高效液相色谱法同时测定伤湿丸中的新北美圣草苷、柚皮苷、乌索酸和鸡矢藤苷甲酯的含量

目的 建立同时测定伤湿丸中新北美圣草苷、柚皮苷、乌索酸和鸡矢藤苷甲酯含量的高效液相色谱法。方法 采用kro-masilC18柱色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈（A）—0.4%冰醋酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱;柱温25℃;流速为0.9mL·min^-1;进样量为20μL;新北美圣草苷和柚皮苷检测波长为λ1=283nm,乌索酸和鸡矢藤苷甲酯检测波长为λ2=345nm。结果 新北美圣草苷、柚皮苷、乌索酸和鸡矢藤苷甲酯,在给定浓度范围内线性范围分别为4.72-94.40mg·L^-1（r=0.9994）、5.11-102.20mg·L^-1（r=0.9997）、7.14-142.80mg·L^-1（r=0.9998）、5.15-103.00mg·L^-1（r=0.9992）,线性关系良好;平均加样回收率（n=6）和RSD值分别为99.19%（0.93%）、97.90%（1.02%）、99.31%（0.70%）、96.92%（1.45%）。结论 该文建立的HPLC方法可同时测定伤湿丸中新北美圣草苷、柚皮苷、乌索酸和鸡矢藤苷甲酯含量。方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,为评价伤湿丸质量控制提供可靠方法。

鸡矢藤环烯醚萜苷对尿酸性肾病大鼠的防治作用

目的研究鸡矢藤环烯醚萜苷(IGPS)对尿酸性肾病(UAN)大鼠的防治作用及其作用机制。方法采用腺嘌呤(100 mg/kg,灌胃给药,qd×28 d)和氧嗪酸钾(250 mg/kg,腹腔注射,每周1次,连续4周)制备UAN大鼠模型,造模4周后,检测各组大鼠血尿酸、血黄嘌呤氧化酶、血肌酐、尿素氮、尿尿酸及肾指数。结果 IGPS(70、140、280 mg/kg,灌胃给药,qd×21 d)可明显改善UAN大鼠的一般症状,明显抑制血清黄嘌呤氧化酶活性、降低血尿酸含量;促进尿尿酸排泄,减少肾组织内尿酸盐沉积物,改善肾功能,降低肾指数。结论 IGPS对腺嘌呤和氧嗪酸钾所致UAN大鼠有较好的防治作用。

鸡矢藤环烯醚萜苷体外抗肿瘤活性研究

目的:探讨并评价鸡矢藤环烯醚萜苷(IGPS)化学组成和体外抗肿瘤活性。方法:采用超声提取和大孔树脂分离纯化的方法制备IGPS,并用LC-MS方法鉴定分析其化学组成;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究其对正常细胞小鼠成纤维细胞系NIH-3T3的毒性及人肺癌细胞系A549、SPC-A^(-1),人结肠癌细胞系COLO205、HCT^(-1)16,人白血病细胞系HL-60、K562,人乳腺癌细胞系MCF7、BT-549,人胃腺瘤细胞系SGC7901,人子宫颈癌细胞系Hela的增殖抑制作用;用流式细胞术检测IGPS对SGC7901、Hela和HCT^(-1)16肿瘤细胞凋亡的影响。结果:提取纯化的IGPS主要由鸡矢藤苷、鸡矢藤次苷、鸡矢藤苷酸和车叶草苷组成;与阴性对照组相比,IGPS浓度在500μg·ml^(-1)及以下时对正常细胞NIH-3T3无毒性作用;对SGC7901、Hela、HCT^(-1)16、COLO205、BT-549和MCF7细胞均有细胞增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05),而对人肺癌细胞系A549、SPC-A^(-1)和人白血病细胞系HL-60、K562无细胞增殖抑制作用;IGPS对SGC7901细胞抑制作用最强,IC50为156.6μg·ml^(-1);IGPS能够有效诱导SGC7901、Hela和HCT^(-1)16细胞的凋亡。结论:鸡矢藤环烯醚萜苷对多种肿瘤细胞具有一定的体外抗肿瘤作用。

