鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌净化方法的研究

我们在推广鸡病综合性防制措施的过程中,注意到鸡白痢鸡伤寒沙门氏茵对生产的危害。通过该细菌的分离、鉴定,对鸡生产性能的影响、用蛋黄代替全血进行检疫、净化方法等方面进行研究,认为在鸡开产50％时每年进行一次检疫可以降低病源的污染,并可减少对生产的干扰。

三丁酸甘油酯通过调节AMPK/mTOR通路改善鸡白痢沙门氏菌诱导的肝脏炎症

为探讨三丁酸甘油酯(TB)对鸡白痢沙门氏菌(SP)诱导的肝脏炎症调控机制,试验将128只1日龄健康、体重相近的海南文昌鸡随机分为对照组(Con组)、SP模型组(Mod组)、SP+恩诺沙星抗生素组(Ant组)、SP+三丁酸甘油酯组(Tre组),每组4个重复,每个重复8只。试验比较了各组雏鸡的生长性能,并通过血液生化检测、肝脏HE染色、荧光实时定量PCR和免疫组化等方法探究TB对SP所致肝脏炎症的影响及其调控机制。结果显示:①Ant组和Tre组平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和存活率均显著高于Mod组(P<0.05);②Ant组和Tre组γ-谷氨酰转移酶(GGT)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和总胆红素(TBIL)含量显著低于Mod组(P<0.05),白蛋白(ALB)水平显著高于Mod组(P<0.05);③与Con组相比,Ant组肝脏细胞形态完整,有少量炎性细胞,Tre组肝脏细胞形态较完整,伴有少量炎性细胞浸润;④Ant组和Tre组促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平较Mod组显著降低(P<0.05),而白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达水平较Mod组显著升高(P<0.05);⑤恩诺沙星和TB可通过AMPK/mTOR和NF-κB通路减轻SP感染对雏鸡肝脏损伤的影响。研究表明,饲粮添加TB可显著提高SP感染雏鸡的生长性能,降低部分血液生化指标,可能通过AMPK/mTOR通路减轻SP所致的肝脏损伤,并减少促炎因子的表达以减缓肝脏炎症。

饮水添加壳聚糖对鸡白痢沙门氏菌攻毒蛋鸡蛋品质、血清抗氧化指标、肝脏损伤和输卵管炎症的缓解作用

本试验旨在研究饮水添加壳聚糖(CS)对鸡白痢沙门氏菌(SP)攻毒蛋鸡蛋品质、血清抗氧化指标、肝脏损伤和输卵管炎症的缓解作用。选取体重、产蛋率相近的180羽35周龄健康海兰褐蛋鸡,随机分为3组,每组5个重复,每个重复12羽。3组分别为对照组(CON组)、攻毒组(SP组)和壳聚糖组(CS组),均饲喂相同的基础饲粮。试验期7 d。试验第1天,分别于09:00和17:00各进行1次攻毒处理,其中SP组和CS组每只试验鸡均口服1 mL活菌数为1×109 CFU/mL的SP菌液,CON组每只试验鸡口服1 mL生理盐水;第2次攻毒结束后,立即在CS组饮水中添加0.4%CS,且连续7 d服用含CS的水。结果表明:1)与CON组相比,SP组产蛋率显著降低(P<0.05),血清谷草转氨酶(AST)活性以及白蛋白(ALB)和丙二醛(MDA)含量显著提高(P<0.05),血浆白细胞介素-1β(IL-1β)和SP抗体(SP-Ab)含量显著提高(P<0.05),血浆白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05);SP攻毒后第1天和第3天,SP组蛋壳强度显著降低(P<0.05)。SP组蛋鸡出现典型的白痢、嗜睡及精神不佳等临床症状,组织病理学观察到输卵管膨大部组织绒毛膜碎裂,出现多处炎性浸润灶和脂肪变性以及少量肝细胞坏死崩解和核固缩等明显的病理改变。2)与SP组相比,CS组产蛋率显著增高(P<0.05),血清AST活性以及MDA含量显著降低(P<0.05),肝脏指数、血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及血浆SP-Ab含量显著提高(P<0.05);饮水中添加CS后第3天和第7天,CS组蛋壳强度显著提高(P<0.05)。SP组蛋鸡临床症状有所缓解,病理学观察到输卵管膨大部和肝脏损伤均有所缓解。3)与CON组相比,CS组产蛋率无显著差异(P>0.05),肝脏指数、血清ALB和总蛋白(TP)含量、血清GSH-Px和SOD活性以及血浆SP-Ab含量显著提高(P<0.05),血浆IL-6含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饮水中添加0.4%CS可通过减轻蛋鸡肝脏损伤和输卵管炎症、增强机体抗氧化功能以及调节免疫炎症反应等,从而缓解SP感染以及由此引起的产蛋性能和蛋品质下降。

