鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗病毒释放工艺探索

在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中,一般将收获和细胞培养物反复冻融释放细胞结合病毒,然后进行配苗冻干.为了确定合适的冻融次数和测定冻融对病毒的影响,我们以超声波裂解的细胞毒液为对照,通过对不同处理方法的原苗冻干前后毒价的多重比较,发现冻融对鸡痘病毒影响较大,因此试验确立了新的释放病毒方法(即超声波裂解法),现总结如下.

鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗接毒培养工艺探索

在鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的工艺中 ,采用同步接毒工艺 ,通过调整单位细胞浓度和单位病毒含量 ,以细胞单层形成时间和收获时间分别为 2 4h和 96h为标准 ,确定细胞浓度和接毒浓度分别为 1.2× 10 6 ～ 1.5× 10 6 个 /mL和 10 2 ～ 10 3EID50 /mL较为合适。

用细胞毒生产鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的试验

多年来,我厂按《规程》一直用鸡胚绒毛尿囊膜毒种生产鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗,在生产中往往有效价不稳定、而且产量低的问题。为此, 我们在生产中进行探索和试验,用细胞毒代替绒毛尿囊膜种毒生产鸡痘鹌鹑化弱毒细胞,可以提高鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的效价和产量。

采用胚胎或胚胎加适量胚绒毛尿囊膜生产鸡痘鹌鹑化弱毒苗的初步试验

经鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）或尿囊腔接种鸡瘟种毒后，无菌采集正常死亡和接种后１２０小时存活的有病变的鸡胚胎和ＣＡＭ。单独采用上述经无菌检验阴性的鸡胚胎或胚胎加适量ＣＡＭ制备成冻干苗。经安检、效检和无菌检验证明，该苗符合《规程》￣［１］所要求的标准。

鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗生产工艺改进试验

采用人工气室绒毛尿囊膜和尿囊腔两种接种方法制备鸡痘活疫苗,结果表明经尿囊腔接种的结果和经人工气室绒毛尿囊膜接种的结果相同。因此,以尿囊腔接种代替人工气室绒毛尿囊膜接种,可以降低成本,简化工艺。本试验为以后采用机械化接种生产鸡痘苗提供了可靠的数据。

鸡痘鹌鹑化弱毒在犊牛睾丸细胞上的适应性试验

鸡痘鹌鹑化弱毒不仅能够在鸡胚成纤维细胞上复制,而且经过试验也可以在犊牛睾丸细胞(以下简称BTC)上复制。本试验结果表明鸡痘鹌鹑化弱毒在BTC上培养传代至第6代后,细胞产毒效价达105.5EID50/0.2mL左右,达到了《兽用生物制品规程》的制苗标准。这为试验用BTC代替SPF鸡胚生产鸡痘活疫苗提供了重要依据。

鸡痘鹌鹑化弱毒株种子批的建立及鉴定

为保证制苗所用毒种质量和稳定性,在对鸡痘鹌鹑化弱毒株病毒含量、病毒纯净性、特异性、免疫原性及安全性等研究的基础上,建立了鸡痘鹌鹑化弱毒株种子批。将鸡痘鹌鹑化弱毒F278 E1(1966年6月3日冻干)通过鹌鹑连续传至4代(F282 E1)后,再经鸡胚传至14代(F282E14)。传代毒种的鉴定结果表明:抽检的各代次的毒种均无细菌、支原体、外源病毒污染,且病毒含量检测稳定,均≥10^(6.2)EID_(50)/0.2m L。将抽检的各代次的毒种制成活疫苗,免疫适龄鸡只后均能产生完全保护。因此,确定鸡痘鹌鹑化弱毒株基础种子代数为F282 E2-E6代,生产用毒种继代应不超过3代。种子批的建立,为鸡痘鹌鹑化弱毒株疫苗的生产奠定了基础。