鸡矢藤环烯醚萜苷抑制NO-CGMP/PKG信号保护新生大鼠神经元

目的本研究旨在探讨鸡矢藤环烯醚萜苷(iridoid glycosides from Paederia scandens,IGPS)通过抑制NO-cGMP/PKG信号通路,保护新生大鼠神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经元的作用。方法SD大鼠连续灌胃给药后,采集血清制备IGPS含药血清;采用硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)200μmol·L^-1制备DRG神经元损伤模型;MTT法测定IGPS含药血清对SNP损伤后DRG神经元存活率的影响;紫外分光光度法测定DRG神经元NO含量和iNOS活性;放射免疫分析法测定DRG神经元cGMP含量;RT-PCR法检测DRG神经元PKGΙ(α,β)mRNA的表达;激光共聚焦显微镜检测DRG神经元胞内钙离子浓度的变化。结果IGPS含药血清可明显升高SNP损伤后DRG神经元的存活率,明显降低DRG神经元NO、cGMP含量及iNOS活性,抑制iNOSmRNA、PKGΙ(α,β)mRNA的表达。IGPS含药血清可有效抑制损伤DRG胞内钙离子浓度的升高。结论IGPS含药血清对SNP导致的背根神经节神经元损伤有良好保护作用,其机制可能与抑制cGMP/PKG信号及降低胞内钙离子浓度有关。

鸡矢藤苷酸甲酯对模型小鼠镇痛活性研究

目的探讨鸡矢藤苷酸甲酯在小鼠疼痛模型中的活性研究。方法在2013年4—9月将170例小鼠随机分为17组,每组10只。首先从植物鸡矢藤中分离提取出鸡矢藤苷酸甲酯。将鸡矢藤苷酸甲酯分别按照不同的剂量注射在受试小鼠,在小鼠醋酸扭体实验,小鼠福尔马林实验和小鼠热板实验中进行其对化学和热刺激引发的疼痛的耐受性测试,分析鸡矢藤苷酸甲酯的镇痛活性。计量资料采用t检验,P〈0.05为差异具有统计学意义。结果小鼠醋酸扭体的外周镇痛实验的结果显示：鸡矢藤苷酸甲酯3、4、5组对腹腔注射醋酸引发的小鼠扭体次数[（26.8±4.6）、（26.3±3.4）、（22.5±3.0）次]与空白组[（44.2±4.7）次]相比有显著的抑制作用,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;小鼠热板的中枢镇痛实验显示：鸡矢藤苷酸甲酯4、5组对热刺激的耐受时间[（2.45±0.30）、（2.46±0.24）s]较空白组[（1.52±0.15）s]具有明显的延长,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。而小鼠福尔马林实验中,鸡矢藤苷酸甲酯组在0~5min与25~30min的时间段内有良好的外周和中枢神经镇痛效果[（36.40±4.80）、（5.40±2.66）次],与空白组[（83.83±13.56）、（45.17±12.86）次]相比差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论鸡矢藤苷酸甲酯对小鼠疼痛模型具有中枢和外周双重镇痛调节作用,提示其作为疼痛治疗或者预防药物具有一定的开发价值。

川产鸡矢藤和毛鸡矢藤的UPLC指纹图谱对比研究

目的建立鸡矢藤药材来源中鸡矢藤Paederia scandens和毛鸡矢藤Paederia scandens var. tomentosa的UPLC指纹图谱,比较两个品种的UPLC指纹图谱的异同,为其品种鉴别与质量控制提供科学依据。方法采用Aglient ZORBAX SB-C18(2.1 mm×50 mm 1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱;流速0.25 mL/min;检测波长250 nm;柱温30°C;进样量1μL。测定鸡矢藤和毛鸡矢藤的UPLC指纹图谱,对比二者指纹图谱的差异,同时进行相似度分析和聚类分析。结果鸡矢藤UPLC指纹图谱共确立了13个共有峰,毛鸡矢藤UPLC指纹图谱确定了16个共有峰,二者的UPLC指纹图谱有9个共有峰;鸡矢藤和毛鸡矢藤分别特有的共有峰为4个和7个,可根据此区分二者。通过相似度分析,不同产地毛鸡矢藤的的质量较鸡矢藤稳定;通过聚类分析,基本将鸡矢藤与毛鸡矢藤分开。结论建立的鸡矢藤UPLC指纹图谱能够区分鸡矢藤与毛鸡矢藤,为其品种鉴别与质量控制提供科学依据。

