鸡神经症状性疾病的诊治要点

鸡感染某些疾病后会出现扭颈、转圈、震颤等神经性症状。根据致病原因的不同,病鸡的死亡率也有很大的差异。比如新城疫、马立克氏病引起的神经症状性疾病,尚无特效治疗药物,需要立即扑杀;而维生素缺乏症引起的神经症状性疾病,可通过投喂富含维生素的饲料进行治愈。本文对鸡患病后引起神经症状性疾病的诊断方法和治疗要点展开了简要分析,供参考。

鸡神经肿胀性疾病的诊治框架构建

随着人们生活水平的不断提高,肉禽市场也得到了扩大,促进养殖业得到了一定的发展,随着养殖数量的增加,各种问题也随之而言,对于鸡的饲养,较为困难的问题在于鸡神经肿胀性疾病,其对养殖户的经济效益有着一定的影响。对此,本文将对脊神经肿胀性疾病的诊治进行分析,以保证养殖户的经济效益,促进养殖业的平稳发展。

鸡神经肿胀性疾病的诊治关键点

鸡神经肿胀性疾病的死亡率虽然不高,但是一种较为常见和严重的疾病。病理切片和治疗性诊断发现,鸡神经性肿胀性疾病主要由马立克病、网状内皮细胞增生和核黄素缺乏症三种因素引起。

鸡神经症状性疾病的诊断与治疗分析

导致鸡出现扭颈、震颤或是瘫痪等症状的原因极多,主要包括细菌感染和病毒侵害等,只有快速且准确地确定病因并进行治疗,才能使治疗效果达到预期。文章以鸡神经症状性疾病为研究对象,分别对诊断、治疗该疾病的要点进行了说明,内容主要涉及药物中毒、细菌性疾病、病毒性疾病和缺乏维生素等方面,希望能给人以启发,为疾病治疗、鸡群养殖等工作的开展提供支持。

激活素促进鸡胚神经节神经突起生长作用

为了探讨激活素（activin）促进鸡胚背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）突起生长、维持神经节细胞生存作用及其与一氧化氮（NO）释放的关系，实验采用8d的鸡胚分离背根神经节，原代培养法，观察鸡胚背根神经节的体外生长情况。研究结果表明，添加激活素A培养的背根神经节有明显的神经突起生长，形成密集的网络，背根神经节可存活8～10d；而阴性对照组几乎无神经突起生长，背根神经节可存活3～4d。添加激活素A的背根神经节单层培养神经节细胞也可长期存活；而阴性对照组在培养第5d几乎无神经节细胞生存。NO检测结果显示，添加激活素A培养的背根神经节上清NO分泌水平明显降低，与阴性对照组比较差异显著（P〈0．05）；激活素A与神经生长因子（nerve growth factor，NGF）具有协同抑制背根神经节NO分泌作用。激活素结合蛋白（follistatin）明显抑制激活素A诱导的背根神经节神经突起生长。研究结果提示，激活素可维持鸡胚神经节细胞存活并刺激神经突起生长，其作用与抑制神经损伤因子NO的释放有关。

激活素结合蛋白阻断激活素诱导鸡胚神经节神经突起生长作用及其机制研究

目的探讨激活素结合蛋白(follistatin,FS)与激活素(activin)调控鸡背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经突起生长的作用机制。方法实验采用8d的鸡胚分离背根神经节,观察原代培养鸡胚背根神经节的体外生长情况。结果激活素A促进培养鸡背根神经节神经突起生长,形成密集的网络;激活素结合蛋白与激活素A同时添加培养,呈现剂量依赖性阻断激活素促背根神经节神经突起生长。添加激活素结合蛋白培养的背根神经节上清NO分泌水平明显高于单纯激活素A培养组,统计学比较差异显著(P<0.05);添加激活素结合蛋白培养的背根神经节激活素IIA型受体(ActRIIA)表达水平明显低于单纯激活素A培养组。结论激活素结合蛋白可以阻断激活素A刺激的鸡胚神经节神经突起生长,其作用与阻断激活素A诱导ActRIIA表达、中和激活素A抑制神经损伤因子NO释放作用有关。

