HILIC-MS/MS结合酶解-QuEChERS净化法测定含鸡源成分中成药中利巴韦林及其代谢物总残留

目的建立亲水作用色谱-串联质谱(HILIC-MS/MS)结合酶解-QuEChERS净化法测定含鸡源成分中成药中利巴韦林及其代谢物总残留。方法样品中加入^(13)C_(5)利巴韦林内标,1%乙酸乙腈超声提取,在37℃下经酸性磷酸酶酶解,经QuEChERS净化萃取包净化后用Waters ACQUITY UPLC BHE HILIC (2.1 mm×100 mm, 1.7μm)色谱柱分离,以5 mmol/L乙酸铵(含0.2%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱,在电喷雾正离子电离多反应监测模式下监测,内标法定量。结果乌鸡白凤丸、复方鸡内金片中利巴韦林含量在1.0~100μg/kg之间时,相关系数大于0.999,方法检出限为0.3μg/kg,定量限为1.0μg/kg,日内回收率为95.47%~100.75%,日内精密度RSD为0.53%~2.76%,日间回收率为94.47%~101.11%,日间精密度RSD为1.00%~2.33%。结论该方法快速简便,线性范围宽,重复性好,可用于含鸡源成分中成药中利巴韦林及其代谢物总残留的定性及定量检测。

鸡精调味料中鸡源性成分RT-PCR检测技术的建立及应用

目的:建立鸡源性成分实时荧光PCR检测方法,针对食品调味料中鸡源性成分进行检测。方法:以鸡的保守基因序列NDI设计特异性引物探针,建立鸡源性成分实时荧光PCR检测方法;并针对方法的特异性、灵敏性、稳定性进行评估。结果:本方法能够有效对鸡源性成分进行快速检测,具有较高的可行性和实用性。结论:该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测鸡精调味料中含有的鸡源性成分,为市场上鸡精调味品质量监管提供强有力技术支撑。

双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。

应用多重Taqman-LNA荧光PCR同时检测肉制品中猪鸡鸭源性成分

为了建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR,给打击肉制品掺假提供技术手段。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭源性成分的多重荧光PCR方法,并应用于市售肉制品的检测。建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中上述动物源性成分,与牛、羊、驴、兔、鹅等动物源性成分无交叉反应,其检测限均达到肉含量的0.001%。对170份市售肉制品检测发现,有42份样品检出与标签标示成分不符的肉种成分,样品不合格率为24.7%。本研究建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分,具有特异、快速、经济、高效等优点,可适应于肉制品中多种肉源性成分的高通量检测。

鸡精调味料中鸡源性成分真实性鉴别研究

研究建立鸡精调味料中鸡源性成分的PCR检测方法,该方法特异、灵敏,检测限为0.1%。运用建立的方法对市场上的7个鸡精样品和2个鸡味调味料样品进行检测,在4个名牌鸡精样品中检出鸡源性成分,而在其它3个鸡精样品和2个鸡味调味料中未检出鸡源性成分。该检测方法能够用于鸡精调味料中鸡源性成分真实性鉴别。

基于线粒体DNACOⅠ基因鉴别畜禽肉中鸡源性成分

为建立畜禽肉中鸡源性成分的快速检测方法,以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列为靶点,比较羊、牛、猪、兔、鸽、鹌鹑、鸡、鸭、鹅9种动物COⅠ基因的差异位点,设计筛选鸡特异性引物,进行常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和荧光定量PCR检测。结果表明:所设计的引物仅对鸡肉DNA模板有扩增条带和典型扩增曲线,且循环阈(cycle threshold,Ct)值为21.78,对其他动物DNA模板无扩增。方法特异性较强,灵敏度较高,达pg级,可以用于畜禽肉与肉制品中鸡源性成分的快速、有效、准确检测。

引物和温度对血豆腐制品中鸡源性成分定量测定的影响

为了能够更加准确的进行基于RT-PCR技术的血豆腐制品中鸡源性成分定量检测,本实验从扩增DNA片段长度、标准样品DNA处理温度两方面对定量测定结果的影响进行研究。结果表明:高温灭菌会对DNA产生一定损伤,扩增DNA片段长度越短,越不容易受到高温对测定结果的影响,利用和待测样品灭菌温度条件相近的标准样品制作标准曲线,可以提高结果的准确性,完善血豆腐中鸡源性成分定量检测技术。

肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用

为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确性和适用性进行分析。结果表明,该方法可以快速实现对高山鸡肉、乌鸡肉、芦花鸡肉、白羽鸡肉和野鸡肉基因组DNA的特异性扩增,而对猪肉、牛肉、羊肉等的DNA均没有扩增,可稳定检出的鸡源性成分最低质量分数为0.1%。在9份标识有鸡肉成分的市售样品中,7份检出鸡源性成分,有2份样品的鸡源性成分检测结果为阴性。本研究建立的实时荧光RAA方法操作简单,反应迅速,特异性强,灵敏度高,为肉制品中鸡源性成分的检测提供了技术保障。

基于实时荧光PCR法定量检测食品中鸡源性成分

肉类食品真伪鉴定是目前食品安全检测领域的重点研究内容之一。为准确定量检测食品中的鸡源性成分,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727—2010)合成引物及探针,并拓展了特异性、灵敏度、检出限和定量分析等试验。结果显示:特异性试验中,仅鸡成分检测出现特异性扩增,其他动物组织均未出现特异性扩增;梯度稀释鸡源性DNA模板原液进行灵敏度评价,发现引物和探针灵敏度较高,可以检测到100 fg级的鸡组分模板DNA,且建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2达0.99以上,定量准确;加工制品中的验证试验结果显示,合成的引物及探针具有良好的适用性和定量检测能力。以上研究结果均说明,此引物和探针适用于市场食品中鸡源性成分的定性、定量检测。本研究为今后TaqMan实时荧光PCR法不同动物源性引物和探针的自主研发奠定了基础。

