) ,第 14天差异极显著 (P<0 .0 1) ;血清中 IL- 6的含量在第 2周上升的幅度最大 ,随后持续至少 3周 ,第 14天开始该因子水平显著高于对照组 (P<0 .0 1)。 3种细胞因子的含量均与关节炎的发展程度成正相关。

急性特发性血小板减少性紫癜患儿外周血血小板相关抗体和白细胞介素18的检测

目的检测急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿治疗前后外周血血小板相关抗体(PAIgG)和白细胞介素18(IL-18)的变化,分析IL-18和PAIgG在急性ITP患儿发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测外周血PAIgG表达含量,ELISA法检测血浆中IL-18的含量,血细胞分析仪计数血小板(PLT)数量。结果急性ITP组治疗前PLT数量明显低于治疗后及对照组,差别均有统计学意义(P<0.01),治疗后PLT数量与对照组比较,差别无统计学意义(P>0.05);治疗前PAIgG表达量明显高于治疗后及对照组,差别均有统计学意义(P<0.01),治疗后的PAIgG表达量高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05);治疗前IL-18含量均低于治疗后及对照组,差别有统计学意义(P<0.01),治疗后与对照组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。PAIgG在治疗前后与血小板含量均呈负相关(r值分别为-0.87,-0.81,P<0.05),而IL-18含量在治疗前后与血小板含量均呈正相关(r值分别为0.76,0.74,P<0.05),IL-18含量和PAIgG表达在治疗前后均呈负相关(r值分别为-0.81,-0.79,P<0.05)。结论急性ITP患儿外周血中IL-18含量在治疗前后和PAIgG表达量有较好的相关性,IL-18的检测能够反映出急性ITP患儿外周血中PAIgG表达量的变化,PAIgG及IL-18在急性ITP发病机制中发挥了重要作用。

白细胞介素-10、脑源性神经营养因子水平与急性脑梗死神经功能受损和预后的关系

目的检测急性脑梗死(ACI)患者不同时期体内白细胞介素(IL)-10、脑源性神经营养因子(BDNF)水平变化,观察IL-10、BDNF与急性脑梗死患者神经功能受损状况和预后相关性。方法抽血化验对照组和ACI组发病第1、3、7、14、21、30天各时间段IL-10、BDNF水平变化并比较其相关性;50例ACI患者根据愈后差异分成3组,比较各组IL-10、BDNF、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、急性生理学及慢性健康状况评价(APACHEⅡ评分)、美国国立卫生研究所脑卒中量表(NHISS)评分、洼田饮水试验评分的差异。结果与对照组比较,ACI组第1、3、7、14、21、30天IL-10和BDNF均明显升高(P<0.05),在发病第3天IL-10达到高峰,发病第14天BDNF达到高峰,以后逐渐下降;ACI患者发病期间IL-10与BDNF无明显相关性(r=-0.067,P=0.899)。ACI患者发病第1天,愈后差者IL-10水平要高于愈后好和一般患者(P<0.05),而不同愈后组患者BDNF水平无显著差异(P>0.05)。结论 ACI第1天IL-10、GCS评分、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验评分值可预测患者预后。

白细胞介素-1α在髓核源性神经根性疼痛中的作用

目的:探讨白细胞介素-1琢(IL-1琢)是否参与髓核突出所致的坐骨神经疼痛的产生。方法:将大鼠自体尾椎的髓核无压迫下放置在L4和L5神经根表面,在术后不同时间测量大鼠后足对机械刺激敏感性的变化,同时用免疫组化方法对移植髓核中的IL-1琢进行检测。结果:在无明显机械压迫的情况下,大鼠腰神经根上放置自体髓核后,术侧后足可产生明显机械刺激痛觉过敏;实验组大鼠移植髓核组织中IL-1琢免疫组织化学染色阳性。结论:髓核组织的生物学作用是引起腰腿痛的重要因素,炎性介质IL-1琢可能参与疼痛的发生。

炎症性肠病患者肠黏膜白细胞介素18的表达及意义

目的 :探讨炎症性肠病患者肠黏膜白细胞介素 18(IL 18)的表达及与疾病活动性的关系。方法 :活动期克罗恩病 (CD)和溃疡性结肠炎 (UC)患者分别为 2 3例和 2 0例 ,其中CD 9例、UC 11例经药物 (SASP或SASP +糖皮质激素 )治疗后达缓解期 ;2 0例对照来自于非炎症性肠病患者手术切除之正常结肠组织。采用半定量RT PCR检测肠黏膜IL 18mRNA表达 ,免疫组化方法原位检测肠黏膜组织中IL 18蛋白表达量。结果 :活动期CD患者肠黏膜IL 18mRNA表达显著高于活动期UC和对照组 ,活动期UC与对照组比较差异无显著性。免疫组化显示肠黏膜上皮细胞和固有层单个核细胞 (主要是巨噬细胞和树突状细胞 )表达IL 18;活动期CD患者表达量显著高于活动期UC和对照 ,活动期UC与对照比较差异无显著性 ;缓解期CD患者IL 18表达与活动期相比显著下降 ,UC患者IL 18表达下降则差异无显著性。结论 :IL 18参与了炎症性肠病的发病过程 ,并与CD活动有关。

