长白山鸡爪苓子实体的组织分离培养及其酯酶同工酶分析

以鸡爪苓子实体为分离材料,对子实体的不同部位进行组织分离,并对分离得到的纯培养菌株进行酯酶同工酶分析,结果表明,菌柄基部是最佳分离部位,菌株萌发成活率最高;分离材料与产地的不同使得分离菌株之间的EST同工酶谱带表达有明显的差异。

不同氮源对长白山鸡爪苓菌丝体生长及几种胞外酶活性的影响

研究3种不同氮源(蛋白胨、硝酸钠、硫酸铵)对长白山鸡爪苓菌丝体生长及其胞外蛋白酶、多酚氧化酶及纤维素酶活性的影响.结果表明:3种不同氮源对鸡爪苓菌丝体生长有显著影响,在蛋白胨培养基中菌丝生长速度快、菌丝洁白、菌丝体生物量大;鸡爪苓菌丝体的胞外蛋白酶活性在蛋白胨培养基中达到最高;多酚氧化酶和纤维素酶的酶活性在3种不同培养基中亦表现出很大的差异.

长白山药用真菌鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库的初步构建

[目的]以长白山区鸡爪苓菌丝为材料,通过SMART技术构建全长cDNA文库.[方法]采用Trizol reagent试剂盒提取菌丝体总RNA,通过LD-PCR反转录合成双链cDNA,连接至载体λTriplEx2,构建鸡爪苓菌丝体全长cDNA文库.[结果]经测定,原始文库的滴度为1.66×106 pfu/ml,重组率为96.97％,扩增文库的滴度为1.504×1010pfu/ml,插入片段主要分布于500～2000 bp.[结论]成功构建了鸡爪苓菌丝cDNA,为鸡爪苓生长分化的分子机制研究提供理论基础.

药用真菌鸡爪苓子实体全长cDNA文库构建及EST序列初步分析

以长白山鸡爪苓子实体为材料,采用Trizol改良法提取子实体总RNA,运用SMART技术构建鸡爪苓子实体全长cDNA文库。结果表明:原始文库的滴度为5.63×106 pfu/mL,重组率为98.73%;扩增后文库滴度为1.095×1010 pfu/mL,库容量约为2.19×1012。选取20个单克隆进行双向测序及分析,把成功获取的15条EST序列进行BLAST同源性比对分析,只找到了4条同源性序列,其余11条为鸡爪苓子实体新基因。

长白山药用真菌鸡爪苓菌丝体总RNA提取方法的比较

为筛选出适合鸡爪苓菌丝体中总RNA提取的方法,采用Trizol法、Trizol改良1、2法、CTAB改良法提取鸡爪苓菌丝体的总RNA。结果表明：Trizol改良1、2法提取总RNA的质量与纯度优于Trizol法和CTAB改良法,LD-PCR成功合成鸡爪苓菌丝体cDNA产物,分布在500~5 000bp,满足cDNA文库的建库要求。

长白山鸡爪苓菌核cDNA文库的部分EST序列生物信息分析

探求由鸡爪苓菌丝体形成菌核的关键结构基因,为深入研究该珍稀药用真菌的生长发育、代谢调控以及优质种质资源的开发、利用与保护提供理论基础。从鸡爪苓菌核全长cDNA文库中随机筛选500个单独克隆进行单方向测序,选取3条全长的ESTs序列进行蛋白质功能预测,并进行生物学信息分析。结果表明:获得455条有效的EST序列,经聚类分析得到单基因簇共349条,文库冗余度为23%;参照拟南芥功能分类标准,将BLASTx比对结果中具有已知功能的78条单基因簇分成9类,分别是代谢、能量、转录、蛋白质合成、细胞结构、胞内运输、信号转导、抗性防御及未确定分类;仅有183条获得1条或1条以上GO术语,其中细胞组分包括7个部分,分子功能包括5个部分,生物学过程包括16个部分。

鸡爪苓菌丝体与子实体的全长cDNA文库构建及部分EST序列分析

构建长白山药用真菌鸡爪苓菌丝体和子实体cDNA文库并测序,发掘鸡爪苓菌丝体和子实体发育中差异表达的基因;通过同源性比对,分析与陕西猪苓的亲缘关系,确立长白山鸡爪苓的分类地位。结果表明:鸡爪苓菌丝体和子实体cDNA文库滴度分别为1.504×1010 pfu/mL和1.094×1010 pfu/mL。从菌丝体cDNA文库选取500个克隆,经测序获得452个高质量表达序列标签(EST),序列拼接出的单一基因簇包含310个单一基因;从子实体cDNA文库中选取的500个克隆,经测序获得472个高质量表达序列标签,序列拼接出的单一基因簇包含350个单一基因。从菌丝体和子实体cDNA文库中发掘的单一基因簇中,分别有39.3%和35.4%的基因与已知功能基因具有同源性,这些基因涉及细胞生长、信号转导、蛋白质合成、转录、抗逆反应以及能量代谢等。