SteE对鸡白痢沙门氏菌在雏鸡体内定植及宿主免疫反应的影响

试验旨在研究效应蛋白SteE对鸡白痢沙门氏菌在雏鸡体内的定植及宿主免疫反应的影响。试验分别使用鸡白痢沙门氏菌(Salmonella Pullorum)、鸡白痢沙门氏菌steE缺失株和PBS灌服2日龄雏鸡,在雏鸡感染后的12 h、24 h、36 h、2 d、3 d、5 d、7 d取脏器涂板观察细菌定植情况,并采用石蜡切片、HE染色和qRT-PCR方法研究感染后3 d时雏鸡肝脏和脾脏的病理变化和炎性因子表达情况。结果显示:与鸡白痢沙门氏菌感染组相比,鸡白痢沙门氏菌steE缺失株感染组雏鸡脏器细菌载量降低,且在感染后3 d时差异显著(P<0.05),但心脏未出现差异。鸡白痢沙门氏菌感染组和鸡白痢沙门氏菌steE缺失株感染组雏鸡肝脏均出现增生性结节,且前者结节数量多、面积大。鸡白痢沙门氏菌steE缺失株感染组雏鸡脾脏内巨噬细胞较鸡白痢沙门氏菌感染组少、动脉周围组织淋巴鞘面积小。但对照组雏鸡脏器未发现细菌定植和明显病理变化。与对照组相比,鸡白痢沙门氏菌感染组和鸡白痢沙门氏菌steE缺失株感染组雏鸡肝脏和脾脏中炎性因子的表达均升高,但鸡白痢沙门氏菌steE缺失株感染组与鸡白痢沙门氏菌感染组相比,肝脏和脾脏中白细胞介素-10(IL-10)的表达量前者显著低于后者(P<0.05),白细胞介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)的表达量显著高于后者(P<0.05)。研究表明,鸡白痢沙门氏菌效应蛋白SteE可增强细菌的定植、加重鸡肝脏和脾脏的病理变化、促进抗炎细胞因子的表达。

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR-RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100%,另有15株根据生化特性不能鉴别。

鸡伤寒白痢沙门氏菌灭活菌苗的研制

由鸡沙门氏菌株 C79-1 3和 C79-2 0及新疆分离株 AS97-1 9和 AS96-4四株菌 ,经自制的改良硫代硫酸钠培养基 ,通气搅拌培养 ,甲醛灭活制成氢氧化铝佐剂苗 ,经免疫接种健康鸡。免疫后 2 1 d抗体水平达到最高 ,经 ANAE方法和 T淋巴细胞 E花环方法检测 ,免疫组的细胞免疫水平明显高于非免疫对照组 ,差异极显著 ,1 0 LD剂量强毒株攻菌试验 ,死亡保护率达 94 .7%,免疫组分离菌率为 3 .1 %,表明该苗具有良好的安全性和免疫效果。