川产药用鸡矢藤UPLC指纹图谱研究

目的:研究鸡矢藤药材的UPLC指纹图谱。方法:采用Aglient ZORBAX SB-C_(18)(2.1mm×50mm,1.8μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速为0.25mL/min,检测波长为250nm,柱温为30℃,进样量为1μL。并对测得的指纹图谱进行相似度评价、主成分分析和聚类分析。结果:21批不同样品共确立了9个共有峰,建立了鸡矢藤药材的UPLC对照指纹图谱。通过聚类分析,将鸡矢藤药材分为2类。通过对9个共有峰主成分分析,提取了3个主成分。结论:建立的方法快速简便,精密度、重复性、稳定性良好,可用于鸡矢藤药材的品质分析。

鸡矢藤的薄层色谱鉴别方法研究及应用

目的:建立鸡矢藤薄层色谱鉴别方法。方法:采用硅胶G薄层板,以氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)为展开剂,鸡矢藤苷为对照品,采用薄层色谱法对不同品种和不同产地鸡矢藤药材进行定性鉴别。结果:鸡矢藤薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。结论:该方法准确、简便,可为鸡矢藤药材的质量控制提供参考。

黄毛耳草药材的薄层色谱研究

目的:建立黄毛耳草药材的定性控制方法。方法:采用薄层色谱法分别检查药材中的环烯醚萜类、黄酮类和内酯类成分。结果:环烯醚萜类、黄酮类和内酯类成分分别在以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶4∶2∶0.5)、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶1∶0.5)和氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)为展开剂的条件下获得理想分离。结论:该方法简便、快速,可作为黄毛耳草药材的定性控制方法。

鸡矢藤环烯醚萜总苷的镇痛作用及其机制初探

目的:研究鸡矢藤环烯醚萜总苷(Iridoid glycosides of paederia scandens,IGPS)的镇痛作用及其机制。方法:采用小鼠福尔马林实验、扭体实验研究IGPS镇痛活性,通过小鼠竖尾实验和小鼠跳跃实验研究其成瘾性,通过纳洛酮拮抗实验和预先给予一氧化氮供体左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)和一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methy1ester,L-NAME)初步探讨IGPS镇痛作用与阿片受体和一氧化氮(Nitric oxide,NO)系统的关系。结果:IGPS(360、180mg/kg ig qd×7d)可显著抑制福尔马林实验Ⅰ相和Ⅱ相反应;IGPS(360、180、90mg/kg ig qd×7d)可明显抑制冰醋酸导致的小鼠扭体反应;IGPS(360mg/kg sc q12h×8d)连续给药动物均未出现S行竖尾反应及跳跃现象;纳洛酮(5mg/kg)不能拮抗IGPS镇痛活性,L-Arg(400mg/kg)可部分地抑制其镇痛作用,L-NAME(37.5mg/kg)可增强其镇痛作用。结论:IGPS具有明显的镇痛作用,且连续用药无成瘾性,其镇痛作用可能与内源性阿片肽系统无关,而与抑制NO的生成有关。

LC-MS/MS同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分的含量

目的：建立运用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分（鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷）含量的分析方法。方法：采用Venusil MP C18色谱柱（2.10 mm×50 mm,5μm）,以甲醇（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0-0.3 min,10%A;0.3-0.8 min,10%-95%A;0.8-3.0 min,95%A;3.0-3.2 min,95%-10%A;3.2-4.5 min,10%A）,流速0.35 m L·min-1,柱温为室温,进样量10μL。采用电喷雾离子源（ESI）,正离子模式下多反应监测扫描（MRM）,通过优化三重四级杆的质谱仪参数以及4个化合物相关的质谱参数,进行检测和定量分析。结果：通过仪器精密度,线性范围,重复性,稳定性,加样回收率等方法学验证,发现其结果均符合定量分析的相关标准。鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷在测定浓度范围内均具有良好的线性关系（r≥0.994 7）;平均加样回收率（n=6）在90.8%-112.1%,RSD均≤5.1%。结论：该方法简便、快速、准确、可靠,可用于鸡矢藤提取物中4种主要有效成分的含量测定。

HPLC法同时测定双虎清肝颗粒中9种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定双虎清肝颗粒中鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、虎杖苷、白藜芦醇、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量的方法。方法采用Agilent Zorbax SB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-体积分数0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1);柱温30℃,检测波长分别为238 nm(检测鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸和车叶草苷)、290 nm(检测虎杖苷和白藜芦醇)和255 nm(检测二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)。结果鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、虎杖苷、白藜芦醇、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的质量浓度分别在4.470~89.40 mg·L^(-1)、2.760~55.20 mg·L^(-1)、3.780~75.60 mg·L^(-1)、4.690~93.80 mg·L^(-1)、7.920~158.4 mg·L^(-1)、0.5300~10.60 mg·L^(-1)、1.910~38.20 mg·L^(-1)、1.690~33.80 mg·L^(-1)、2.960~59.20 mg·L^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9991),平均加样回收率分别为98.64%、98.81%、99.15%、100.04%、99.66%、96.92%、97.89%、97.51%和98.40%,RSD分别为1.12%、1.47%、1.08%、0.79%、0.86%、1.06%、1.35%、0.89%和1.22%。结论该方法可作为双虎清肝颗粒的质量控制评价方法。

HPLC法测定乙肝宁颗粒中鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素

目的建立HPLC法同时测定乙肝宁颗粒中鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为238 nm(0~21.0 min检测鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸和车叶草苷)、280 nm(21.0~40.0 min检测丹参素、丹酚酸B和丹参酮ⅡA)和254 nm(40.0~55.0 min检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素);体积流量:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量为10μL。结果鸡矢藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素分别在1.49~37.25、0.76~19.00、1.07~26.75、0.99~24.75、12.61~315.25、2.43~60.75、0.69~17.25、1.86~46.50μg/mL线性关系良好(r≥0.9991);各成分平均加样回收率分别为98.44%、98.12%、99.36%、97.44%、100.00%、99.19%、96.98%、98.93%,RSD值分别为0.71%、1.47%、0.98%、1.35%、0.85%、1.13%、1.02%、1.29%。结论该方法操作简便、重复性好,可用于乙肝宁颗粒中多指标性成分的质量控制。

黄毛耳草药材质量标准研究

目的:建立黄毛耳草药材的质量标准。方法:以乙腈-水(7∶93)为流动相,测定波长为238nm,采用HPLC测定黄毛耳草药材中鸡矢藤苷甲酯的含量。结果:鸡矢藤苷甲酯在22.08～552mg·L-1与峰面积呈良好线性关系,加样回收率为99.7%(n=6),RSD0.72%。结论:方法简便、快速,可作为黄毛耳草药材的质量标准。

肠炎宁片定性定量方法研究

目的：建立肠炎宁片质量标准。方法：采用薄层色谱法对黄毛耳草进行薄层鉴别研究，采用HPLC建立鸡矢藤苷甲酯的含量测定方法，色谱柱为AgilentHC—C18柱，流动相为乙腈-水（7：93），测定波长为238nm。结果：黄毛耳草在其色谱条件下获很好分离；鸡矢藤苷甲酯在22．08～552μg·mL^-1范围内浓度与峰面积呈良好线性关系，平均回收率为98．3％（n=7），RSD为1．38％。结论：此方法简便、快速、重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。

栀子标准汤剂量值传递规律研究

目的研究栀子饮片到标准汤剂的量值传递规律。方法收集23批栀子饮片,制备标准汤剂,测定出膏率,建立饮片和标准汤剂的HPLC指纹图谱,采用三重四级杆飞行时间质谱(triple quadrupole time-of-flight mass spectrometry,TripleQ-TOF/MS)技术对标定的共有峰进行成分鉴定,对采用对照品比对确认的成分进行含量测定,以出膏率、指纹图谱共有峰传递数及峰面积比值变化、成分转移率为指标,分析栀子饮片到标准汤剂的量值传递规律。结果栀子饮片指纹图谱标定共有峰26个,其中25个传递到了标准汤剂,共有峰个数传递率96.15%,26个共有峰的成分均得到鉴定,其中7个环烯醚萜类成分栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、羟异栀子苷、山栀苷、京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯(DAAME)、鸡矢藤次苷甲酯(SME),2个西红花苷类成分西红花苷I、II,2个黄酮类成分芦丁和异槲皮苷,1个单环单萜类成分jasminoside B,1个有机酸类成分绿原酸共计13个成分采用照品比对确认,标准汤剂和饮片共有峰面积比值与成分转移率呈现较好的正向直线关系,7个环烯醚萜类成分合计平均转移率70.90%,其中主要成分栀子苷平均转移率77.16%,西红花苷I、II、芦丁、异槲皮苷、jasminoside B、绿原酸平均转移率分别为47.09%、39.56%、63.25%、51.95%、61.42%、75.70%,标准汤剂平均出膏率为28.91%。结论阐明了栀子标准汤剂量值传递规律,为栀子配方颗粒及含栀子经典名方制剂研究奠定了基础。