鸡端粒酶结构与功能比较基因组学研究进展

对鸡端粒酶反转录酶基因和蛋白的分子特性以及其结构与功能进行了综述,为鸡端粒酶的深入研究以及其与肿瘤发生的相关性研究提供参考。

鸡端粒酶RNA基因的克隆

本研究采用扩增条件优化的PCR扩增技术,以MDCC-MSB1细胞基因组DNA为模板扩增出鸡端粒酶RNA(chicken telomerase RNA,chTR)全长基因,克隆到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定后测定序列。序列分析表明所克隆的鸡端粒酶RNA基因全长465bp,其中模板区的11个核苷(5'-CUAACC-CUAAU-3')合成端粒亚单位(TTAGGG)n。chTR基因的克隆为进一步研究chTR在马立克氏病发病过程中的作用以及马立克氏病的发病机制提供可能的序列基础。

鸡端粒酶反转录酶启动子区克隆及序列分析

根据GenBank(AY505015)报道的鸡端粒酶反转录酶序列设计了1对特异性引物,以鸡淋巴瘤细胞(MDCC-MSB1)总核酸为模板进行PCR。PCR产物连接到pMD19-T载体进行测序,通过BLAST对GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得MDCC-MSB1启动子区全长为997 bp,其中G+C占50.78%。与国外报道的端粒酶反转录酶(AY505015)启动子区序列同源性为99.22%。与人端粒酶反转录酶启动子区相比:二者在起始密码子之前约250 bp均有1个E-box,但在chTERT启动子区新增加了4个c-Myb位点,而3个c-Ets2和WT1位点缺失,其他基序二者的分布基本相似。二者启动子区富含CpG岛,延伸到编码区。

鸡的端粒生物学研究

端粒是线性染色体末端的核蛋白"帽子"结构,其长度由端粒酶来维持。端粒对于维持基因组的稳定、防止细胞衰老和肿瘤发生具有重要的作用。鸡是遗传和发育研究的经典模式动物,随着鸡基因组学研究的不断深入,鸡的端粒和端粒酶研究取得了很大进展。文章综述了近年来鸡的端粒生物学研究进展,并提出了未来的研究方向。

小干扰RNA(siRNA)对马立克氏病淋巴瘤细胞chTERT基因表达的抑制

为通过体外转录的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)抑制马立克氏病淋巴瘤细胞(MDCC-MSB1)中鸡端粒酶反转录酶(Chicken telomerase reverse transcriptase,chTERT)mRNA的表达,探讨chTERT在MDCC-MSB1中的作用,本试验设计了针对chTERT mRNA的特异siRNA序列(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),利用T7 RNA聚合酶体外转录系统,制备21 bp的siRNA分子,通过脂质体介导转染MDCC-MSB1细胞,采用荧光实时相对定量RT-PCR方法检测转染细胞chTERT基因mRNA的相对表达量,流式细胞仪测定转染细胞周期变化情况。结果显示,siRNA-1和siRNA-3组在转染24 h后,有效地抑制了chTERT mRNA的表达,抑制率分别为68%和81%。细胞周期检测结果显示,与对照组相比,siRNA-1和siRNA-3转染组细胞在转染后24 h G0/G1期比例显著上升(P<0.05),S期比例显著下降(P<0.01),从而表明chTERT表达量的降低可有效抑制MDCC-MSB1细胞增殖。siRNA可有效抑制MDCC-MSB1细胞中chTERT基因的表达,而chTERT表达量的降低对MDCC-MSB1细胞增殖具有明显的抑制作用。