云南省某乌骨鸡种鸡场鸡白痢沙门氏菌分子生物学特性研究

为了明确云南省某乌骨鸡种鸡场鸡白痢沙门氏菌的分子生物学特性,试验收集了90份18~21日龄的未出壳死胚样品和100份下痢鸡的泄殖腔棉拭子,采用沙门氏菌属血清诊断试剂盒和PCR方法进行病原菌的分离鉴定,并对分离菌进行MLST分型、药敏试验、毒力基因和耐药基因检测。结果表明:在90份未出壳死胚样品中共分离到80株鸡白痢沙门氏菌(88.89%,80/90),而泄殖腔棉拭子样品中未分离到鸡白痢沙门氏菌。80株鸡白痢沙门氏菌均为ST92型(100%,80/80);均携带invA、hilA、sefA、sipA、sipC、sopB、sopE、spvC、ssaR、ssrA、stn P1等11种毒力基因,均未检出毒力基因pef A和rck;对红霉素的耐药率最高,为93.75%(75/80),而对氧氟沙星、庆大霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、多西环素、加替沙星、氨苄西林、阿莫西林、头孢西丁、头孢他啶、链霉素、四环素和复方新诺明均敏感;均未检出耐药基因,与耐药表型一致。说明从云南省某乌骨鸡种鸡场分离到的鸡白痢沙门氏菌来源单一,80株鸡白痢沙门氏菌均携带11种毒力基因,提示其毒力较强;除了红霉素外,对其他药物均敏感,提示该乌骨鸡种鸡场用药相对安全。

鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌基因组消减文库的构建

为了解鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的基因组差别,筛选鸡白痢沙门氏菌特有的序列,利用SSH对鸡白痢沙门氏菌C79-13(实验方)与鸡伤寒沙门氏菌Sg9(驱动方)基因组进行了比较。选择四碱基内切酶Rsa I将C79-13与Sg9基因组DNA酶切,酶切的C79-13基因组DNA分成两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR,得到消减混合物,将其与PCR 2.1克隆载体连接,转化感受态E.coli DH5α建立消减文库。结果共获得400个阳性克隆;筛选240个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2000 bp大小的片段。差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆鸡白痢沙门氏菌特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。

鸡白痢沙门氏菌自制抗原的制备及检测效果评价

为了评价鸡白痢沙门氏菌自制抗原的检测效果,试验从通过特异性凝集试验和非特异性凝集试验筛选结果中随机选择1株鸡白痢沙门氏菌临床分离株SP-41,与鸡白痢沙门氏菌标准菌株CVCC1792按照1∶1比例混合,采用平板凝集试验和微量凝集试验两种方法分别制备染色抗原和凝集抗原,并以100份鸡血清样品为检测对象,比较了自制抗原、鸡白痢鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原(以下简称为商品染色抗原)的检测结果及其与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测结果的一致性。结果表明:商品染色抗原、自制染色抗原、自制凝集抗原和D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测的阳性率分别为50%、78%、40%和72%。商品染色抗原Cohen’s kappa系数仅为0.08,提示一致性较差;自制染色抗原和自制凝集抗原的Cohen’s kappa系数为分别为0.363和0.375,一致性一般。自制染色抗原检测结果的阳性符合率最高,可达87.50%;而自制凝集抗原的阴性符合率更高,可达96.43%。说明试验成功制备了鸡白痢沙门氏菌染色抗原和凝集抗原;与商品染色抗原相比,自制抗原与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒的检测结果一致性更高。

鸡伤寒-白痢沙门氏菌生长动力学

为了测定鸡伤寒—白痢沙门氏菌的生长动力学,用该菌的标准菌株C79—13接种5种液体培养基,于接种后0,4,8,12,16,20,24,36和48小时取材,按标准琼脂平板计数法计算了每ml培养基内的活菌数。结果表明,营养成分和培养时间对本菌的生长繁殖具有明显而强烈的影响。每ml培养基内活菌平均数以接种后4小时最少;以接种后16或20小时最多。本菌的世代时间不是常数,以2号培养基接种后12～16小时最短(18′16″),以4号培养基接种后4～8小时最长(83′20″)。本试验还试图建立本菌生长动力学的数学模型,包括3个直线方程和1个确定性模型。

鸡伤寒白痢沙门氏菌培养基和培养方法的研究

本试验用 5种培养基对鸡伤寒白痢沙门氏菌 (Sgp)菌株C79_2 0和AS96_1进行了静止培养对比试验 ,结果表明 ,改良硫代硫酸钠培养基和EEM培养基为最适合Sgp的培养基 ,硫代硫酸钠培养基次之 ,普通营养琼脂和SBG琼脂最差 ;对C79_13菌株用改良硫代硫酸钠培养基进行了通气搅拌培养、静止厌氧培养和静止需氧培养的对比试验及pH值对细菌生长的影响试验 ,结果表明 ,通气搅拌培养方法明显优于其它两种培养方法 ,调整pH的试验组菌悬液的OD值和菌数明显高于不调整pH值的试验组。

鸡白痢沙门氏菌病的发生与诊治

鸡白痢沙门氏菌病是由致病性沙门氏菌感染引发的急性细菌性传染病,是危害鸡养殖业较严重的病害之一。该文描述了鸡白痢沙门氏菌病的发生特点、临床症状与病理学变化,介绍了针对性的实验室诊断、治疗与预防措施,给养殖者提供借鉴参考。

口服抗生素对雏鸡抗鸡伤寒———白痢沙门氏菌定植抗力的影响

雏鸡经口感染鸡伤寒———白痢沙门氏菌，测定口服抗生素对雏鸡盲肠内定植量和ｐＨ值的影响。试验结果表明：在限生雏鸡和普通雏鸡组，链霉素处理鸡和未处理鸡相比，前者的盲肠中鸡伤寒———白痢沙门氏菌的定植量高于后者；前者盲肠内容物ｐＨ值高于后者；庆大霉素处理鸡与未处理鸡相比，前者盲肠中鸡伤寒———白痢沙门氏菌的定植量和盲肠内容物ｐＨ值均高于后者，但是用庆大霉素处理要比用链霉素处理的影响程度小。普通雏鸡与限生雏鸡相比，口服抗生素能使限生鸡盲肠中鸡伤寒———白痢沙门氏菌的定植量多于普通雏鸡的定植量。

基于pegB基因的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别方法的建立

为建立一种能快速、准确、简便区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的方法,研究通过对鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌pegB序列进行分析,发现存在3个单核苷酸多态性位点,基于此建立了一种特异性PCR方法用于鉴别鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌。结果显示,该方法特异性强、耗时短,检测限为10.14 pg/反应。临床样品检测表明,该方法不仅具有良好的特异性,且操作比传统方法更为简便。该方法的建立为准确区分鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌提供了实用技术,将在分子检测中发挥重要作用。

不同地方品种鸡白痢阳性鸡沙门氏菌的分离及药敏试验

为了解广西六个地方品种鸡沙门氏菌的感染和耐药状况,从广西各地收集灵山麻鸡、广西三黄鸡、南丹瑶鸡、东兰乌鸡、容县霞烟鸡、天峨六画山鸡六个地方品种90份样品作为研究对象,每个品种选择15只临床表现健康的成年鸡进行鸡白痢血清学检测,再从检测为鸡白痢阳性鸡中随机抽取2只鸡进行剖检,采集病料分离沙门氏菌,并对分离菌株进行药物敏感试验。结果表明:检测六个地方品种90个样品,阳性样品22份,样品鸡白痢阳性率为24.44%,六个地方品种中广西三黄鸡个体阳性率最高,为46.67%;采集12个鸡白痢阳性鸡的病料,分离出4株沙门氏菌,鸡白痢阳性鸡沙门氏菌检出率为33.33%,检出率最高的鸡品种是广西三黄鸡为100%。4株分离菌药敏试验结果显示,4株分离菌均对头孢曲松、头孢哌酮、环丙沙星、氧氟沙星高度敏感,对阿莫西林、庆大霉素、四环素和新霉素具有不同程度耐药性。可见,被调查的广西六个地方品种源养殖场鸡白痢沙门氏菌感染依然存在且比较严重,而且分离菌对多种药物具有不同程度的耐药性,养殖户要根据实际加强鸡白痢净化工作,定期进行沙门氏菌的药敏性试验,选择高效敏感药物进行防控,以提高养殖效益。