可视化环介导等温扩增技术检测鸡鸭源性成分

目的建立生肉及熟肉制品中鸡、鸭源性成分的特异性基因LAMP可视化快速检测方法。方法根据鸡鸭物种特异性cytb、COX3基因的6个特异性区域设计LAMP引物,在反应前加入羟基萘酚蓝(HNB),在63℃条件下反应45 min;反应结果可以根据颜色变化直接判断,阳性为天蓝色,阴性为紫罗兰色。并对30个肉制品样品进行可视化LAMP和PCR方法平行检测。结果 LAMP方法的最低检出限为1 pg,特异性良好,同时对肉制品中目标物检测的检出限可达到0.01%。结论该方法用于肉制品中鸡鸭源性成分的快速检测,具有操作简单、无需贵重仪器、反应结果肉眼可观察、灵敏度高和特异性强等特点,适合于基层监管部门进行肉制品现场快速检测。

Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分

目的:建立一种能实时同步检测动物源性食品中猪肉源性和鸡肉源性成分的Taqman探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,应用于动物源性食品的成分掺假快速检验。方法:分别依据猪和鸡的种间保守基因(Cytb)序列设计、合成特异性引物及不同荧光标记(FAM、HEX)的Taqman探针,建立可同步检测动物源性食品中的猪源性和鸡源性成分的Taqman探针双重荧光PCR方法。结果:所建立的Taqman探针双重荧光PCR检测方法特异性强,仅对猪、鸡成分有扩增;灵敏度高,最低检测到猪源、鸡源DNA的含量分别为0.02、0.10 ng;抗干扰性强,当DNA混样中猪源、鸡源性成分含量在2%以上水平时,所建立的混合检测体系均能对DNA混样给出正确判断。结论:所建立的混合检测体系具有高特异性、高灵敏度,能够适用于动物源性食品中猪肉、鸡肉成分的同时快速检测。

实时荧光PCR在鉴别鸡精中鸡源性成分的应用研究

文章利用实时荧光PCR方法,以鸡的cytb基因为目的基因,设计了一套特异性的引物和探针,对鸡精中的鸡源性成分进行定性、定量分析研究。结果表明,该套引物和探针能特异性的检测鸡精中鸡源性成分;荧光PCR检测的灵敏度为0.002%(W/W),检测时间为3h。此方法具有准确、快速、高效的特点,为食品中鸡源性成分的检测提供了新方法。

实时荧光PCR在检测鸡精中鸡源性成分中的应用

为监测鸡精中鸡源性成分情况,文中设计了一套特异性的探针和引物,使用实时荧光PCR,对市售的30种鸡精样品进行鸡源性检测。其中,能检测出鸡源性成分的样品28个,未能检测出鸡源性成分的样品2个。实验结果显示,设计的特异性探针和引物在给定的扩增条件下可以在较短时间内检测出鸡精中的鸡源性成分,具有操作简便快捷,检出灵敏度高,扩增特异性强等优点,方法可用于鸡精中鸡源性的检测,为市场监管部门开展风险监测提供技术支撑。

聚合酶链式反应法检测饲料中鸡源性成分

选择鸡线粒体DNA为研究对象,通过特异性引物,建立了饲料中鸡源性成分的PCR检测方法,该方法的最低检出限为0.1%。运用该方法成功检测出饲料中的鸡源性成分。该方法具有很高的特异性和灵敏性,而且简便易行,可以作为鸡源性成分鉴别检测的常规方法。

食品中鸡源性成分标准检测方法的比较性研究

为比较食品中鸡源性成分的标准检测方法,本试验对3种标准检验的引物计、方法及灵敏度进行比较。结果显示,实时荧光PCR法引物特异性好、方法简便、灵敏度高。因此得出结论,两种实时荧光PCR法均可作为鸡源性成分检测的补充方法。

荧光PCR法检测畜禽肉中的鸡源性成分

为了建立畜禽肉中鸡源性成分荧光定量PCR检测方法,以鸡、鸭、鹅、猪、牛、羊、兔、鸽和鹌鹑等9种动物线粒体DNA 16S rRNA基因序列为靶位点,通过比对分析设计筛选出鸡特异性引物,以9种动物肌肉DNA为模板进行特异性扩增,确立荧光定量PCR扩增条件;同时将鸡DNA模板浓度进行10倍梯度稀释,一直稀释至108倍,检测所建立的荧光PCR方法的灵敏度;并用此方法对市场上样品进行随机抽检。结果显示:所设计的鸡引物仅对鸡肉DNA模板有典型扩增曲线,Ct值为22.11,对其它动物DNA模板无扩增,特异性较强;当鸡DNA模板稀释倍数达到104倍,即DNA浓度为17.5 pg/μL时,仍有典型扩增曲线,Ct值为30.37,方法灵敏度较高;市场流通环节样品抽检结果显示所抽测样品均合格。可见,建立的基于荧光定量PCR和线粒体DNA 16S rRNA基因的畜禽肉中鸡源性成分检测方法,快速而准确,实用性强。

饲料中鸡源性成分PCR-DHPLC检测方法的建立

以鸡组织为材料,提取鸡组织的线粒体DNA,以鸡12SrRNA基因为靶基因设计引物,PCR反应扩增片段230bp;用13种畜禽和水产动物线粒体DNA验证该PCR引物的特异性,结果只有鸡线粒体DNA为阳性;PCR-DHPLC检测灵敏度在DNA水平上达到了2.04mg/L;在随机采集的22份饲料样品中,检出8份鸡源性成分样品。结果表明,本研究建立的PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地对饲料中的鸡源性成分进行快速准确检测。