鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备及影响因素

以鸡腿肉为原料,提取并酶解肌原纤维蛋白得到鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽,采用单因素试验和正交试验研究鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备条件及温度、pH值、金属离子、模拟胃肠液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响。结果表明:鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的最优酶解条件为:在鸡肉肌原纤维蛋白质量浓度为9 g/100 mL的溶液中,加入500 U/g胰蛋白酶,40 ℃酶解3 h,所得脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率高达67.35%,对α-淀粉酶的抑制率为23.0%;温度、pH值和金属离子对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的活性有显著影响(P<0.05),温度为75 ℃、pH值为4、无金属离子存在时,鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率较高;模拟胃液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响不显著(P>0.05),模拟肠液能显著降低脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率(P<0.05),但已经达到预期效果。

卵蛋白源胰脂肪酶抑制肽的制备及其对小鼠体质量控制效果

采用响应面法对卵蛋白源胰脂肪酶抑制肽(PLIPA)的制备工艺进行了研究,经模拟胃肠道消化研究PLIPA的稳定性。C57BL/6J小鼠饲喂高脂饲料40 d后成功建立肥胖模型,灌胃PLIPA 28 d后处死,检测相关指标,研究PLIPA对营养型肥胖小鼠体质量和体形的控制效果。结果表明,卵蛋白质量浓度80 g/L,加入2240 U/g的碱性蛋白酶,在pH 9.0、55℃水解4 h,制备的PLIPA对胰脂肪酶的抑制率最高,为(56.06±2.64)%。经模拟胃液、胃液加肠液消化后,每毫克PLIPA对胰脂肪酶的抑制率分别为0.53%和0.46%,整体抑制率仍较高,稳定性较好。小鼠实验表明,PLIPA复合组的体质量和Lee′s指数显著低于肥胖模型组(P<0.05),处理组的腹部脂肪系数、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等指标均低于肥胖模型组,表明PLIPA对于肥胖小鼠具有减轻体质量和降脂作用,其中PLIPA复合组控制体质量和体形效果最好。

牛乳清蛋白源脂肪酶抑制肽的制备及影响因素研究

以胰脂肪酶和α-淀粉酶的抑制率为指标,研究了牛乳清蛋白源活性肽(APWP)的制备工艺、影响因素及其模拟胃肠道消化。胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制率分别为0.78±0.01%和0.27±0.01%。光照、氧气及模拟胃肠液对APWP的胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制率的影响不显著(P>0.05),相对高温会提高其抑制率。pH7~8适合APWP的保存,Fe^(2+)与Na^(+)可提高APWP对胰脂肪酶和α-淀粉酶的抑制率,K^(+)则相反,Ca^(2+)可提高对α-淀粉酶的抑制率但却降低对胰脂肪酶的抑制率。当酶解液中Na^(+)质量分数为1.0%(w/w)时,APWP对两种酶的抑制率最高。

蛋白核小球藻胰脂肪酶抑制肽的分离纯化、鉴定及其降脂活性

以蛋白核小球藻为原料制备小球藻蛋白酶解物,采用超滤和葡聚糖凝胶对其进行分离纯化,以胰脂肪酶活性抑制率为指标筛选具有降脂活性的肽组分,获得蛋白核小球藻胰脂肪酶抑制肽(记为PES)。通过测定高糖饮食秀丽隐杆线虫体内的脂肪沉积、甘油三酯和总胆固醇水平评价纯化肽PES的降脂活性。采用液相色谱-串联质谱鉴定PES肽序列,结合分子对接技术筛选出潜在的胰脂肪酶抑制肽段,进一步验证合成多肽的胰脂肪酶抑制活性。结果表明,PES具有较好的降脂活性,质量浓度为1 mg/mL时能够抑制高糖饮食线虫体内22.5%的脂肪沉积,降低27.4%甘油三酯和29.4%总胆固醇水平;经鉴定得到999条肽段,进一步筛选得到4条潜在的胰脂肪酶抑制肽段,其中胰脂肪酶活性抑制率最高的肽段是FLGPF,在8 mg/mL时抑制率达50.12%,抑制类型为可逆非竞争性抑制,抑制常数为5.23 mg/mL;分子对接表明FLGPF可与人胰脂肪酶以π-氢键、π-阳离子和氢键作用更好地结合。该研究可为蛋白核小球藻降脂肽的开发利用提供理论参考。