鸡白痢沙门氏菌病的发生与诊治技术研究

鸡白痢沙门氏菌感染健康鸡后可能引起多种传染病,疫病严重时鸡大量死亡,造成较大经济损失,是一类严重危害鸡养殖业的疫病,科学诊治能尽快管控病情,保障鸡健康生长。文章通过对鸡白痢沙门氏菌病发生机理的了解,提出诊断技术和治疗技术,为鸡养殖提供技术指导,以期可以控制鸡白痢沙门氏菌病发生与传播,保障鸡养殖活动正常进行。

鸡伤寒沙门氏菌生物学特性检验

通过对河北省某鸡场由伤寒沙门氏菌引起的病死鸡的初步调查研究,核心在于对目标对象实施全面的临床观察、病理变化分析、病原菌的分离鉴定及其理化特性评估,旨在明确感染性疾病的独特表现及对应的病原菌种类。实验过程中,对新近因病死亡的鸡只进行了详尽的体表检查及解剖后的病理分析。同时,利用病变的肝脏、脾脏等组织作为样本,进行了细菌的分离与纯化培养。随后,对这些分离出的细菌进行了包括形态特征、理化性质在内的多方面鉴定。为了验证其致病性,将具有代表性的菌株接种至健康鸡群,并观察其引发的疾病效应。此外,还采用琼脂扩散法(K-B法)对8种细菌进行了针对12种抗菌药物的敏感性测试。研究结果显示,所鉴定的伤寒沙门氏菌为革兰氏阴性菌,形态上呈现为无芽孢、两端略圆的短杆菌。该菌在普通琼脂培养基上均能良好生长,既可需氧也可兼性厌氧,且能在10℃至42℃的温度范围内存活。在普通琼脂平板上培养24至48小时后,会形成无色半透明、表面光洁、湿润且凸起的菌落。该菌对健康鸡有很强的致病性。并判定出菌株对阿米卡星的敏感率最高,为94.4%,其次为环丙沙星。

15种常用消毒剂对鸡伤寒-白痢沙门氏菌和大肠埃希氏菌消毒效果的测定

本文报道了用15种常用消毒剂(其中13种系市售,2种系自制)杀灭鸡伤寒-白痢沙门氏菌和大肠埃希氏菌的初步试验。结果表明,其中5种消毒剂(畜禽安、碘伏、强力消毒灵、过氧乙酸及百毒杀)对这两种细菌具有明显的杀灭作用,另外5种(新洁尔灭、蔚星牌消毒剂、环中菌毒清、菌毒敌及增效复合酚)作用较好,其余5种(来苏儿、次氯酸钠、灭菌王、畜禽乐及石炭酸)较差。

新疆地区鸡伤寒白痢沙门氏菌病的调查

对新疆地区鸡沙门氏菌病进行了病原学、血清学和流行病学调查 ,结果表明分离的 2 46株细菌与鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌诊断血清呈阳性反应 ;对 15株鸡沙门氏菌进行抗原结构分析 ,表明 8株为标准型鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌 ,7株为中间型鸡沙门氏菌 ;对其中 86株菌的生化鉴定表明符合鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌的生化特性。该病在我区的发病死亡率为 1%～2 5 % ,发病严重的鸡场为 5 0 %～ 75 %。该病除了单一感染外 ,还与鸡大肠杆菌、葡萄球菌、鸡球虫病混合感染。

斑点免疫金渗滤法检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

将鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原包被于渗滤盒检测区(T区),针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区(C区),用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原,建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。DIGFA比玻板凝集试验(PAT)灵敏度高,人工感染鸡试验表明在感染后第7d即可从32只鸡中的7只检测到抗体,在时间上早于PAT。722份现场血清样品的检疫结果表明,DIGFA的阳性检出率稍高于PAT,阳性样品抗体几何平均滴度DIGFA大于PAT法(p<0.05〉。DIGFA的结果得到细菌分离试验的验证。这些结果表明DIGFA快速、灵敏、准确,为鸡伤寒和鸡白痢的检疫提供了一个新的有效手段。