藻酸双酯钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对鸡胚背根神经节的促生长作用

目的观察藻酸双酯钠(PSS)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。方法采用大鼠大脑中动脉结扎模型研究PSS对局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响;采用鸡胚背根神经节体外培养模型研究PSS对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。结果在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型中,PSS可呈剂量依赖性阻止大脑皮质Ca2+释放,降低脑组织Na+,NO,丙二醛(MDA)浓度,抑制一氧化氮合酶(NOS),增强超氧化物歧化酶(SOD),Na+-K+- ATPase,Ca2+-ATPase活性,提高K+浓度;在鸡胚背根神经节体外培养模型中,PSS可呈剂量依赖性促进鸡胚背根神经节生长。结论 PSS能改善大鼠局灶性脑缺血再灌注后的损伤脑环境,促进鸡胚背根神经节生长,对局灶性脑缺血有保护作用。

鸡肠神经胆碱乙酰转换酶和多巴胺羟化酶细胞的免疫组织化学

应用SABC法免疫组织化学技术,探索鸡肠神经内胆碱乙酰转换酶(ChAc)和多巴胺羟化酶(DβH)神经元的形态及其分布。结果显示,肠神经内含有52%的ChAc神经元和36%的DβH神经元,2种神经元胞体或为多突起的多边形,或为一端有长突起的椭圆形,它们分布于神经内的神经纤维之间。DβH神经元在节间束也有个别分布。部分神经纤维呈ChAc或DβH阳性。这表明鸡肠神经系混合神经,既含副交感节后神经元,也含交感节后神经元。

鸡血管活性肠肽RNA探针制备及其在鸡肠Remak神经的原位杂交反应

应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查VIP-mRNA在鸡肠Remak神经(INR)中的分布情况。结果表明,INR的神经元胞体中有VIP-mRNA的转录,且这种神经元数量众多;原位杂交阳性神经元胞体大部分是大型神经元细胞,呈圆形或椭圆形;阳性神经元胞体在INR神经节中呈层状或成群分布。INR的神经纤维呈弱阳性。在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中有VIP神经元存在。

鸡胚背根神经节的摘取方法及培养条件的改进优化

探讨摘取鸡胚DRG的有效方法,并对培养条件进行优化,为神经营养因子突起鉴定奠定基础。根据鸡胚DRG的生长状态和解剖特点,采用分部摘取法摘取鸡胚DRG,利用NGF对不同部位的DRG进行鉴定,同时通过不同血清浓度、不同培养基及不同观察时间鸡胚DRG神经突起的生长状态,对培养条件进行优化。结果显示分部摘取法摘取鸡胚DRG提高了实验的可操作性和可重复性;综荐骨部的鸡胚DRG为实验最佳取材部位;无血清RPMI-1640培养基为最适神经突起生长鉴定培养基。

Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响

目的:纯化毕赤酵母表达的Neuritin蛋白,通过观察其对PC12细胞和鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的作用,研究其神经生物学功能。方法:采用镍离子金属螯合亲和层析法纯化Neuritin蛋白,Bradford法对纯化的Neuritin蛋白进行定量,然后加入到PC12细胞和DRG的培养液中,通过观察PC12细胞突起的生长情况和细胞形态的变化,研究其促进细胞突起生长的功能;通过观察鸡胚DRG的神经纤维生长情况,研究其促进DRG神经纤维生长活性;通过观察鸡胚背根神经节的裂解时间,研究其阻止细胞退化和凋亡的活性。结果:纯化后的Neuritin蛋白经SDS-PAGE电泳显示,获得11 kDa左右的唯一蛋白条带,即Neuritin蛋白;Bradford定量法计算出其浓度为490μg/ml。纯化的Neuritin蛋白加入到PC12细胞培养液中,PC12细胞长出突起,发生类神经元样改变;鸡胚DRG培养液中加入Neuritin蛋白后,长出神经纤维,裂解时间也延长,并与浓度呈正相关。结论:毕赤酵母表达的Neuritin蛋白得到有效纯化,纯化的Neuritin蛋白能促进细胞突起的生长,阻止细胞的退化和凋亡,延长细胞的存活时间,这为进一步研究neuritin的功能及作用机制奠定了良好的实验基础。

生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布

肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-Teasy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-Teasy和PPE/pGM-Teasy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录。

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml 的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。

单纯疱疹病毒1型未能引起体外培养鸡胚端脑神经细胞凋亡

细胞凋亡与坏死是两种基本的死亡形式。两者的区别主要是形态上的。细胞凋亡因其不引起炎症反应而倍受瞩目。

脑必舒注射液对鸡胚背根节神经突起生长促进作用的实验观察

以进口脑活素注射液为阳性对照 ,观察了脑必舒注射液对鸡胚背根节神经突起的体外促生长作用。结果表明 :分别含 4 0 %脑必舒注射液与进口脑活素的培养液对鸡胚背根节神经突起的生长有相当的促进作用。在脑必舒与进口脑活素的作用下 ,神经突起的生长状况与阴性对照组相比有显著差异。