原发性高血压患者血清白细胞介素-18水平与颈动脉内膜中层厚度的相关性

目的探讨原发性高血压(EH)患者血清白细胞介素-18(IL-18)水平与颈动脉内膜中层厚度(CIMT)的相关性。方法入选EH患者80例,正常对照组55例。高分辨超声测定CIMT作为大血管动脉粥样硬化(AS)程度的指标,同时检测血清IL-18水平;分析IL-18与CIMT之间的关系。结果①与正常对照组相比,EH组的血清IL-18水平显著增高(P<0.01),CIMT显著增厚(P<0.01)。EH组内比较,CIMT正常亚组血清IL-18水平显著低于CIMT增厚亚组(P<0.01)。②直线相关分析显示,IL-18与CIMT呈正相关(P<0.01)。③以CIMT为因变量进行多重逐步线性回归分析,排除其他相关危险因素的干扰后,IL-18与CIMT的相关关系仍然存在(P<0.01)。④以CIMT增厚与否为因变量进行非条件Logistic逐步回归分析,筛选出IL-18为CIMT增厚的独立危险因素。结论血清IL-18水平与EH患者CIMT具有显著相关性,此相关性独立于其他相关危险因素,是EH患者CIMT增厚的独立危险因素。提示IL-18参与了EH患者AS病理过程,且其水平的高低与AS严重程度有关,可作为早期EH患者并发AS的预测及监测指标。

白细胞介素-18干预诱导的树突状细胞表型和活性研究

目的:研究白细胞介素-18(IL-18)干预诱导的树突状细胞(DC)的表型和活性。方法:自人外周血单核细胞诱导DC,第5d起分为IL-18组、TNF-α组和IL-18+TNF-α组,分别加IL-18、TNF-α及IL-18+TNF-α促成熟,用ELISA法测定上清中IL-12含量;用流式细胞仪测定培养8dDC的CD1a、HLA-DR、CD83及CD86的表达;用MTT法检测3组DC诱导T细胞增殖的作用。用ELISA法测定3组DC刺激T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)的量。结果:IL-18组与TNF-α组CD1a、HLA-DR、CD83及CD86表达无差异,IL-18+TNF-α组CD1a、CD83及HLA-DR阳性率高于IL-18组。IL-18+TNF-α组IL-12量高于IL-18组和TNF-α组(P<0.05)。IL-18组与TNF-α组DC刺激T细胞增殖作用无差异,IL-18+TNF-α组DC的作用强于IL-18组和TNF-α组。IL-18组和TNF-α组IFN-γ量无显著差异,IL-18+TNF-α组IFN-γ的量高于IL-18组和TNF-α组(P<0.05)。结论:IL-18干预诱导的DC高表达表面分子,具有明显的免疫刺激活性,IL-18与TNF-α合用作用更强。

低频重复经颅磁刺激对脑卒中所致抑郁症的疗效及对血清脑源性神经营养因子和白细胞介素-6的影响

目的观察低频重复经颅磁刺激对脑卒中后抑郁的疗效及对血清中脑源性神经营养因子(BDNF)和白细胞介素(IL)-6的影响。方法确诊的86例脑卒中后抑郁患者随机分为观察组和对照组各43例,对照组接受常规治疗,观察组在常规治疗基础上加用低频重复经颅磁刺激。共治疗4 w,观察治疗后抑郁评分的差异,观察治疗前、后血清中BDNF和IL-6的变化。结果观察组治疗后抑郁评分明显低于对照组,两组治疗前血清中BDNF和IL-6的表达差异无统计学意义(P>0. 05),治疗后BDNF表达显著升高(P<0. 05),IL-6的表达显著下降(P<0. 05),但是观察组治疗前、后BDNF和IL-6的变化值明显高于对照组(P<0. 05)。结论低频重复经颅磁刺激能对脑卒中抑郁有明显改善作用,且能有效调节血清中BDNF和IL-6的含量。

特发性血小板减少性紫癜患者血浆白细胞介素18及其有关细胞因子

白介素 18是新的细胞因子 ,能诱导产生γ 干扰素 ,增强自然杀伤细胞及辅助性Th1细胞的活性 ,与Th1细胞分化及细胞毒效应有关。特发性血小板减少性紫癜 (ITP)是自身免疫性出血性疾病 ,其发病与Th细胞之间的失衡有关。为了进一步探讨免疫调控细胞因子在ITP发病中的作用及其临床意义 ,采用ELISA双夹心法 ,检测了32例ITP患者和 18名正常人血浆中Th细胞相关细胞因子 :IL 18、TNF α和sC5b 9的水平变化。检测发现 :ITP患者血浆IL 18、TNF α及sC5b 9水平增高 ,且血浆IL 18升高与TNF α和sC5b 9呈正相关。结论 :血浆IL 18、TNF α、sC5b 9等细胞因子水平异常增高与ITP患者的Th1/Th2失衡相关 ,在ITP患者的免疫紊乱中起一定的作用 。