日本血吸虫热激蛋白60来源多肽SJMHE1降低哮喘小鼠脾脏和肺组织髓源性抑制细胞的数量

目的观察日本血吸虫热激蛋白60来源多肽SJMHE1对哮喘小鼠气道炎症的作用及其对髓源性抑制细胞(MDSC)的影响。方法选择6～8周健康雄性BALB/c小鼠,随机分为PBS组、卵清蛋白(OVA)组、 OVA-PBS组, OVA-SJMHE1组。OVA致敏建立支气管哮喘模型, HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化, ELISA测定小鼠血清中OVA特异性IgE水平,流式细胞术测定脾脏MDSC中多形核细胞型MDSC(PMN-MDSC)、单核细胞型MDSC(M-MDSC)所占比例,免疫组织化学染色法检测肺组织MDSC的表达。结果与PBS组比较, OVA、 OVA-PBS组肺组织炎性细胞的浸润增加,血清IgE水平升高、脾脏PMN-MDSC比例及肺组织MDSC数量增加,脾脏M-MDSC比例无明显变化;与OVA、 OVA-PBS组比较, OVA-SJMHE1组肺组织炎症细胞浸润减少、脾脏PMN-MDSC比例及肺组织MDSC数量减少,血清IgE水平及脾脏M-MDSC比例无明显变化。结论SJMHE1可能通过减少MDSC数量,抑制哮喘小鼠气道炎症。

源于海洋贝类蛋白的ACE抑制肽研究现状

ACE抑制肽在血压调节方面起着重要作用,而海洋贝类含有丰富的蛋白质,并具有开发ACE抑制肽的潜能。本文主要简述了源于海洋贝类蛋白源的ACE抑制肽的制备、分离纯化、活性评价及构效关系等方面,以期为海洋贝类蛋白的开发利用提供参考。

鸡骨蛋白源血管紧张素转换酶抑制肽制备技术

（1）技术简介在高血压发病率日益增高的今天，人们越来越关注降血压药物和功能食品的研究和开发。鸡骨蛋白源血管紧张素转换酶抑制剂，是当今治疗高血压和心力衰竭的主要有效药物，人工合成药物的副作用促使食源性鸡骨蛋白源血管紧张素抑制剂的快速发展。而我国对包括鸡骨在内的动物骨的加工利用还比较落后，利用程度也较低，每年都有大量的动物骨被白白浪费或加工成附加值很低的产品。该技术建立了高鸡骨蛋白源血管紧张素抑制活性、高得率、高水解度鸡骨肽的生产工艺。

蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

食源性抗氧化肽以其安全性高,抗氧化能力好,逐渐成为多肽研究领域的热点。本文以蛋清卵黏蛋白胃蛋白酶水解产物为原料,以蛋清源五肽作为研究对象,首先,采用基于不同机理的体外抗氧化活性化学测定方法,对8条蛋清源五肽的抗氧化活性进行评价。DPPH自由基清除活性最强的为五肽CFDVF,浓度为1.0 mmol/L时,其自由基清除率为50.14%±2.1%;ABTS^+·自由基清除能力最强的为五肽VYQFL,浓度为100μmol/L时,TEAC值为(94.66±0.37)μmol/L TE/100μmol/L;ORAC活性最强的为五肽WNWAD,TEAC值为(2.53±0.18)μmol/L TE/μmol/L。接着,利用HEK293细胞氧化损伤模型评价8条五肽的抗氧化活性,其中五肽WNWAD(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp)的氧化应激抑制活性最强。同时,细胞毒性试验证明,五肽本身对细胞无毒副作用,也无促进增殖作用。最后,综合体外化学和细胞试验结果,筛选出WNWAD进行蛋清肽氧化应激抑制机制研究。首先采用试剂盒方法检测细胞内LDH活性和MDA含量,以及抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,结果表明H2O2可导致细胞LDH释放率上升,MDA含量增高,而WNWAD可以抑制脂质过氧化进程,维持细胞膜完整性,提高细胞内LDH活性,降低MDA含量;H2O2可以抑制细胞内抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,而经过WNWAD预处理,可以显著增强其活性;随着肽浓度的升高,3种酶的活性均有所提高,呈浓度依赖型关系,尤其在肽的浓度为1.0μmol/L时,过氧化氢酶(CAT)活力为(20.63±0.51)U/mg蛋白、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力为(179.39±5.73)U/mg蛋白,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)为(33.97±5.02)个活力单位,较对应损伤组的酶活性均有显著性提高(P<0.01);最后,利用蛋白质免疫印迹技术检测细胞内抗氧化酶相关蛋白表达水平,结果表明:WNWAD预处理可在一定程度上恢复H2O2诱导损伤的HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GSH-PX的蛋白表达水平。

沙棘籽粕蛋白肽的稳定性及分离纯化

以沙棘籽粕蛋白为原料,酶解制备具有抑制胰脂肪酶活性的多肽,通过超滤、大孔树脂分离、超高效液相色谱-串联质谱和分子对接对沙棘籽粕蛋白肽(seabuckthorn seed peptides from alcalase hydrolysates,SSPA)进行分离纯化、结构鉴定和筛选。以猪胰脂肪酶(porcine pancreatic lipase,PPL)抑制率为指标,稳定性分析表明,SSPA具有热稳定性和pH值稳定性,适量Na^(+)和Mg^(2+)可显著提高SSPA的PPL抑制活性,SSPA在短期贮藏过程中不会因暴露于空气而影响PPL抑制活性。超高效液相色谱-串联质谱鉴定得到31种多肽,结合分子对接筛选得到6个肽段,小于3 kDa组分中上述寡肽含量分别为VR(2.90%)、FR(7.40%)、RDR(1.10%)、APYR(1.50%)、NLLHR(1.40%)和EEAASLR(1.10%)。固相合成测定其IC_(50)值分别为VR(371.07μg/mL)、FR(243.07μg/mL)、RDR(250.50μg/mL)、APYR(350.41μg/mL)、NLLHR(220.70μg/mL)、EEAASLR(510.55μg/mL)。分子对接表明以上多肽通过氢键、π-π堆积与PPL结合。Pearson相关性分析表明,分子对接结合能与SSPA的PPL抑制率之间存在显著正相关(R^(2)=0.865,P<0.05)。

驼血蛋白胰脂肪酶抑制肽的分离纯化及鉴定

高血脂是心脑血管疾病发病的危险诱因,预防及治疗该病十分重要。食源性生物活性肽作为小分子生物活性物质,天然无毒且副作用小,逐渐成为合成类药物的替代品。文章利用风味蛋白酶对驼血蛋白进行酶解,基于前期单因素试验所得的结果,对驼血蛋白胰脂肪酶抑制肽的制备工艺进行优化,并对所得多肽进行分离纯化,对其胰脂肪酶抑制活性、分子质量分布、肽段序列及结合位点进行研究。结果表明:在风味蛋白酶的用量为3%、酶解时间3 h、酶解温度65 ℃、酶解pH7.5的最佳工艺条件下,酶解驼血蛋白获得的多肽具有良好的胰脂肪酶抑制活性。多肽序列分析显示共鉴定出801种肽段,其中PFF和FPHF为具有显著胰脂肪酶抑制作用的肽段。可以得出:驼血蛋白可以成为功能性食品或保健品中控制高血脂有效成分的潜在来源,研究结果为后期驼血蛋白胰脂肪酶抑制肽类保健食品的开发提供了参考依据。

扇贝活性多肽的酶解工艺研究

本研究选用不同的蛋白酶组合水解扇贝,考察水解物对胰α-淀粉酶、胰脂肪酶和酪氨酸酶的抑制率。结果表明,采用木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶依次水解扇贝,得到的水解液同时具有胰α-淀粉酶、胰脂肪酶和酪氨酸酶的抑制活性,抑制率分别为33.3%、45.7%和69.6%。膜分离得到的200~1 000 Da多肽分子段综合活性最高,此多肽在5~20 mg·mL^(-1)对胰α-淀粉酶、胰脂肪酶和酪氨酸酶的抑制率与多肽浓度呈量效关系,可以作为功能性食品或化妆品的原料。

血清Apelin、Visfatin、Vaspin水平对脑梗死患者预后评估价值

【目的】检测脑梗死患者血清爱帕琳肽(apelin,APLN)、内脂素(visfatin)、内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)水平,并分析三者对脑梗死患者预后的评估价值。【方法】选取2017年5月至2019年5月收治的脑梗死患者42例为脑梗死组,同时选取同期体检健康者68例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测各组研究对象血清APLN、Visfatin、Vaspin水平。【结果】(1)脑梗死患者血清APLN、Visfatin水平明显高于对照组,Vaspin水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)预后不良组患者血清APLN、Visfatin水平明显高于预后良好组,Vaspin水平明显低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Kaplan-Meier生存分析显示,APLN高表达与低表达患者3个月存活率分别为73.68%、95.65%,APLN高表达组脑梗死患者存活率明显低于低表达组;Visfatin高表达与低表达患者3个月存活率分别为75.00%、96.15%,Visfatin高表达组脑梗死患者存活率明显低于低表达组;Vaspin高表达与低表达患者3个月存活率分别为96.15%、75.00%,Vaspin高表达组脑梗死患者存活率明显高于低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)多因素分析显示,APLN高水平、Visfatin高水平、Vaspin低水平是影响脑梗死患者预后的独立危险因素(P<0.05)。【结论】APLN、Visfatin在脑梗死患者血清中呈高水平,Vaspin在脑梗死患者血清中呈低水平,其水平与脑梗死患者近期存活率相关,对脑梗死患者预后评估有一定的价值。