N-芳磺酰基α-烷基L-氨基酸酯的合成及其神经营养活性

目的设计合成N 芳磺酰基α 烷基L 氨基酸酯化合物 ,并对其神经营养活性进行初步评价。方法基于先期工作 ,以生物电子等排原理 ,设计合成系列N 芳磺酰基α 烷基L 氨基酸酯化合物 ,并运用体外PC12细胞存活模型和鸡胚背根神经节无血清培养方法 ,观察化合物的神经营养作用。结果共合成 32个目标化合物 ,其结构均经1H NMR和MS确证。结论化合物 3,5 ,10 ,12 ,13,14 ,15 ,2 0 ,2 1和 2 8可明显增强神经生长因子 (NGF)促PC12细胞体外存活活性 ;化合物 12 ,13,15 ,2 0和 2 8同时具有较强的促鸡胚背根神经节突起生长作用 ,其中化合物 12和 15活性突出 ,优于阳性对照化合物GPI - 10 4 6。

新型非免疫活性的FKBP_(12)配基N308促神经生长和神经损伤保护作用的体外评价

目的评价新型非免疫抑制的FKBP12配基N308在体外促神经生长和神经损伤的保护作用。方法采用鸡胚背根神经生长实验评价N308体外促神经生长作用;在原代培养的大鼠中脑多巴胺神经元损伤和大脑皮层神经细胞缺氧损伤的模型上观察N308的保护作用。结果 N308能够协同神经生长因子(NGF)对鸡胚背根神经节的神经纤维生长,具有明确的促进作用,在10～1000 pmol.L-1浓度范围内表现出良好的剂量依赖关系。在0.3～30 nmol.L-1浓度范围内N308明显提高缺氧诱导的大脑皮层神经细胞的存活率;0.5μmol.L-1 N308对6-OHDA诱导的大鼠中脑多巴胺神经元细胞损伤具有明确的保护作用,使细胞突起明显增长。结论 N308在体外具有明确的促神经生长及神经损伤的保护作用。

鸡耳蜗EFNA2基因RNAi慢病毒载体的构建及其靶基因离体沉默效率

目的构建鸡耳蜗EFNA2基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,在离体培养原代鸡听神经细胞中鉴定其沉默效率。方法针对鸡EFNA2基因序列设计特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点,构建慢病毒pFU-GW-iRNA载体,将筛选所得有效短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体在293T细胞中包装成病毒颗粒,随后将其感染离体培养原代鸡听神经细胞,最后采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果 PCR克隆鉴定及测序结果显示所构建的shRNA慢病毒载体正确无误,包装病毒后的滴度为2.0×109 TU/ml,分别命名为LV-GFP-EFNA2-shRNA-l、LV-GFP-EFNA2-shRNA-2和LV-GFP-EF-NA2-shRNA-3。ShRNA慢病毒颗粒感染目的细胞后,EFNA2基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了76.11%、61.87%和68.44%。结论本研究成功构建了鸡EFNA2基因的RNAi慢病毒表达载体,并能在离体培养的原代鸡听神经细胞中有效沉默靶基因。

鼠神经生长因子生物学活性测定方法的研究

目的建立一个简单、稳定、重复性好的鸡胚背根神经节培养法测定m NGF活性的实验方法。方法通过对鸡胚运输温度控制、神经节分离和接种时间限制、培养结果观察时间摸索、活性测定的浓度范围、重复性等试验,建立了鼠神经生长因子生物学活性的测定方法。结果该方法具有操作简便,灵敏度高、重复性好、测试结果准确的特点。结论采用鸡胚背根神经节培养法可有效测定鼠神经生长因子的生物学活性。

对注射用人神经生长因子稳定性的研究

神经生长因子(nerve growth factor,简称NGF)是最早发现的神经营养因子,影响着外周神经及中枢神经某些神经元的存活与分化,可促进损伤神经的再生与修复。NGF有高分子和低分子两种形式,其中只有β亚基(简称β-NGF)具有神经生长刺激活性。β-NGF由两条相同肽链组成,每条肽链含有118个氨基酸,不同来源的NGF β亚基具有较高的同源性。NGF分子中的二硫键及个别氨基酸的被氧化会使其完全丧失活性。本实验对人NGF注射液的稳定性进行了研究,现报告如下: